梁小芳，楊 越，徐帥帥，劉 映，褚晗玉，唐 艷，楊 飛，

1南華大學衡陽醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院//湖南省典型環(huán)境污染與健康危害重點實驗室，湖南 衡陽 421001；2中南大學湘雅公共衛(wèi)生學院，湖南 長沙 410000；3蘇州市吳中區(qū)疾病預防與控制中心，江蘇 蘇州215100

微囊藻毒素-LR（MC-LR）是一種在藍藻水華污染中出現(xiàn)頻率較高、產(chǎn)量較大和造成危害較嚴重的藻毒素［1］。MC-LR可通過飲水、食物鏈傳遞及水上活動等方式進入動物體內(nèi)，對動物健康造成嚴重威脅［2,3］。有研究表明腎臟是MC-LR特異性分布的重要靶器官之一［4］，實驗證明小鼠經(jīng)口服、腹腔注射和靜脈MC-LR后，其腎臟中MC-LR含量遠高于其他器官［5］。同時有研究提出MC-LR的暴露可引起腎臟損傷［2,6-11］。有體外實驗表明，MC-LR可以阻滯G2/M期細胞群誘導人胚胎腎和人腎腺癌細胞凋亡［7］。同時在丁卡魚、羅非魚、鯽魚和小鼠的急性毒性試驗中，觀察到MC-LR可以引起這些動物腎臟結構不同程度的病理改變，如腎小體的增大。鮑曼腔變寬并填充嗜酸性物質(zhì)、腎小體鮑曼囊增厚等［8-11］。然而這些研究多為腹腔途徑注射MC-LR后對腎臟的影響，且大都是急性染毒，僅有本課題組的前期做過MC-LR飲水染毒小鼠6月的研究［2］。且并未有研究對MC-LR長期暴露引起腎損傷的作用及其機制進行過探討。

磷脂酰肌醇3-激酶（AKT）信號通路已被確定對癌癥重要的3個主要信號通路之一，是一條細胞內(nèi)信號傳遞的重要轉(zhuǎn)導途徑，它支持新陳代謝，影響細胞周期、存活、凋亡、增殖、生長和血管生成［12］。有研究表明MCLR可以激活PI3K/AKT信號通路。許鵬飛等［13］的結果顯示MC-LR通過激活PI3K/AKT信號通路促進黑色素瘸細胞侵襲和腫瘤轉(zhuǎn)移，同時又有實驗發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT信號通路的激活與腎臟損傷密切相關［14,15］。Hakim等［14］發(fā)現(xiàn)，多囊腎病和腎功能衰竭與PI3K/AKT信號通路的激活有關，Zhao等［15］的研究結果顯示阿拉曼定通過下調(diào)PI3K/AKT信號通路，可以抑制炎癥和細胞凋亡，從而改善腎功能，以此減輕脂多糖誘導的小鼠腎膿毒癥。由此推測MC-LR可以通過激活PI3K/AKT信號通路，從而引起腎損傷。

本文通過飲水染毒MC-LR（0、1、60、120 μg/L）12個月，建立體內(nèi)飲用水長期染毒動物模型，研究長期低劑量暴露MC-LR對腎臟損傷的作用。并利用體外MC-LR染毒與PI3K/AKT抑制劑聯(lián)合染毒模型進一步地探討PI3K/AKT信號通路在MC-LR致腎臟損傷中的作用及其分子機制。本研究可為預防和治療MC-LR引起的慢性腎臟疾病提供科學理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試劑

MC-LR 標準品（北京伊普瑞斯技術開發(fā)有限公司）；人正常胚胎腎細胞株HEK293細胞由中南大學馮湘玲老師贈送；胎牛血清、雙抗和0.25%EDTA胰蛋白酶（Gibco）；DMEM 培養(yǎng)基、PI3K 抑制劑LY294002（Sigma）；血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）、肌酐（Cr）（南京建成生物）；RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和qPCR試劑盒（南京諾唯贊）；PCR引物（上海生工生物）；PI3K抗體、AKT抗體、兔二抗、鼠二抗（三鷹）；p-PI3K抗體、p-AKT抗體（Cell Signaling Technology）。

1.2 方法

1.2.1 小鼠分組與處理 選取健康6～8周齡C57BL/6小鼠20只，體質(zhì)量為20～23 g，購自湖南省斯萊克實驗動物公司，喂養(yǎng)于中南大學湘雅公共衛(wèi)生學院動物中心（許可編號：XYGW-2018-41），所有實驗通過倫理委員會審核（XYGW-2018-41號）。將20只小鼠隨機平均分成4組，給予新配置的染毒水（0、1、60和120 μg/L），2次/周，小鼠MC-LR染毒時間持續(xù)12月。1次/月稱取小鼠體質(zhì)量。小鼠飼養(yǎng)滿12月后，通過摘眼球取血法收集小鼠血液，引頸處死后取出腎臟，稱量并記錄腎臟的絕對質(zhì)量和相對質(zhì)量。

1.2.2 細胞培養(yǎng)及處理 將HEK293細胞置于5%CO2、37 ℃恒溫飽和濕度條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM 培養(yǎng)基，待細胞生長至對數(shù)期時進行實驗。HEK293細胞分為對照組（Control）、10 μmol/L LY294002（PI3K 抑制劑）組、15 μmol/L MC-LR組和MC-LR+LY294002組。在MC-LR染毒處理前1 h加入LY294002，處理24 h后，收集細胞進行后續(xù)實驗。

1.2.3 腎臟組織切片與HE染色 用生理鹽水清洗腎臟后，用刀片劃出厚度小于5 mm的腎臟組織，置于4%的多聚甲醛中室溫固定1～2 d。將組織送至武漢谷歌生物科技有限公司制作HE染色切片。主要步驟為：制作石蠟切片—二甲苯/無水乙醇/75%酒精脫蠟—蘇木素染色—酒精脫水—伊紅染色—無水乙醇/二甲苯脫水—中性樹膠封片。

1.2.4 試劑盒檢測腎臟生化指標 按試劑盒步驟，吸取凍融血清和HEK293細胞上清液于潔凈的200 μL EP管，分別用BUN試劑盒和SCr（Cr）試劑盒測定腎功能指標BUN和SCr（Cr）水平。

1.2.5 qPCR 檢測相關炎癥因子mRNA 的表達 使用Trizol試劑提取小鼠腎臟和HEK293細胞總RNA，用紫外分光光度計檢測RNA濃度和A260/280比值，利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。Primer Premier 5.0軟件中設計引物，然后將設計好的引物NCBI中進行驗證，交由中國上海生工生物合成，引物序列見表1。進行三步法qPCR反應程序：預變性（95 ℃持續(xù)30 s），接著進行40個變性（95 ℃持續(xù)10 s）、退火（60 ℃持續(xù)30 s）、延伸（72 ℃持續(xù)25 s）循環(huán)。在擴增階段完成后分析熔解曲線。用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量，使用GraphPad Prism 6.0軟件繪圖進行。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences used for qRT-PCR

1.2.6 Western blot檢測蛋白表達情況 用含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液提取小鼠腎臟、HEK293細胞蛋白，根據(jù)蛋白分子量大小將蛋白進行分離，之后通過轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)將其轉(zhuǎn)移到固定載體，隨后以轉(zhuǎn)移到固定載體的蛋白質(zhì)為抗原，與相關蛋白的抗體起免疫反應，最后與HRP標記的第二抗體反應，顯影以檢測p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白的表達，最終用Image J進行灰度值分析。

1.2.7 統(tǒng)計分析 利用SPSS 26.0軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析，數(shù)值以均數(shù)±標準差表示，兩組樣本比較選用獨立樣本t檢驗分析，多組樣本比較選用單因素方差分析。雙側(cè)檢驗水平α=0.05。

2 結果

2.1 小鼠的一般情況

實驗小鼠在整個飼養(yǎng)周期內(nèi)，生命體征平穩(wěn)，未出現(xiàn)中途死亡等意外情況。在染毒后期，與對照組相比，60和120 μg/L染毒組小鼠出現(xiàn)毛發(fā)發(fā)黃暗淡，缺少光澤，自主活動度下降。各染毒組小鼠總體體質(zhì)量變化趨勢相近，無明顯異常情況（圖1）。

圖1 MC-LR染毒12個月期間的小鼠體質(zhì)量變化趨勢Fig.1 Weight changes of the mice exposed to MC-LR for 12 months.

2.2 小鼠染毒后腎臟重量及腎臟指數(shù)

實驗小鼠的腎臟系數(shù)計算公式為：腎臟指數(shù)（%）=（雙腎質(zhì)量/體質(zhì)量）×100%MC-LR染毒12個月后，與對照組相比，不同濃度MC-LR組小鼠腎臟質(zhì)量和腎臟指數(shù)變化無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，圖2）

圖2 小鼠雙腎質(zhì)量(A)和小鼠腎臟系數(shù)(B)Fig.2 Bilateral kidney weight(A)and kidney index(B)of the mice in each group.

2.3 MC-LR對小鼠腎臟組織學形態(tài)的影響

在腎皮質(zhì)部分，與對照組相比，1 μg/L染毒組腎小體結構完整，60和120 μg/L染毒組腎小球結構改變，鮑曼空間壓縮，血管球擴張（黃色長框），間質(zhì)可觀察到明顯淋巴細胞浸潤（紅色細箭頭），120 μg/L染毒組更為明顯（圖3A～D）；在腎髓質(zhì)部分，與對照組相比，1 μg/L染毒組腎小管結構完整，60和120 μg/L染毒組腎小管擴張（藍色粗箭頭），間質(zhì)可觀察到淋巴細胞浸潤且隨著染毒劑量升高而逐漸明顯（圖3E～H）；在腎盂部分，隨著染毒濃度的增加，腎盂淋巴細胞浸潤程度逐漸增加（紅色細箭頭）（圖3I～L）。

圖3 MC-LR慢性染毒后小鼠腎臟切片病理學觀察Fig.3 Pathological observation of the renal tissues of the mice with long-term MC-LR exposure(HE staining,original magnification:×200,scale bar=150 μm).A-D: Renal cortex.E-H: Renal medulla.I-L: Renal pelvis.The yellow boxes highlight baumann space compression,the red arrows indicate lymphocytic infiltration,and the blue arrows indicate dilated tubules.

2.4 MC-LR對小鼠血清腎功能指標的影響

MC-LR染毒12個月后，與對照組相比，血清BUN和SCr水平在60和120 μg/L染毒組中升高，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，圖4）。

圖4 MC-LR染毒12個月對小鼠血清腎功能指標的影響Fig.4 Effects of MC-LR exposure for 12 months on serum renal function indexes of the mice.A:BUN levels.B:SCr level.*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001 vs control.

2.5 MC-LR對小鼠腎臟炎癥的影響

與對照組相比，TNF-α和IL-6在60和120 μg/L染毒組中升高，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，圖5A、B）。IL-10在所有染毒組中的相對表達量顯著降低，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，圖5 C）。

圖5 MC-LR對小鼠腎臟炎癥因子的影響Fig.5 Effects of MC-LR exposure on mRNA expression levels of TNF-α(A),IL-6(B)and IL-10(C)in the mice.*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001 vs control.

2.6 MC-LR對小鼠腎臟PI3K/AKT通路的影響

與對照組相比，p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相對表達量在染毒組中上升，且差異均有統(tǒng)計學意義（圖6）。

圖6 MC-LR慢性染毒對小鼠腎臟相關蛋白的影響Fig.6 Effects of chronic MC-LR exposure on renal expressions of proteins in the PI3K/AKT pathway.A:Western blots of the proteins in the PI3K/AKT pathway.B,C: Quantitative analysis of the expression levels of P-PI3K/PI3K and PAKT/AKT proteins.*P＜0.05,**P＜0.01 vs control.,

2.7 PI3K/AKT通路對MC-LR染毒HEK293細胞腎損傷指標以及炎癥因子的影響

與對照組相比，p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相對表達量在MC-LR 染毒組呈上升趨勢。而在與PI3K抑制劑LY294002聯(lián)合處理后，與MC-LR染毒組相比，以上蛋白相對表達量顯著下降，且差異有統(tǒng)計學意義（圖7）。與對照組相比，BUN和Cr在MC-LR染毒組中均表達上調(diào)，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，圖8）。與MC-LR染毒組相比，在PI3K抑制劑處理后的MCLR染毒組中，BUN和Cr的水平顯著下調(diào)，且差異均具有統(tǒng)計學差異。與對照組相比，IL-6、TNF-a在MC-LR染毒組中均表達上調(diào)，IL-10在MC-LR染毒組中均表達下調(diào)，且差異具有統(tǒng)計學意義（圖9）。與MC-LR染毒組相比，在PI3K抑制劑處理后的MC-LR染毒組中，IL-6、TNF-α的表達顯著被抑制，而IL-10的表達被顯著上調(diào)，且差異均具有統(tǒng)計學意義。

圖7 干預PI3K/AKT信號通路后MC-LR對HEK293細胞蛋白表達量的影響Fig.7 Effect of MC-LR on expressions of the related proteins in HEK293 cells after intervention of the PI3K/AKT signaling pathway.A:Western blots of the proteins in the PI3K/AKT pathway.B,C:Quantitative analysis of the expression levels of PPI3K/PI3K and P-AKT/AKT proteins.***P＜0.001 vs control;##P＜0.01,###P＜0.001 vs MC-LR.

圖8 干預PI3K/AKT信號通路后MC-LR對HEK293細胞腎功能指標的影響Fig.8 Effect of MC-LR on BUN and Cr levels in HEK293 cells after intervention of the PI3K/AKT signaling pathway.*P＜0.05,**P＜0.01 vs control;##P＜0.01 vs MC-LR.

圖9 干預PI3K/AKT信號通路后MC-LR對HEK293細胞炎癥因子的影響Fig.9 Effect of MC-LR on mRNA expression levels of TNF-α(A),IL-6(B)and IL-10(C)in HEK293 cells after intervention of PI3K/AKT signaling pathway.**P＜0.01 vs control;#P＜0.05,##P＜0.01 vs MC-LR.

3 討論

慢性腎病被認為是多因素疾病，其發(fā)生與遺傳因素、個人生活飲食行為習慣、病原體感染以及環(huán)境毒素暴露等因素有關［16］，但現(xiàn)有對于MC-LR引起慢性腎損傷的作用及其分子機制研究有限。本研究旨在探討MC-LR慢性染毒造成的腎臟損傷，以及PI3K/AKT信號通路在腎臟損傷中的作用。結果顯示MC-LR可調(diào)控PI3K/AKT信號通路影響腎臟炎癥反應發(fā)生。

在本研究中，為了模擬公眾最常見的MC-LR暴露方式—飲水暴露，我們對40只清潔級的雄性C57BL/6小鼠給予含0、1、60和120 μg/L MC-LR的飲用水，慢性染毒12個月后觀察MC-LR對腎臟毒作用的效果。Go等［17］通過檢測太湖水體和水產(chǎn)品中的微囊藻毒素濃度，評估在太湖梅梁灣（污染區(qū)）長期生活的漁民對微囊藻毒素的環(huán)境吸收程度，估算出在動物模型的MC-LR染毒濃度大于100 μg/L。Fawell等［18］根據(jù)MC-LR亞慢性（13周）灌胃染毒實驗發(fā)現(xiàn)MC-LR的未觀察到有害作用水平（NOAEL）是40 μg/（kg·d），相當于250 μg/L的MC-LR 飲用水濃度［17］。關于MC-LR 慢性染毒的NOAEL數(shù)據(jù)亟需探討，故本研究選擇了120 μg/L（1/2的NOAEL）的濃度作為MC-LR的最高染毒劑量，選擇60 μg/L（1/4的NOAEL）作為另一個染毒劑量。其次，在我國的《地表水環(huán)境質(zhì)量標準》及《生活飲用水衛(wèi)生規(guī)范》中分別規(guī)定了水源水、飲用水中的MC-LR最高濃度限值，即1 μg/L。因此，本研究的最低染毒劑量定為1 μg/L，觀察1 μg/L的MC-LR慢性染毒是否對腎臟產(chǎn)生明顯的損害作用。

3.1 MC-LR染毒對小鼠一般情況的影響

在對小鼠進行長期體質(zhì)量監(jiān)測的過程中發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，各染毒組小鼠的體質(zhì)量增長的整體趨勢變化無明顯差異。與我們前期研究結果相一致［2］。Zhao等［15］和Li等［19］均開展了MC-LR慢性染毒實驗，在小鼠飲用水中加入不同劑量的MC-LR，在連續(xù)染毒12月的過程中未發(fā)現(xiàn)體質(zhì)量明顯改變。此外，本課題組的前期研究結果顯示，與對照組相比，染毒6月后小鼠的腎臟質(zhì)量和腎臟指數(shù)改變也無明顯差異［2］。同時，Qin等［20］通過MCLR染毒小鼠21 d發(fā)現(xiàn)腎臟質(zhì)量和腎臟指數(shù)也無明顯改變。然而Lone等［21］發(fā)現(xiàn)染毒14 d后，小鼠的腎臟質(zhì)量顯著增加。這些結果表明MC-LR長期暴露可能對小鼠體質(zhì)量以及腎臟質(zhì)量影響較小，而短期暴露對小鼠體質(zhì)量和腎臟質(zhì)量影響較大。

3.2 MC-LR誘導腎臟損傷

MC-LR染毒后，小鼠腎臟HE結果顯示，與對照組相比，在60和120 μg/L劑量組，腎小球結構發(fā)生改變，鮑曼間隙壓縮、血管球擴張、間質(zhì)可觀察到明顯淋巴細胞浸潤；腎小管擴張，間質(zhì)也可觀察到明顯淋巴細胞浸潤，且隨染毒劑量增加而逐漸明顯；腎盂部分能觀察到明顯的淋巴細胞浸潤。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，通過不同濃度（1、30、60、90和120 μg/L）MC-LR飲水染毒實驗，腎臟切片結果與本研究結果相近［2］。同時有研究等［22］通過腹腔注射染毒大鼠8個月，組織病理學檢查顯示腎小球塌陷、基底膜增厚、擴張的小管內(nèi)充滿嗜酸性管型。由此說明MC-LR可以導致腎臟結構的損傷，但由于個體差異以及染毒方式的不同，引起的損傷程度也不同。

血清生化檢測發(fā)現(xiàn)腎功能指標發(fā)生改變，與對照組相比，60和120 μg/L劑量組中BUN和SCr呈上升趨勢，同時在體外實驗中發(fā)現(xiàn)MC-LR染毒組BUN和Cr同樣呈上升水平。Germoush［23］和Lone等［23］開展了為期14 d的MC-LR染毒老鼠實驗，前者研究發(fā)現(xiàn)大鼠血清BUN和SCr水平增高，后者也同樣發(fā)現(xiàn)小鼠血清BUN水平升高。然而，在本課題組之前的研究中，小鼠MC-LR慢性染毒達6個月，隨著染毒劑量的增加BUN表現(xiàn)出下降趨勢，而SCr水平?jīng)]有明顯變化［2］。推測出現(xiàn)這種情況是因為急性暴露于MC-LR 后小鼠腎臟產(chǎn)生損傷，BUN和SCr水平上升。而慢性染毒時小鼠有自身保護機制，抑制BUN和SCr的上升并使其處于較低水平。但隨著染毒時間的增加，這種保護機制發(fā)揮作用降低，小鼠腎臟BUN和SCr在高MC-LR染毒組中顯著升高，腎臟損傷逐漸加重。

3.3 MC-LR誘導腎臟炎癥

本研究在體內(nèi)和體外染毒實驗中發(fā)現(xiàn)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生改變，MC-LR 染毒能夠上調(diào)促炎因子TNF-α和IL-6的mRNA表達水平，并抑制抗炎因子IL-10的mRNA表達水平。TNF-α是一種多功能細胞因子，廣泛參與體內(nèi)的病理生理過程，如：增殖、分化、凋亡、自噬等［24］。Guo等［25］研究表明小鼠發(fā)生急性腎臟損傷時，會上調(diào)腎臟TNF-α mRNA的表達。Al-Badrani和Arman等［26,27］研究也發(fā)現(xiàn)暴露MC-LR 后會引起TNF-α的上調(diào)。當機體發(fā)生炎癥反應后，吞噬細胞會作用于凋亡和壞死細胞，其后分泌抗炎因子IL-10，抑制細胞因子和趨化因子。Arman等［27］也觀察到暴露于MC-LR后會導致小鼠腎臟IL-10的表達水平的下調(diào)。Magno等［28］提到IL-6家族成員在糖尿病腎病、腎小球腎炎和梗阻性腎病等腎臟疾病患者的腎組織中上升。綜上，MC-LR可以引起小鼠腎臟發(fā)生炎癥反應，促炎因子和抗炎因子的失衡是腎臟炎癥的重要因素。

3.4 MC-LR激活腎臟PI3K/AKT信號通路

目前沒有對于MC-LR慢性染毒引起小鼠腎臟損傷的PI3K/AKT信號通路改變的研究。我們首次在體內(nèi)MC-LR慢性染毒動物模型中發(fā)現(xiàn)，WB結果表明與對照組相比p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相對表達量在MC-LR染毒組中上升。在體外MC-LR染毒模型中以上蛋白表達量均升高，并激活了PI3K/AKT通路，而在PI3K抑制劑處理后，PI3K/AKT通路被明顯抑制，同時也抑制了炎癥反應。研究結果表明MC-LR的暴露激活了PI3K/AKT通路，與其他研究相一致。Miao等［29］提出，MC-LR激活PI3K/AKT誘導基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）過表達，導致結直腸癌DLD-1細胞和HT-29細胞遷移和侵襲。Chen等［30］指出MC-LR介導的PI3K/AKT通路激活會導致男性生殖功能障礙。Wen等［31］的KEGG 通路分析結果提示MC-LR 激活PI3K/AKT造成肝臟損傷。Zhou等［32］的實驗結果表明PI3K/AKT信號通路的激活在MC-LR誘導的慢性睪丸毒性中起著重要的作用。有研究通過體外實驗，發(fā)現(xiàn)了MCLR暴露激活PI3K/AKT通路誘導小鼠精原細胞惡性轉(zhuǎn)化［33］。同時也有一些研究表明PI3K/AKT信號通路的激活可以導致腎損傷［34-40］。Pan等［34］的實驗證實了氯化釓可以激活PI3K/AKT信號通路促進HEK293人胚胎腎細胞增殖。Wang等［35］進行了為期14 d的靜脈注射牛血清白蛋白大鼠實驗，其研究顯示激活PI3K/AKT信號通路可以引起膜性腎炎，導致膜性腎病腎損傷。Bao等［36］探討了增齡性腎血管硬化的影響因素，其實驗結果提示激活PI3K/AKT信號通路引起腎臟血管內(nèi)皮細胞的衰老和凋亡。Si等［37］開展了為期14 d的草酸鈣結晶小鼠模型實驗，結果顯示抑制PI3K/AKT信號通路可以發(fā)揮抗氧化、抗炎、抗纖維化作用，減輕草酸所致大鼠腎臟損傷。Zhang等［38］在熊果苷對內(nèi)毒素脂多糖誘導大鼠急性腎損傷作用的探討中，發(fā)現(xiàn)抑制PI3K/AKT信號通路可以抑制細胞凋亡以及炎癥反應，從而減輕急性腎損傷。Hu等［39］建立了糖尿病大鼠模型，其結果顯示下調(diào)PI3K/AKT信號通路通過抑制細胞凋亡、炎癥反應以及激活自噬，從而發(fā)揮改善糖尿病腎病的作用。Zhu［40］和Wang等［41］在體外實驗中證明了PI3K/AKT信號通路的下調(diào)可以抑制人腎癌細胞的增殖和凋亡，發(fā)揮抗癌作用。因此，本文結果表明PI3K/AKT信號通路的激活與長期低劑量MC-LR暴露引起的腎臟損傷作用密切相關。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)MC-LR可通過上調(diào)PI3K/AKT信號通路，激活腎臟炎癥反應。MC-LR進入腎細胞后，激活PI3K/AKT信號通路，引起炎癥因子改變，誘導腎細胞炎癥損傷，最終導致腎臟損傷。我們的研究為預防及治療MC-LR引起的腎損傷提供了理論依據(jù)和實驗基礎。