劉瑾，龍運(yùn)峰，羅勇，彭新平

(邵陽(yáng)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 新生兒科，湖南 邵陽(yáng)，422000)

病原微生物感染是新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房最常見(jiàn)的疾病之一[1]。早產(chǎn)兒感染病原微生物后通常病情發(fā)展快，很容易變成重癥感染，加之治療后易出現(xiàn)各種后遺癥，對(duì)新生兒的身心健康產(chǎn)生了嚴(yán)重的威脅[2]。血液病原微生物培養(yǎng)是早產(chǎn)兒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其存在陽(yáng)性率低和結(jié)果滯后的缺點(diǎn)[3]。目前還沒(méi)有理想的診斷方法應(yīng)用在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染上，急需尋找新的方法對(duì)早產(chǎn)兒早期病原微生物感染進(jìn)行診斷并及時(shí)給予治療，提高早產(chǎn)兒病原微生物感染的治愈率。近年來(lái)，早產(chǎn)兒胃液病原微生物檢查對(duì)診斷早產(chǎn)兒是否有早發(fā)型病原微生物感染備受關(guān)注[4-5]。伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，PCR技術(shù)被引入到病原微生物學(xué)檢測(cè)中[6-7]。本研究分析胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染中的檢測(cè)效果，比較早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測(cè)與血液病原微生物培養(yǎng)的靈敏度和特異性，探討胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期感染診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

從2020年8月至2021年4月在邵陽(yáng)學(xué)院附屬第一醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房中收集147例早產(chǎn)兒(胎齡<37周)，根據(jù)患兒的圍生期病史、住院后的臨床表現(xiàn)以及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果分為感染組(92例)和非感染組(55例)。兩組胎齡、出生體重以及性別沒(méi)有明顯差異。兩組早產(chǎn)兒在出生1 h內(nèi)未開(kāi)奶前收集胃液和血液進(jìn)行病原微生物核酸檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行血液病原菌培養(yǎng)與鑒定檢查，并記錄相對(duì)應(yīng)結(jié)果。參與者其父母對(duì)所有樣本的收集和檢查均知情并簽署知情同意書(shū)。本研究經(jīng)邵陽(yáng)學(xué)院附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 早產(chǎn)兒胃液收集方法

早產(chǎn)兒在出生后的1 h內(nèi)開(kāi)奶前，將無(wú)菌胃管小心地置入早產(chǎn)兒胃部，用注射器收集胃液0.5 mL用于病原微生物核酸檢測(cè)。

1.3 血液病原微生物培養(yǎng)與鑒定

在無(wú)菌條件下進(jìn)行操作，采集出生后1 h內(nèi)開(kāi)奶前早產(chǎn)兒的股靜脈血1 mL，置于無(wú)菌培養(yǎng)瓶中，應(yīng)用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀器及相應(yīng)配套的血培養(yǎng)瓶(生物梅里埃)，對(duì)采集后的血液進(jìn)行培養(yǎng)，若5 d內(nèi)檢測(cè)到細(xì)菌株則為陽(yáng)性，5 d內(nèi)未檢測(cè)到細(xì)菌株則為陰性。同時(shí)采用法國(guó)梅里埃公司的API病原微生物鑒定系統(tǒng)對(duì)不同病原微生物株進(jìn)行分析鑒定。菌株的培養(yǎng)、分離、鑒定均參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第4版)》的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施[8]。

1.4 胃液病原微生物核酸檢測(cè)

病原微生物基因分型檢測(cè)采用呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑盒(湖南圣湘生物科技股份有限公司)進(jìn)行檢測(cè)，采用ABI7500熒光定量PCR(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，ABI)進(jìn)行擴(kuò)增定檢測(cè)。按照儀器和試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)范進(jìn)行所有操作。為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。該病原微生物基因分型檢測(cè)試劑盒可對(duì)以下25種病原微生物核酸進(jìn)行定性檢測(cè)：流感病毒、結(jié)核桿菌核酸、副流感病毒Ⅰ、人鼻病毒核酸、呼吸道腺病毒核酸、乙型流感病毒核酸、甲型流感病毒通用型核酸、金黃色葡萄球菌核酸、銅綠假單胞菌核酸、流感嗜血桿菌核酸、嗜肺軍團(tuán)菌核酸、肺炎支原體核酸、百日咳桿菌核酸、肺炎克雷伯桿菌核酸、肺炎鏈球菌核酸、巨細(xì)胞病毒核酸、白色念珠菌核酸、鮑曼不動(dòng)桿菌核酸、肺炎衣原體核酸、人偏肺病毒核酸、博卡病毒核酸、EB病毒核酸、耶氏肺孢子蟲(chóng)核酸、呼吸道合胞病毒核酸、副流感病毒Ⅱ核酸。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用例(%)表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 非感染組和感染組中病原微生物結(jié)果

采用血液病原微生物培養(yǎng)和胃液病原微生物核酸檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)92例感染組樣本中分別有39例和58例陽(yáng)性，55例非感染組樣本中分別有5例和2例陽(yáng)性。檢測(cè)結(jié)果表明，感染組病原微生物感染比非感染組高，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(病原微生物培養(yǎng)：χ2=16.67，P<0.001；病原微生物核酸檢測(cè)：χ2=48.70，P<0.001)，見(jiàn)表1。

2.2 病原微生物核酸檢測(cè)的診斷價(jià)值

與臨床診斷相比，病原微生物核酸檢測(cè)的靈敏度和特異度為63.04%和96.36%；假陽(yáng)性率和陽(yáng)性率分別為3.64%和36.96%，見(jiàn)表2。與臨床診斷相比，病原微生物培養(yǎng)的靈敏度和特異度為42.39%和90.09%；假陽(yáng)性率和陽(yáng)性率分別為57.61%和9.09%，見(jiàn)表3。在非感染組中，病原微生物培養(yǎng)和病原微生物核酸檢測(cè)陽(yáng)性樣本差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.610，P=0.435)。與病原微生物培養(yǎng)相比，感染組病原微生物核酸檢測(cè)發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性樣本高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.37，P=0.004)。結(jié)果表明，病原微生物核酸檢測(cè)的效果要好于病原微生物培養(yǎng)的檢測(cè)效果。

表2 早產(chǎn)兒臨床診斷與核酸檢測(cè)對(duì)比

表3 早產(chǎn)兒臨床診斷與病原微生物培養(yǎng)對(duì)比

2.3 發(fā)生感染的早產(chǎn)兒病原微生物分布情況

92例早產(chǎn)兒中病原微生物培養(yǎng)有39例出現(xiàn)陽(yáng)性感染，病原微生物核酸檢測(cè)也均為陽(yáng)性，而病原微生物培養(yǎng)為陰性但是病原微生物核酸檢測(cè)為陽(yáng)性的有19例。兩組病原微生物分布情況結(jié)果見(jiàn)表4。感染組中病原微生物以巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌和金黃色葡萄球菌為主。

表4 早產(chǎn)兒感染組中病原微生物分布情況

3 討論

早產(chǎn)兒早期感染一般發(fā)生在出生后的3 d之內(nèi)，且病情發(fā)展較為迅速，癥狀隱匿，可能危及多個(gè)器官和系統(tǒng)，臨床中早產(chǎn)兒早期感染病死率相當(dāng)高[9-10]。因此，越早確定早產(chǎn)兒的帶病原微生物情況，越能對(duì)圍生期高危因素與新生兒早期病原微生物感染關(guān)系進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估，從而合理進(jìn)行早期干預(yù)，降低早產(chǎn)兒早期病原微生物感染的發(fā)病率，改善其預(yù)后[11-12]。然而，目前臨床上對(duì)于早產(chǎn)兒早期病原微生物感染的診斷尚無(wú)理想的方法，早產(chǎn)兒胃液在未開(kāi)奶之前為無(wú)菌狀態(tài)，若早產(chǎn)兒在宮內(nèi)出現(xiàn)感染，吞咽羊水，那么早產(chǎn)兒未開(kāi)奶之前的胃液檢測(cè)具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值，所以，胃液檢查越來(lái)越受到臨床醫(yī)師的重視[13-14]。血液細(xì)菌培養(yǎng)是臨床診斷菌血癥的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但血培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警后，需分離純化病原微生物進(jìn)行鑒定，因而存在易污染、結(jié)果滯后、假陰性率高、病原微生物種譜類(lèi)窄(如病毒)等不足，加之血液采集屬于有創(chuàng)收集，對(duì)采血量有要求，沒(méi)辦法為早期臨床快速診斷提供參考[15-16]。

近年來(lái)，分子診斷技術(shù)飛速發(fā)展，病原微生物診斷中也引入了核酸PCR檢測(cè)技術(shù)，該檢測(cè)方法靈敏度高、特異性好、耗時(shí)少，從基因組抽提到PCR擴(kuò)增整個(gè)過(guò)程只需3至4 h，為臨床早產(chǎn)兒早期病原微生物感染診斷提供了更加方便快捷的手段[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，病原微生物核酸檢測(cè)的效果(靈敏度和特異度分別為63.04%和96.36%)要顯著好于病原微生物培養(yǎng)的檢測(cè)效果(靈敏度和特異度分別為42.39%和90.09%)，表明早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期細(xì)菌感染診斷中效果更好。同時(shí)病原微生物核酸檢測(cè)也能對(duì)病原微生物進(jìn)行分型，感染組中病原微生物以巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌和金黃色葡萄球菌為主。因此，胃液的病原微生物核酸檢測(cè)具有很大的應(yīng)用前景。加之該方法屬于無(wú)創(chuàng)操作，相較于血液培養(yǎng)，對(duì)早產(chǎn)兒來(lái)說(shuō)可減輕反復(fù)穿刺痛苦，減少早產(chǎn)兒醫(yī)源性失血；對(duì)其家長(zhǎng)來(lái)說(shuō)減輕醫(yī)療費(fèi)用的支出；對(duì)臨床來(lái)說(shuō)可以快速得到相應(yīng)病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果，為臨床使用抗菌或抗病毒藥物提供指導(dǎo)依據(jù)；可以避免早產(chǎn)兒出現(xiàn)嚴(yán)重?cái)⊙Y、顱內(nèi)感染等重癥感染性疾病，改善早產(chǎn)兒的預(yù)后，提高其生命質(zhì)量。但是本檢測(cè)手段主要針對(duì)存在宮內(nèi)感染暫未進(jìn)行喂養(yǎng)的早產(chǎn)兒，對(duì)于晚期感染的新生兒不適用。

研究證實(shí)，與血液病原微生物培養(yǎng)檢測(cè)相比，早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染診斷中具有良好的效果，具有無(wú)創(chuàng)、快速的特點(diǎn)，在早產(chǎn)兒早期感染中具有一定的診斷價(jià)值，可以為臨床使用抗菌或抗病毒藥物提供指導(dǎo)。