程 鳳，金圣皓，王夢軍，孫久惠，曹斌驗，胡 安，游平飛，劉 穎，馬瑞珩

1.大連醫(yī)科大學(xué)研究生院，遼寧 大連 116027 ；2.中國醫(yī)科大學(xué)，遼寧 沈陽 110122 ；3.北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科，遼寧 沈陽 110016;4.錦州醫(yī)科大學(xué)北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地,遼寧 沈陽 110016 ；5.中國醫(yī)科大學(xué) 北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，遼寧 沈陽 110016

失血是創(chuàng)傷患者死亡的主要原因，血管損傷性出血占較大部分［1］。目前，血管損傷主要的治療方式是手術(shù)阻斷血流，但由于戰(zhàn)創(chuàng)傷的環(huán)境特殊性，無法立刻進(jìn)行手術(shù)，更多的是使用止血帶、止血材料等措施進(jìn)行干預(yù)，為患者爭取治療時間［2］。止血材料由于其止血性能、便捷等特性，在眾多止血方式中脫穎而出。臨床主要研究的止血材料包括殼聚糖類、膠原類、海藻酸鹽類、氧化纖維素和氧化再生纖維素類等［3］。殼聚糖是由甲殼素脫乙酰化后獲得的一種生物多糖聚合物，其分子表面的氨基陽離子可與紅細(xì)胞、血小板表面的陰離子相互作用，促進(jìn)紅細(xì)胞和血小板粘附，形成血栓，堵塞創(chuàng)面，達(dá)到止血目的［4-6］。然而，殼聚糖因其分子內(nèi)氫鍵和大分子空間構(gòu)型而不易溶于水和有機溶劑,應(yīng)用受到限制。為擴大殼聚糖的應(yīng)用范圍，常將其改性或與其他材料復(fù)合制備成新型殼聚糖止血材料［7］。本研究通過建立巴馬豬動脈損傷出血模型，探討新型殼聚糖止血材料在豬大動脈出血損傷中的止血效果，為其應(yīng)用在臨床提供依據(jù)與參考。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與試劑 巴馬豬3 頭，體質(zhì)量（49.17±8.89）kg，購自北京實創(chuàng)世紀(jì)小型豬養(yǎng)殖基地，許可證號SCXK（京）2018-0011。丙泊酚國產(chǎn)注射液購自于廣東嘉博制藥有限公司，新型殼聚糖止血材料來自中國科學(xué)院金屬研究所沈陽材料科學(xué)國家研究中心，心電監(jiān)護(hù)儀購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，電子天平購自上海精科美科學(xué)儀器有限公司，普通紗布購自新鄉(xiāng)市宏達(dá)衛(wèi)材有限公司。實驗方案獲北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院動物醫(yī)學(xué)研究倫理委員分會批準(zhǔn)，整個實驗過程對動物的處理符合倫理要求。

1.2 模型建立與方法 將3 頭巴馬豬進(jìn)行自身對照，左側(cè)股動脈記為新型殼聚糖止血材料組，右側(cè)股動脈記為空白對照組。豬股動脈離斷模型建立：巴馬豬仰臥位固定于手術(shù)臺上，耳緣靜脈建立通路，以15 ml/h 速度泵入丙泊酚維持麻醉，麻醉完成后，經(jīng)口氣管插管，呼吸機輔助通氣，連接心電監(jiān)護(hù)儀，雙側(cè)頸部及股動脈術(shù)區(qū)備皮、消毒，頸內(nèi)動脈置管，用于監(jiān)測血壓及采血。采血手術(shù)剝離雙側(cè)股動脈、標(biāo)記，兩人同時剪斷雙側(cè)股動脈，自由出血5 s 后在左右兩側(cè)股動脈上方分別覆蓋新型殼聚糖止血材料及滅菌紗布，然后用2 500 g 大砝碼進(jìn)行壓迫，周圍放置滅菌紗布用于吸收流出血液。每5 min 抬起砝碼、揭開止血材料觀察止血情況，若5 min 內(nèi)創(chuàng)口無活動性血液流出，定義為止血成功，記錄止血情況、稱量吸血前后滅菌紗布和止血材料的重量，按照公式計算出血量，留取血液標(biāo)本用于檢測血常規(guī)和凝血功能。實驗結(jié)束后，將巴馬豬進(jìn)行安樂死處理，留存臟器（肝、肺、腎、腸）組織標(biāo)本。

出血量（ml）=［（吸血后紗布重量+吸血后材料重量）-（吸血前紗布重量+吸血前材料重量）］/血液密度（1.06 g/ml）

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 23.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以例（百分率）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較使用t檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組按壓時與按壓后傷口狀態(tài) 空白對照組使用砝碼按壓時可見創(chuàng)面被紗布覆蓋完整，無活動性血液流出；按壓后，血流出創(chuàng)緣，最終未止血成功。新型殼聚糖止血材料組砝碼按壓時創(chuàng)面被紗布覆蓋完整，無活動性血液流出；按壓后，創(chuàng)面周圍無血液流出，止血成功。見圖1。

圖1 止血狀態(tài)（a.空白對照組創(chuàng)面砝碼按壓時；b.空白對照組砝碼按壓后；c.新型殼聚糖止血材料組創(chuàng)面砝碼按壓時；d.新型殼聚糖止血材料組砝碼按壓后）

2.2 兩組止血情況 空白對照組3 例均失敗，止血成功率為0，新型殼聚糖組成功2 次，止血成功率為66.6%（2/3）；新型殼聚糖止血材料組出血量為（192.13±90.12）g，顯著低于空白對照組的（459.60±97.80）g，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 巴馬豬臟器HE 染色 快速出血后的巴馬豬的肝、腎、小腸、肺組織未見明顯病理變化。見圖2。

圖2 巴馬豬臟器未見明顯病理變化（a.肝；b.腎；c.小腸；d.肺；HE染色×100）

3 討論

大動脈損傷引起的急性失血是威脅人體生命安全的主要原因之一。本研究通過建立巴馬豬股動脈離斷出血模型，探討新型殼聚糖止血材料對大動物動脈出血損傷的止血能力。新型殼聚糖組的止血成功率明顯高于空白對照組，且新型殼聚糖組出血量相比于空白對照組明顯減少。有研究表明，羧甲基纖維素可以有效的控制小型豬的股動脈出血，且以羧甲基纖維素為主要原料的止血敷料已經(jīng)投入臨床使用［8］。有學(xué)者驗證新型改性殼聚糖海綿敷料在豬致死性動脈損傷模型中具有顯著的止血效果［9］，可以看出新型殼聚糖止血材料與上述材料同樣可以對巴馬豬的動脈出血起到止血的作用。由于大動物操作困難，本研究動物僅采用3 頭巴馬豬，并且做自身對照。可能會對實驗結(jié)果造成一定的誤差。

有研究表明，急性失血會造成大鼠的感覺記憶減退［10］；家兔急性失血＞30%時，左心功能會受到抑制［11］。有學(xué)者證實，急性失血導(dǎo)致腎損傷發(fā)病率高［12］。以上研究均表明急性失血會導(dǎo)致臟器損傷，但本實驗并未發(fā)現(xiàn)急性失血對于巴馬豬的臟器造成明顯的病理改變，可能是失血后巴馬豬存活時間較短，也有可能使臟器功能受損，但臟器實質(zhì)未發(fā)生改變，接下來的研究方向可以延長巴馬豬失血后觀察時間，再留取組織學(xué)標(biāo)本進(jìn)行檢測。巴馬豬動脈血壓高，血流量大，損傷出血時的沖擊力強，止血相對困難，之前的殼聚糖材料因其粘附性較差，導(dǎo)致止血失敗，療效受到質(zhì)疑［9］。本研究證實新型殼聚糖止血材料對于巴馬豬的大動脈損傷出的止血效果。

綜上所述，新型殼聚糖止血材料對于豬股動脈出血性損傷有顯著的止血效果。