劉瑾,龍運(yùn)峰,羅勇,彭新平
(邵陽(yáng)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 新生兒科,湖南 邵陽(yáng),422000)
病原微生物感染是新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房最常見(jiàn)的疾病之一[1]。早產(chǎn)兒感染病原微生物后通常病情發(fā)展快,很容易變成重癥感染,加之治療后易出現(xiàn)各種后遺癥,對(duì)新生兒的身心健康產(chǎn)生了嚴(yán)重的威脅[2]。血液病原微生物培養(yǎng)是早產(chǎn)兒感染的金標(biāo)準(zhǔn),但是其存在陽(yáng)性率低和結(jié)果滯后的缺點(diǎn)[3]。目前還沒(méi)有理想的診斷方法應(yīng)用在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染上,急需尋找新的方法對(duì)早產(chǎn)兒早期病原微生物感染進(jìn)行診斷并及時(shí)給予治療,提高早產(chǎn)兒病原微生物感染的治愈率。近年來(lái),早產(chǎn)兒胃液病原微生物檢查對(duì)診斷早產(chǎn)兒是否有早發(fā)型病原微生物感染備受關(guān)注[4-5]。伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,PCR技術(shù)被引入到病原微生物學(xué)檢測(cè)中[6-7]。本研究分析胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染中的檢測(cè)效果,比較早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測(cè)與血液病原微生物培養(yǎng)的靈敏度和特異性,探討胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期感染診斷中的價(jià)值。
從2020年8月至2021年4月在邵陽(yáng)學(xué)院附屬第一醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房中收集147例早產(chǎn)兒(胎齡<37周),根據(jù)患兒的圍生期病史、住院后的臨床表現(xiàn)以及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果分為感染組(92例)和非感染組(55例)。兩組胎齡、出生體重以及性別沒(méi)有明顯差異。兩組早產(chǎn)兒在出生1 h內(nèi)未開(kāi)奶前收集胃液和血液進(jìn)行病原微生物核酸檢測(cè),同時(shí)進(jìn)行血液病原菌培養(yǎng)與鑒定檢查,并記錄相對(duì)應(yīng)結(jié)果。參與者其父母對(duì)所有樣本的收集和檢查均知情并簽署知情同意書(shū)。本研究經(jīng)邵陽(yáng)學(xué)院附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。
早產(chǎn)兒在出生后的1 h內(nèi)開(kāi)奶前,將無(wú)菌胃管小心地置入早產(chǎn)兒胃部,用注射器收集胃液0.5 mL用于病原微生物核酸檢測(cè)。
在無(wú)菌條件下進(jìn)行操作,采集出生后1 h內(nèi)開(kāi)奶前早產(chǎn)兒的股靜脈血1 mL,置于無(wú)菌培養(yǎng)瓶中,應(yīng)用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀器及相應(yīng)配套的血培養(yǎng)瓶(生物梅里埃),對(duì)采集后的血液進(jìn)行培養(yǎng),若5 d內(nèi)檢測(cè)到細(xì)菌株則為陽(yáng)性,5 d內(nèi)未檢測(cè)到細(xì)菌株則為陰性。同時(shí)采用法國(guó)梅里埃公司的API病原微生物鑒定系統(tǒng)對(duì)不同病原微生物株進(jìn)行分析鑒定。菌株的培養(yǎng)、分離、鑒定均參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第4版)》的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施[8]。
病原微生物基因分型檢測(cè)采用呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑盒(湖南圣湘生物科技股份有限公司)進(jìn)行檢測(cè),采用ABI7500熒光定量PCR(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司,ABI)進(jìn)行擴(kuò)增定檢測(cè)。按照儀器和試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)范進(jìn)行所有操作。為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。該病原微生物基因分型檢測(cè)試劑盒可對(duì)以下25種病原微生物核酸進(jìn)行定性檢測(cè):流感病毒、結(jié)核桿菌核酸、副流感病毒Ⅰ、人鼻病毒核酸、呼吸道腺病毒核酸、乙型流感病毒核酸、甲型流感病毒通用型核酸、金黃色葡萄球菌核酸、銅綠假單胞菌核酸、流感嗜血桿菌核酸、嗜肺軍團(tuán)菌核酸、肺炎支原體核酸、百日咳桿菌核酸、肺炎克雷伯桿菌核酸、肺炎鏈球菌核酸、巨細(xì)胞病毒核酸、白色念珠菌核酸、鮑曼不動(dòng)桿菌核酸、肺炎衣原體核酸、人偏肺病毒核酸、博卡病毒核酸、EB病毒核酸、耶氏肺孢子蟲(chóng)核酸、呼吸道合胞病毒核酸、副流感病毒Ⅱ核酸。
采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料采用例(%)表示,比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
采用血液病原微生物培養(yǎng)和胃液病原微生物核酸檢測(cè),發(fā)現(xiàn)92例感染組樣本中分別有39例和58例陽(yáng)性,55例非感染組樣本中分別有5例和2例陽(yáng)性。檢測(cè)結(jié)果表明,感染組病原微生物感染比非感染組高,兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(病原微生物培養(yǎng):χ2=16.67,P<0.001;病原微生物核酸檢測(cè):χ2=48.70,P<0.001),見(jiàn)表1。
與臨床診斷相比,病原微生物核酸檢測(cè)的靈敏度和特異度為63.04%和96.36%;假陽(yáng)性率和陽(yáng)性率分別為3.64%和36.96%,見(jiàn)表2。與臨床診斷相比,病原微生物培養(yǎng)的靈敏度和特異度為42.39%和90.09%;假陽(yáng)性率和陽(yáng)性率分別為57.61%和9.09%,見(jiàn)表3。在非感染組中,病原微生物培養(yǎng)和病原微生物核酸檢測(cè)陽(yáng)性樣本差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.610,P=0.435)。與病原微生物培養(yǎng)相比,感染組病原微生物核酸檢測(cè)發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性樣本高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.37,P=0.004)。結(jié)果表明,病原微生物核酸檢測(cè)的效果要好于病原微生物培養(yǎng)的檢測(cè)效果。
表2 早產(chǎn)兒臨床診斷與核酸檢測(cè)對(duì)比
表3 早產(chǎn)兒臨床診斷與病原微生物培養(yǎng)對(duì)比
92例早產(chǎn)兒中病原微生物培養(yǎng)有39例出現(xiàn)陽(yáng)性感染,病原微生物核酸檢測(cè)也均為陽(yáng)性,而病原微生物培養(yǎng)為陰性但是病原微生物核酸檢測(cè)為陽(yáng)性的有19例。兩組病原微生物分布情況結(jié)果見(jiàn)表4。感染組中病原微生物以巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌和金黃色葡萄球菌為主。
表4 早產(chǎn)兒感染組中病原微生物分布情況
早產(chǎn)兒早期感染一般發(fā)生在出生后的3 d之內(nèi),且病情發(fā)展較為迅速,癥狀隱匿,可能危及多個(gè)器官和系統(tǒng),臨床中早產(chǎn)兒早期感染病死率相當(dāng)高[9-10]。因此,越早確定早產(chǎn)兒的帶病原微生物情況,越能對(duì)圍生期高危因素與新生兒早期病原微生物感染關(guān)系進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估,從而合理進(jìn)行早期干預(yù),降低早產(chǎn)兒早期病原微生物感染的發(fā)病率,改善其預(yù)后[11-12]。然而,目前臨床上對(duì)于早產(chǎn)兒早期病原微生物感染的診斷尚無(wú)理想的方法,早產(chǎn)兒胃液在未開(kāi)奶之前為無(wú)菌狀態(tài),若早產(chǎn)兒在宮內(nèi)出現(xiàn)感染,吞咽羊水,那么早產(chǎn)兒未開(kāi)奶之前的胃液檢測(cè)具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值,所以,胃液檢查越來(lái)越受到臨床醫(yī)師的重視[13-14]。血液細(xì)菌培養(yǎng)是臨床診斷菌血癥的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但血培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警后,需分離純化病原微生物進(jìn)行鑒定,因而存在易污染、結(jié)果滯后、假陰性率高、病原微生物種譜類(lèi)窄(如病毒)等不足,加之血液采集屬于有創(chuàng)收集,對(duì)采血量有要求,沒(méi)辦法為早期臨床快速診斷提供參考[15-16]。
近年來(lái),分子診斷技術(shù)飛速發(fā)展,病原微生物診斷中也引入了核酸PCR檢測(cè)技術(shù),該檢測(cè)方法靈敏度高、特異性好、耗時(shí)少,從基因組抽提到PCR擴(kuò)增整個(gè)過(guò)程只需3至4 h,為臨床早產(chǎn)兒早期病原微生物感染診斷提供了更加方便快捷的手段[17]。本研究發(fā)現(xiàn),病原微生物核酸檢測(cè)的效果(靈敏度和特異度分別為63.04%和96.36%)要顯著好于病原微生物培養(yǎng)的檢測(cè)效果(靈敏度和特異度分別為42.39%和90.09%),表明早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期細(xì)菌感染診斷中效果更好。同時(shí)病原微生物核酸檢測(cè)也能對(duì)病原微生物進(jìn)行分型,感染組中病原微生物以巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌和金黃色葡萄球菌為主。因此,胃液的病原微生物核酸檢測(cè)具有很大的應(yīng)用前景。加之該方法屬于無(wú)創(chuàng)操作,相較于血液培養(yǎng),對(duì)早產(chǎn)兒來(lái)說(shuō)可減輕反復(fù)穿刺痛苦,減少早產(chǎn)兒醫(yī)源性失血;對(duì)其家長(zhǎng)來(lái)說(shuō)減輕醫(yī)療費(fèi)用的支出;對(duì)臨床來(lái)說(shuō)可以快速得到相應(yīng)病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果,為臨床使用抗菌或抗病毒藥物提供指導(dǎo)依據(jù);可以避免早產(chǎn)兒出現(xiàn)嚴(yán)重?cái)⊙Y、顱內(nèi)感染等重癥感染性疾病,改善早產(chǎn)兒的預(yù)后,提高其生命質(zhì)量。但是本檢測(cè)手段主要針對(duì)存在宮內(nèi)感染暫未進(jìn)行喂養(yǎng)的早產(chǎn)兒,對(duì)于晚期感染的新生兒不適用。
研究證實(shí),與血液病原微生物培養(yǎng)檢測(cè)相比,早產(chǎn)兒胃液病原微生物核酸檢測(cè)在早產(chǎn)兒早期病原微生物感染診斷中具有良好的效果,具有無(wú)創(chuàng)、快速的特點(diǎn),在早產(chǎn)兒早期感染中具有一定的診斷價(jià)值,可以為臨床使用抗菌或抗病毒藥物提供指導(dǎo)。
邵陽(yáng)學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)2022年5期