李春霞，趙琳，安琪，郜茜，馬雪芹，綻永華，楊生森，李源化，王學(xué)紅

青海大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，西寧 8100010

胃癌是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，是全球重大的公共衛(wèi)生問題。全球每年新發(fā)胃癌病例約120萬例，中國每年新發(fā)胃癌病例41萬例，病死約30萬例[1]。從正常胃黏膜演變?yōu)槲赴┦莻€復(fù)雜過程，基因分子信號的異常改變在這個演變過程中發(fā)揮著重要作用。轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）信號通路是惡性腫瘤中最常發(fā)生改變的信號通路之一，可分為絲氨酸/蘇氨酸激酶受體信號通路及非絲氨酸/蘇氨酸激酶受體信號通路兩種，它們在參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化等方面發(fā)揮著重要作用[2]。轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)基因（transforming growth factor β induced gene，TGFβI）是 TGF-β信號通路下游重要的目標(biāo)基因之一，也稱為βig-h3基因，最初由肺腺癌細(xì)胞株A459被TGF-β1刺激克隆而來，位于染色體5q3上[3]。TGFβI在不同腫瘤中具有啟動或抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的雙重特性，研究表明，TGFβI在乳腺癌、卵巢癌、骨肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等腫瘤中發(fā)揮抑癌作用，而在食管癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌、腎細(xì)胞癌等腫瘤中發(fā)揮促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用[4]，但在胃癌中的具體作用及其與幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染關(guān)系的研究較少。因此，本研究以TGFβI為研究重點，初步探討TGFβI在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，并探索TGFβI與Hp感染的關(guān)系，為Hp導(dǎo)致胃癌可能的致病機制提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019年6月至2021年1月青海大學(xué)附屬醫(yī)院收治的50例胃癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)胃鏡及病理學(xué)檢查確診為胃癌；②術(shù)前未經(jīng)過放化療、分子靶向治療、中醫(yī)治療等抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＞75歲；②妊娠期及哺乳期女性；③近4周內(nèi)服用抗Hp藥物及非甾體抗炎藥；④合并其他臟器或組織惡性腫瘤；⑤合并心、肝、腎功能不全。50例胃癌患者中，男30例，女20例；年齡27～74歲，中位年齡63歲；美國癌癥聯(lián)合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）/國 際 抗 癌 聯(lián) 盟（International Union for Cancer Control，UICC）TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期33例；腫瘤大?。骸? cm 15例，＞5 cm 35例；分化程度：中低分化34例，高分化16例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例；采用13C呼氣實驗來判定Hp的感染情況：Hp陽性30例，Hp陰性20例。同期選取青海大學(xué)附屬醫(yī)院收治的52例慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）患者及54例慢性淺表性胃炎（chronic superficial gastritis，CSG）患者。CAG患者中，男31例，女21例；年齡32～74歲，中位年齡58歲；Hp陽性25例，Hp陰性27例。CSG患者中，男30例，女24例；年齡24～70歲，中位年齡49歲；Hp陽性25例，Hp陰性29例。3組患者性別、年齡、Hp感染情況比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）檢測TGFβImRNA的相對表達(dá)量

經(jīng)胃鏡活檢取胃癌患者的胃癌組織，取CAG患者及CSG患者的胃黏膜組織，-80℃冰箱保存待檢。嚴(yán)格按照Trizol說明書提取組織RNA，紫外分光光度儀測定RNA濃度和純度，瓊脂糖電泳觀察RNA完整性。以總RNA為模板，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)說明書合成互補DNA（complementary DNA，cDNA）。將cDNA進行qPCR，反應(yīng)體系20μl，分別為TaqMan Fast qPCR Master Mix（2×）10 μl，正向引物（10 μmol/L）0.5 μl，反向引物（10 μmol/L）0.5μl，探針P（10 μmol/L）0.5 μl，二次蒸餾水6.5 μl，模板cDNA 2 μl。反應(yīng)條件：94 ℃ 3 min，94 ℃ 5 s，57℃15 s，72℃30 s，45個循環(huán)。每個樣本重復(fù)3次，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算TGFβI mRNA的相對表達(dá)量。TGFβI正向引物 5'-TGGGTGTGAACCATGAGAAGT-3'，反 向 引物 5'-TGAGTCCTTCCACGATACCAA3'；GAPDH 正向引物5'-GGGACATGCTCACTATCAACG-3'，反向引物5'-TGGCTGAGTCTGGGATGAGTA-3'。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，偏態(tài)分布且方差不齊的計量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗，三組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗，三組間兩兩比較采用Nemenyi檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TGFβImRNA 相對表達(dá)量的比較

胃癌組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量高于CAG組織和CSG組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），CAG組織與CSG組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

表1 不同胃黏膜組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量的比較[M（P25，P75）]

2.2 不同Hp 感染情況不同胃黏膜組織中TGFβI mRNA 相對表達(dá)量的比較

Hp陽性患者中，胃癌組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量高于CAG組織和CSG組織，胃癌組織、CAG組織和CSG組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量均高于Hp陰性患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；CAG組織與CSG組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。Hp陰性患者中，胃癌組織、CAG組織和CSG組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 不同Hp感染情況不同胃黏膜組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量的比較[M（P25，P75）]

2.3 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量的比較

不同性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況胃癌患者胃癌組織中TGFβI mRNA的相對表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。中低分化、浸潤深度為T3～4、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者胃癌組織中TGFβI mRNA的相對表達(dá)量分別高于高分化、浸潤深度為T1～2、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表3 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量的比較（n=50）

3 討論

目前的研究發(fā)現(xiàn)，TGFβI可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、遷移、增殖、凋亡及炎癥等發(fā)揮促癌或抑癌作用[5]。Ozawa等[6]研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗狀細(xì)胞癌組織中TGFβI高表達(dá)，且在食管鱗狀細(xì)胞癌KMST細(xì)胞系中敲除TGFβI基因后，KMST細(xì)胞轉(zhuǎn)移及侵襲能力受到抑制。Ma等[7]研究發(fā)現(xiàn)，Ⅲ～Ⅳ期結(jié)腸癌患者結(jié)腸癌組織中TGFβI陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者；此外，若TGFβI表達(dá)受到抑制，腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移現(xiàn)象明顯減少。Guo等[8]研究發(fā)現(xiàn)，TGFβI在肝癌細(xì)胞中呈高表達(dá)且能夠促進肝癌細(xì)胞的黏附及侵襲。

為分析TGFβI與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，本研究采用定量qPCR法分別檢測了胃癌組織、CAG組織和CSG組織中TGFβI mRNA的相對表達(dá)量，并分析TGFβI與Hp感染及胃癌患者臨床特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，中低分化、浸潤深度為 T3～4、TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者胃癌組織中TGFβI mRNA的相對表達(dá)量分別高于高分化、浸潤深度為T1～2、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期患者。表明胃黏膜組織中TGFβI表達(dá)上調(diào)與胃癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，且高表達(dá)的TGFβI可能促進了胃癌細(xì)胞的浸潤及遷移。

本研究結(jié)果顯示，Hp陽性患者中，胃癌組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量明顯高于CAG組織和CSG組織，胃癌組織、CAG組織和CSG組織中TGFβI mRNA相對表達(dá)量均高于Hp陰性患者。表明Hp感染可能通過一定的機制促進了胃黏膜組織中TGFβI的表達(dá)，從而促進胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。Hp感染胃黏膜上皮細(xì)胞后，能夠通過某種機制誘導(dǎo)TGFβI表達(dá)上調(diào)，而高表達(dá)的TGFβI可通過作用于某種下游靶基因促進胃癌的發(fā)生，亦可能通過作用于其他靶基因抑制胃癌細(xì)胞的分化并促進其遷移，從而促進胃癌進一步發(fā)展，其具體機制還有待進一步研究，這將為探索Hp導(dǎo)致胃癌的致病機制提供理論和實驗依據(jù)。目前，胃鏡檢查仍是臨床發(fā)現(xiàn)胃癌的主要手段，若進一步擴大樣本量，在此基礎(chǔ)上分析TGFβI的表達(dá)水平及臨床意義，結(jié)合其他研究發(fā)現(xiàn)的在胃癌發(fā)生發(fā)展中變化的基因，就可以在胃鏡檢查的同時對胃癌組織進行相關(guān)基因檢測，從而在胃癌的早期診斷、治療策略及預(yù)后判斷方面提供幫助。

綜上所述，胃癌組織中TGFβI高表達(dá)，且其表達(dá)可能與胃癌患者分化程度、浸潤深度、TNM分期有關(guān)，Hp感染可能通過一定的機制促進TGFβI的表達(dá)，進而促進胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。