（1.德州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東，253015；2.德州市農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法支隊(duì)；3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院）

目前針對(duì)西瓜枯萎病的防治方法主要有農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治和生物防治等。 農(nóng)業(yè)防治是利用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中的各種管理或栽培措施來(lái)防治病蟲害。 西瓜枯萎病農(nóng)業(yè)防治主要是采取嫁接和輪作，但嫁接技術(shù)難度大，全部依賴于人工，勞動(dòng)力成本高， 且砧木的類型和嫁接方式會(huì)影響果實(shí)品質(zhì)；另外，輪作需要的耕地面積較大，在土地資源有限的情況下難以實(shí)現(xiàn)；而培育西瓜抗枯萎病品種，需要的時(shí)間長(zhǎng)，經(jīng)濟(jì)投入大，且選育出的品種一般不能抗所有的生理小種，適用性較窄。 化學(xué)防治是利用化學(xué)殺菌劑來(lái)防治病原菌， 長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生抗藥性，造成農(nóng)藥殘留，易對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染。生物防治主要是利用對(duì)病原菌有拮抗作用的生防菌來(lái)降低病菌數(shù)量達(dá)到防控目的，因其安全有效，目前已成為新的研究熱點(diǎn)[5]。 近年來(lái)利用生防菌防治西瓜枯萎病的研究取得了較大進(jìn)展，本文將從西瓜枯萎病生防菌的獲得、鑒定、生物防效，存在的問(wèn)題及展望作簡(jiǎn)要綜述，旨在為西瓜枯萎病生防菌的開發(fā)利用提供一定的參考。

1 生防菌的獲得

1.1 生防菌的來(lái)源

1.2 生防菌的分離與篩選

從土壤中獲得的微生物數(shù)量多， 種類復(fù)雜，需要對(duì)其進(jìn)行分離和篩選。微生物的分離主要有稀釋涂布法和平板劃線法。稀釋涂布法的目的是將單一菌株從混雜的微生物群體中分離出來(lái)，首先將土壤進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的土壤溶液分別涂布在培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。 平板劃線法的目的是純化菌種，挑取單一菌落劃線接種在培養(yǎng)基上，保證同一個(gè)菌落是由同一個(gè)細(xì)胞分裂、繁殖產(chǎn)生的后代。 分離純化后的菌株還需經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的篩選才能利用。生防菌的篩選主要使用平板對(duì)峙法。 初篩是在馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基中央放置5～7 mm 的FON 菌餅，在其外周等距接種供試菌株， 培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察菌絲拮抗情況；復(fù)篩則是將初篩得到的拮抗菌經(jīng)過(guò)培養(yǎng)過(guò)濾得到無(wú)菌發(fā)酵液，進(jìn)行平板對(duì)峙試驗(yàn)，也可以使用拮抗菌濾液制成培養(yǎng)基計(jì)算抑菌率。平板對(duì)峙法產(chǎn)生拮抗作用，可能與生防菌所分泌的蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶等酶相關(guān)[16]。 王亞嬌等[17]采取平板對(duì)峙法共選取抑菌帶大于4 mm 的60 個(gè)拮抗菌， 結(jié)合盆栽防效測(cè)試，得到綜合性好的菌株SFJ11。 岳菊等[18]通過(guò)平板對(duì)峙法得到7 株對(duì)4 種病原菌有較強(qiáng)拮抗作用的菌株。 也有研究人員利用肉湯瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行平板對(duì)峙試驗(yàn)， 從海洋海綿共生菌和土壤樣品中初步篩選到具有明顯拮抗活性的菌株共6 株[19]。

2 生防菌的鑒定

經(jīng)過(guò)篩選的生防菌，需要進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定分類，確定其在進(jìn)化中的地位，以便加以利用。微生物傳統(tǒng)的鑒定方法有形態(tài)學(xué)分類法和生理生化鑒定法。形態(tài)學(xué)分類法是通過(guò)顯微鏡觀察，參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[20]和《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[21]等專業(yè)手冊(cè)，基于菌種細(xì)胞的形態(tài)、大小、排列、運(yùn)動(dòng)性、特殊構(gòu)造和染色反應(yīng)及菌落形態(tài)、在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)等形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行鑒定分類的一種方法；生理生化鑒定法是利用化學(xué)反應(yīng)來(lái)測(cè)定微生物的代謝產(chǎn)物，生理生化反應(yīng)常用來(lái)鑒別一些在形態(tài)和其他方面不易區(qū)別的微生物。這2 種方法是最基礎(chǔ)的鑒定方法，適用于所有微生物。

曹云娥等[15]參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》，以菌株WQ-6 單菌落在培養(yǎng)初期邊緣整齊，表面有光澤，培養(yǎng)后期邊緣呈鋸齒狀，四周隆起等形態(tài)學(xué)特征和菌株在淀粉水解、甲基紅試驗(yàn)中呈陽(yáng)性等生理生化試驗(yàn)結(jié)果， 初步鑒定WQ-6 菌株屬芽孢桿菌屬。 王卿[13]參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》，根據(jù)拮抗菌株菌落形態(tài)、革蘭氏染色、芽孢染色菌株以及11項(xiàng)生化檢測(cè)，初步判定所篩拮抗菌Jaas ed2 為多黏類芽孢桿菌，Jaas ed3 為枯草芽孢桿菌。馮翠娥[22]將從砂瓜種植大田土壤中分離篩選得到的拮抗菌進(jìn)行形態(tài)特征觀察和生理生化試驗(yàn)， 初步判斷篩選的菌株XS-4、XS-20-15 均屬芽孢桿菌屬。傳統(tǒng)的鑒定方法是目前最基礎(chǔ)、最廣泛使用的方法，但是存在一些問(wèn)題：對(duì)人員素質(zhì)要求較高，需要由專業(yè)知識(shí)豐富和有長(zhǎng)期鑒別經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)操作， 且傳統(tǒng)方法指標(biāo)多，工作量大，耗時(shí)長(zhǎng)，鑒定準(zhǔn)確性差，一般只能鑒定到屬， 對(duì)于相似菌株容易產(chǎn)生鑒定偏差， 因此菌株鑒定需要結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行。

3 生防菌的生物防效

雖然經(jīng)篩選鑒定出的菌株具有拮抗效果，但不能確保為最優(yōu)的實(shí)用菌株，在植株根部的定殖能力決定其在實(shí)際應(yīng)用中的生防效果，需要進(jìn)行進(jìn)一步的生物防效測(cè)定。測(cè)定拮抗菌的生物防效分為室內(nèi)盆栽試驗(yàn)和大田試驗(yàn)，室內(nèi)盆栽試驗(yàn)一般以西瓜幼苗作為試驗(yàn)材料，在盆栽基質(zhì)中注入拮抗菌和FON液測(cè)試防治效果，一般試驗(yàn)時(shí)間較短，在注入后15 d左右進(jìn)行觀察。 大田試驗(yàn)一般是室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)束后，將較為成熟的拮抗菌制成相應(yīng)的生物制劑，在連作瓜田中進(jìn)行測(cè)試，一般時(shí)間較長(zhǎng)，要進(jìn)行幾茬西瓜的比較。陸楚月等[27]在大棚盆栽試驗(yàn)條件下，以2～3片真葉西瓜苗為試驗(yàn)材料，測(cè)試綠色木霉對(duì)西瓜枯萎病的防控效果，防效為60%；紀(jì)明山等[28]將拮抗木霉和拮抗細(xì)菌制成不用濃度的生物制劑，分別在室內(nèi)和田間進(jìn)行生物防效測(cè)定，防效最高可達(dá)76.78%和76.79%；王麗麗等[29]用灌根法測(cè)試了不同濃度菌株15 發(fā)酵液對(duì)出苗10 d 的西瓜苗的影響，防效為42.3%。 測(cè)定生物防效時(shí)，除了直接接種拮抗菌外，還可將生防菌與有機(jī)肥混合發(fā)酵，或制成生物菌劑施用。

生防菌主要是通過(guò)降低致病菌的數(shù)量來(lái)抑制枯萎病的發(fā)生，也有些生防菌是通過(guò)促進(jìn)西瓜對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收來(lái)提高植株自身抗性，從而達(dá)到抑制枯萎病的效果。 經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，瓜田接種一定量的叢枝菌根菌能有效改善西瓜植株對(duì)氮、磷、硼、鋅等礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的吸收，特別是能促進(jìn)西瓜對(duì)土壤中礦質(zhì)態(tài)磷素的吸收[30]。 研究還表明，有些生防菌是通過(guò)次生代謝物或者提高酶活性來(lái)增強(qiáng)植物抵抗力，西瓜植株根部分泌酚酸和有機(jī)酸的量會(huì)影響枯萎病的發(fā)生率[31]，解淀粉芽孢桿菌通過(guò)次生代謝產(chǎn)物表面活性素誘導(dǎo)植物產(chǎn)生早期免疫反應(yīng)，并增強(qiáng)對(duì)病原菌的抵抗能力[32]。 研究表明，先施加解淀粉芽孢桿菌B6， 能誘導(dǎo)西瓜幼苗SOD 和POD 酶活升高，再施加尖孢鐮刀菌，幼苗中SOD 和POD 酶活會(huì)更早、更強(qiáng)烈地表達(dá)，激發(fā)幼苗抵抗病原菌的潛力[33]。

4 存在的問(wèn)題及展望

生物防治被認(rèn)為是對(duì)環(huán)境最友好的防治措施之一，目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)有很多研究報(bào)道，其中有些生防菌已成功應(yīng)用于生產(chǎn)，例如由水谷欣生物科技有限公司生產(chǎn)的含有枯草芽孢桿菌的西瓜專用菌劑在苗期對(duì)西瓜枯萎病的防效高達(dá)94.9%，由青島地恩地生物科技有限公司生產(chǎn)的放線菌菌劑對(duì)西瓜枯萎病的防效達(dá)到90.9%[1]。 利用拮抗微生物防治西瓜枯萎病，不僅可以降低環(huán)境污染，還能緩解病原菌的抗性，促進(jìn)植物生長(zhǎng)，增加西瓜產(chǎn)量。雖然生防菌因?qū)Νh(huán)境安全無(wú)污染而成為目前研究的熱點(diǎn)，但還是面臨著很多問(wèn)題。例如，同一種生防菌在室內(nèi)抑制效果比大田更穩(wěn)定可靠，原因主要是相對(duì)于室內(nèi)環(huán)境，大田環(huán)境較復(fù)雜，易受土壤條件、環(huán)境變化、微生物種群數(shù)量和種類的影響，使得很多生防菌在大田防治中效果較差或者表現(xiàn)不穩(wěn)定。 此外， 生防菌對(duì)西瓜枯萎病的拮抗機(jī)制并不明確，而且對(duì)其本身的風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)價(jià)較少，獲得的拮抗菌不能很好地應(yīng)用。 針對(duì)這些問(wèn)題，研究者可以在今后的工作中著手篩選穩(wěn)定、 高效并具有廣譜性的菌株，篩選適合生防菌存活的基質(zhì)， 提高生防菌在土壤環(huán)境中的定殖能力和存活時(shí)間。 此外，因拮抗菌無(wú)法直接接種到大田中，可以在不降低拮抗菌生物活性的前提下將其制成可濕性粉劑、顆粒劑、水分散粒劑和種衣劑[34～36]，也可接種到生物有機(jī)肥中[37，38]，提高應(yīng)用效果。 研究者還可以結(jié)合現(xiàn)代生物技術(shù)，加強(qiáng)對(duì)西瓜枯萎病的生防菌研究，注重生防菌的田間防效，發(fā)掘生防菌的防治潛力，提高生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值，逐漸取代部分化學(xué)農(nóng)藥的使用，實(shí)現(xiàn)低成本、安全、無(wú)污染、增產(chǎn)增質(zhì)的目標(biāo)，促進(jìn)西瓜枯萎病的生物防治取得突破性進(jìn)展。