黃明文，黃水華★，陸國壽

（1. 廣東博羅縣中醫(yī)院，廣東 博羅 516100 ；2. 廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530020）

鄧氏清毒飲為博羅縣的新型冠狀病毒肺炎（新冠肺炎）疫情預(yù)防方。2020 年1 月25 日起，博羅縣衛(wèi)健局組織縣中醫(yī)醫(yī)院按照鄧氏清毒飲方煎制中藥預(yù)防湯劑，向一線醫(yī)護(hù)人員派發(fā)了5 9309 份中藥湯劑，并為從湖北返回博羅縣進(jìn)行醫(yī)學(xué)監(jiān)測人群、部分工勤人員派發(fā)了免費(fèi)的預(yù)防中藥湯劑。同時(shí)，將鄧氏清毒飲派發(fā)給有需要的市民，已累計(jì)面向社會(huì)派發(fā)了12萬份中藥湯劑。為了更好地將鄧氏清毒飲應(yīng)用于新冠肺炎疫情防控中，我們綜合中醫(yī)處方解析、藥材化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)、藥材的相關(guān)藥理作用三方面來對鄧氏清毒飲用于新冠肺炎防控的可行性進(jìn)行分析，并根據(jù)分析結(jié)果采用高效液相色譜法（HPLC）對鄧氏清毒飲中活性成分綠原酸進(jìn)行了含量測定研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 高效液相色譜儀（2998 PDA Detector，Waters e2695 Separations Module，Empower 3 色譜工作站，美國Waters）；XS-205 天平（瑞士梅特勒）；JJ224BC 天平（常熟雙杰）；KS-3200DE 超聲儀（昆山潔力美）。

1.2 試藥

鄧氏清毒飲（自制，批號(hào)：DSQDY20201101、D S Q D Y 2 0 2 0 1 1 0 2 、 D S Q D Y 2 0 2 0 1 1 0 3 、DSQDY20201104、DSQDY20201105），綠 原 酸 對 照品（中國食品藥品鑒定研究院提供，批號(hào)：110753-202018，含量測定用）。甲醇等試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5-Micron），流動(dòng)相：乙腈-0.1% 磷酸（10:90），流速：1.0 mL/min，柱溫：25 ℃，波長：326 nm，進(jìn)樣量：10μL。在上述色譜條件下，綠原酸與其他色譜峰分離度＞1.5，且陰性樣品無干擾。色譜圖詳見圖1。

圖1 對照品（A）、供試品（B）和陰性樣品（C）的高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

取綠原酸用50% 甲醇溶液制備得對照品儲(chǔ)備液（278.25 μg/mL）。

2.3 供試品溶液的制備

取鄧氏清毒飲5 mL，置于10 mL 量瓶中，加水稀釋，即得供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方除去金銀花、野菊花、蒲公英藥材，水煮制得陰性樣品適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2”項(xiàng)下的對照品溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、8.0 mL、10.0 mL，置于10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋，精密吸取 10μL，進(jìn)樣測定，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X），峰面積（A）為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示，綠原酸在13.91 ～278.25 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=23745.2X-30573.8，r=0.9999。

2.6 精密度試驗(yàn)

取綠原酸對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次測定，計(jì)算得出綠原酸峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.56%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品（批號(hào)：DSQDY20201101）溶液，在0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h 依次進(jìn)樣測定，計(jì)算得出綠原酸峰面積的RSD 為0.73%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：DSQDY20201101）6 份，制備，測定，計(jì)算得出樣品中綠原酸的平均含量為109.16 μg/mL，RSD 為1.09%（n=6），表明該方法重復(fù)性較好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)：DSQDY20201101）6份，各2.5mL，加入1mL 含綠原酸（278.25μg/mL）的對照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備對照品溶液，測定并計(jì)算綠原酸的回收率，如表1 所示，綠原酸的平均回收率為100.03%，RSD 為1.23%。

表1 綠原酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 含量測定

取不同批次的樣品5 mL，制備，測定，計(jì)算不同生產(chǎn)批次鄧氏清毒飲中綠原酸的含量，如表2 所示，5 個(gè)生產(chǎn)批次鄧氏清毒飲中綠原酸的平均含量為114.07 μg/mL。

表2 不同生產(chǎn)批次鄧氏清毒飲中綠原酸含量的測定結(jié)果（μg/mL）

3 討論

3.1 鄧氏清毒飲防控新冠肺炎的可行性分析

鄧氏清毒飲由金銀花、野菊花、桑葉、蒲公英、白茅根、葦莖、訶子、烏梅、黨參、五指毛桃、谷芽、甘草12 味中藥材組成。方中各味藥材中的化學(xué)成分及藥理活性如下：1）金銀花[1]中含有綠原酸、木犀草素、木犀草苷等成分，具有抗菌、解熱、抗炎、抗病毒、增強(qiáng)免疫力等藥理作用；2）野菊花[2-3]中含有月桂酸、反丁香烯、綠原酸等成分，具有抗菌、清除自由基、抗微生物等藥理作用；3）桑葉[4]中含有桑呋喃F1、yunanensin E、異槲皮苷等成分，具有抗炎、抗菌、抗病毒、清除自由基、抗衰老等藥理作用；4）蒲公英[5]中含有東莨菪內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、綠原酸、蒲公英甾醇等成分，具有抗菌、抗病毒、提高免疫力等藥理作用；5）白茅根[6]中含有蘆竹素、白茅素、麥黃酮、白頭翁素、薏苡素等成分，具有利尿、抗菌、免疫調(diào)控、抗炎等藥理作用；6）葦莖[7]中含有咖啡酸、阿魏酸、禾草堿、蟾毒色胺等成分，具有免疫促進(jìn)、解熱、抗菌等藥理作用；7）訶子[8]中含有Fragment1 ～8、單寧酸等成分，具有抑菌、提高免疫功能等藥理作用；8）烏梅[9]中含有檸檬酸、愈創(chuàng)木酚、叔丁基脲等成分，具有抗菌、鎮(zhèn)咳等藥理作用；9）黨參[10]中含有黨參堿、黨參炔苷、蒲公英萜醇、柯伊利素、苜蓿素、芹菜素、咖啡酸等成分，具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗菌、抗病毒等藥理作用；10）五指毛桃[11]中含有補(bǔ)骨脂素、佛手柑內(nèi)酯、柚皮素等成分，具有止咳、祛痰、平喘、提高免疫功能、抑菌等藥理作用；11）谷芽[12]中含有多糖類成分，具有清除超氧陰離子自由基、抗氧化等藥理作用；12）甘草[13]中含有甘草酸、甘草查爾酮甲、甘草苷等成分，具抗炎、抗病毒、解毒、鎮(zhèn)咳祛痰等藥理作用。

中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎中西醫(yī)結(jié)合防治專家共識(shí)》中認(rèn)為新冠肺炎發(fā)病的中醫(yī)病因?yàn)楦惺堋耙甙O”之氣，病機(jī)特點(diǎn)為“濕、熱、瘀、毒、虛”。博羅縣位于南方濕瘴之地，故考慮鄧氏清毒飲中以金銀花為君藥，根據(jù)其“歸肺經(jīng)，功能清熱解毒，疏散風(fēng)熱”等歸經(jīng)及功效特點(diǎn)，首從解決本“疫”病的“濕、熱、毒”病機(jī)入手。野菊花可“清熱解毒，瀉火平肝”、桑葉可“疏散風(fēng)熱，清肺潤燥”、蒲公英可“清熱解毒”、白茅根可“涼血止血，清熱利尿”，此四味藥味為臣藥，共助金銀花解決“濕、熱、毒”病機(jī)。蒲公英可“消腫散結(jié)”，兼顧解決本“疫”病的“瘀”病機(jī)。葦莖、訶子、烏梅皆歸肺經(jīng)，其中功效分別為葦莖可“清肺解毒，止咳排膿”、訶子可“斂肺止咳”、烏梅可“斂肺”，三者為佐藥，共達(dá)“清肺斂肺，止咳排膿”之功效。黨參歸脾、肺經(jīng)，功效“健脾益肺，養(yǎng)血生津”；五指毛桃歸脾、肺、胃經(jīng)，功效“健脾益氣，行氣利濕”；谷芽歸脾、胃經(jīng)，功效“消食和中，健脾開胃”，三者為使藥，考慮以其歸脾、肺經(jīng)，功能健脾益肺、益氣和中，此歸經(jīng)及功效特點(diǎn)，能解決本“疫”病病機(jī)中的“虛”癥。甘草具有“清熱解毒，祛痰止咳，調(diào)和諸藥”之功效，在協(xié)助各藥味解決“熱、瘀”病機(jī)的同時(shí)，亦起到緩解藥物毒性、烈性的作用。綜上所述，本方具有解毒御邪、清肺潤燥、顧護(hù)元?dú)獾墓πА?/p>

從傳統(tǒng)中醫(yī)角度來解析，鄧氏清毒飲主要從清熱解毒、斂肺止咳、健脾益肺等角度來解決新冠肺炎這一中醫(yī)范疇的“疫”病，解決其“濕、熱、瘀、毒、虛”等病機(jī)。從藥理學(xué)角度分析，本方的藥效主要與抗病毒、抗菌、鎮(zhèn)咳祛痰、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化五個(gè)方面的藥理作用有關(guān)。值得關(guān)注的是，處方的部分中醫(yī)功效能較好地采用現(xiàn)代藥理機(jī)制來解釋，如清熱解毒的功效可以用抗病毒、抗菌等藥理作用來解釋，斂肺止咳的功效可以用鎮(zhèn)咳祛痰的藥理作用來解釋，顧護(hù)元?dú)獾墓πЭ梢杂妹庖哒{(diào)節(jié)等藥理作用來解釋。從藥味中活性成分的角度來分析，方中部分藥味的活性成分亦能在一定程度上對本方的功效進(jìn)行解釋，如金銀花中的綠原酸具有抗病毒、抗菌的作用，黨參中的多糖成分具有免疫調(diào)節(jié)的作用。

3.2 含量測定指標(biāo)成分的選擇及實(shí)驗(yàn)條件摸索

查閱文獻(xiàn)[1-3]，金銀花、野菊花、蒲公英中均含有綠原酸成分。綠原酸具有較好的抗病毒作用[14-15]，是本方的主要藥物活性成分之一，故選擇其作為含量測定的指標(biāo)成分具有較好的質(zhì)量監(jiān)控作用。依據(jù)文獻(xiàn)方法[5-8]，本實(shí)驗(yàn)比較了乙腈-甲酸水、乙腈-磷酸水、甲醇- 磷酸水等不同流動(dòng)相在鄧氏清毒飲中活性成分綠原酸含量測定中的價(jià)值，結(jié)果表明，以乙腈-0.1%磷酸水為流動(dòng)相，綠原酸的分離效果較好，干擾成分少，分離度達(dá)到要求。本研究采用PDA 檢測器，在200 ～400 nm 范圍內(nèi)對綠原酸進(jìn)行全波長掃描，其在326 nm 處有最大吸收，故選擇波長為326 nm。

本研究通過開展相應(yīng)含量測定等質(zhì)量監(jiān)控工作，可更好地保證鄧氏清毒飲質(zhì)量的穩(wěn)定性，使其能更好地在新冠肺炎防控工作中發(fā)揮作用。