程 峰，何春慧

（海安市中醫(yī)院，南京中醫(yī)藥大學(xué)翰林學(xué)院附屬海安醫(yī)院，江蘇 海安 226600）

止汗貼是本院研制的純中藥制劑( 蘇藥制字Z04000137)。該方由廣郁金、麻黃根、五倍子組成，具有固濕止汗的作用，可用于兒童及成人植物神經(jīng)功能紊亂及甲亢、內(nèi)濕熱、敗血癥、結(jié)核病、產(chǎn)后等所致的自汗、盜汗的治療[1]。該貼劑在本院內(nèi)科的應(yīng)用已有十多年，療效顯著，受到本地區(qū)患者的一致好評(píng)，甚至有慕名前來(lái)購(gòu)買(mǎi)使用的外地患者。目前止汗貼的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（中國(guó)藥典2005 年版一部附錄Ⅱ）要求應(yīng)符合貼劑項(xiàng)下的有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定。為了保證止汗貼的質(zhì)量和療效，本文采用TLC 法對(duì)止汗貼中的郁金進(jìn)行定性鑒定。查閱相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，針對(duì)姜黃素含量的測(cè)定方法多為HPLC 法[2-9]。故采用HPLC 法測(cè)定止汗貼中姜黃素的含量，制訂了切實(shí)可行的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)[10]，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 主要儀器與試藥

GF254薄層板；止汗貼（海安市中醫(yī)院制劑中心自制，批號(hào)200311、200514、200616）。

2 薄層鑒別

2.1 郁金的薄層鑒別

取本品10 g，加無(wú)水乙醇20 mL，超聲處理60分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取郁金對(duì)照藥材1 g，加無(wú)水乙醇10 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。取不含所試藥材的陰性對(duì)照樣品，制備陰性對(duì)照溶液（方法同供試品溶液）。行照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以正己烷：乙酸乙酯：無(wú)水乙醇（16：3：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。置紫外線(xiàn)燈（365 nm）下檢視發(fā)現(xiàn)，供試品色譜中與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品不顯斑點(diǎn)。見(jiàn)圖1。

圖1 郁金TLC 色譜圖

2.2 五倍子的薄層鑒別

取沒(méi)食子酸對(duì)照品2 mg，加甲醇2 mL 使之溶解即得對(duì)照品溶液。取供試品10 g、五倍子藥粉1 g 及不含五倍子的處方藥粉1 g，分別加甲醇15 mL，超聲處理15 分鐘，濾過(guò)藥液，即得供試品溶液、陽(yáng)性對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照品溶液。行照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿- 甲酸乙酯- 甲醇（5 ：5 ：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。置254 nm 紫外燈下檢視發(fā)現(xiàn)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的灰黑色斑點(diǎn)；陰性對(duì)照品不顯斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

圖2 五倍子TLC 色譜圖

3 姜黃素含量測(cè)定

3.1 色譜條件

大 連ODS-C18（4.6 nm×25 cm×15 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；靈敏度：0.1 AUFS ；流動(dòng)相：乙腈-水-冰醋酸（45 ：55 ：6）；流速1.0 mL/min。理論板數(shù)按姜黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液制備 姜黃素在甲醇中的提取效果最好[11]，故精密稱(chēng)取姜黃素對(duì)照品適量，甲醇溶解配成約0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL、0.8 mg/mL，即得姜黃素對(duì)照品溶液。

3.2.2 供試品溶液制備 取本品適量，用10 倍量甲醇浸泡2 小時(shí)后，超聲提取30 分鐘，離心，取出上清液，藥渣同前處理2 次，合并三次提取液，適當(dāng)濃縮，用甲醇定容至10 mL, 即得供試液。

3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按制劑處方比例稱(chēng)取除郁金外的其他中藥材，按照該制劑制備工藝相同的方法制得陰性樣品。按照3.2.2 的制備方法制備陰性樣品溶液。

3.3 測(cè)定

3.3.1 線(xiàn)性范圍的考察 精密吸取對(duì)照品溶液各20 μL進(jìn)樣，按以上色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，見(jiàn)表1。以對(duì)照溶液濃度為橫坐標(biāo)（X），姜黃素峰面積分別為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為y=2 274 643.1x-3076.5，r=0.9997。結(jié)果表明，姜黃素在進(jìn)樣量0.10 ～0.80 mg/mL 范圍內(nèi)的線(xiàn)性關(guān)系良好。

表1 姜黃素工作曲線(xiàn)測(cè)定結(jié)果

3.3.2 精密度試驗(yàn) 從止汗貼（批號(hào)：200311）樣品中取5 份，按含量測(cè)定方法測(cè)定姜黃素的含量，姜黃素含量測(cè)定的RSD 為0.90%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 姜黃素的含量精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.3.3 加樣回收實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的止汗貼（批號(hào)：200311）6 份，然后精密加入一定量姜黃素對(duì)照品，按含量測(cè)定方法測(cè)定，姜黃素的平均回收率為100.28%，RSD 為0.91%，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3.3.4 重復(fù)性與穩(wěn)定性試驗(yàn) 重復(fù)性：取“3.2.1 止汗貼對(duì)照品溶液制備”項(xiàng)下對(duì)照品，按照“3.1 色譜條件”連續(xù)進(jìn)樣5 次，測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 止汗貼重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

穩(wěn)定性：取“3.2.2 止汗貼供試品溶液的制備”項(xiàng)下供試品，按照“3.1 色譜條件”分別于1 h、2 h、3 h、4 h、5 h 進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 止汗貼穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

3.3.5 樣品含量測(cè)定 按對(duì)照品的方法，對(duì)止汗貼批號(hào)：200311、200514、200616 進(jìn)行姜黃素含量測(cè)定，并計(jì)算結(jié)果，數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。

表6 供試品中姜黃素的含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)止汗貼的三個(gè)批次姜黃素的平均含量為0.2029%，將其含量下調(diào)10% 作為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，故初定止汗貼中的姜黃素含量不低于0.18%，三個(gè)批次止汗貼中姜黃素含量均高于此數(shù)值。

4 討論

止汗貼方由廣郁金、麻黃根、五倍子組成。郁金辛、苦寒，《本草綱目拾遺》有“郁金，自汗不止，郁金末臥時(shí)涂乳上”之述[12]。通過(guò)本院研究，廣郁金中的姜黃素，是止汗的主要成分。麻黃根微苦、微澀，有固表斂汗之功，用于陽(yáng)虛自汗、陰虛盜汗之癥。止汗貼生產(chǎn)過(guò)程中，先將中藥飲片碎成細(xì)粉；然后以聚乙烯醇樹(shù)脂制成15%的黏稠液體；藥材細(xì)粉放入乳缽內(nèi)，慢慢加入基質(zhì)和氮酮，調(diào)制成適宜黏性的軟材；制作時(shí)，將軟材分成3.5 g 每份，加工成圓形貼膏。這樣更有利于藥物有效成分的透皮吸收，使用方便，便于患者攜帶。

近年來(lái)，我國(guó)大力推廣中醫(yī)中藥，中醫(yī)藥療法因確切的療效也深入人心。我院的止汗貼深受廣大患者喜愛(ài)，得到周邊患者的良好口碑，甚至有外省的患者前來(lái)購(gòu)買(mǎi)。我院作為三級(jí)中醫(yī)院，有著一大批技術(shù)精湛、臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的名老中醫(yī)和名校技術(shù)骨干，很多患者得益于他們的幫助，自汗、盜汗問(wèn)題得到了緩解和治愈。這為我院贏(yíng)得了一大批忠實(shí)的粉絲，使得我市的群眾對(duì)中醫(yī)療法的熱愛(ài)和信任達(dá)到了前所未有的高度。我們也要對(duì)得起這份熱愛(ài)和信任，將中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)揚(yáng)光大。

本次研究中，采用TLC 法對(duì)止汗貼中郁金進(jìn)行定性鑒別，郁金TLC 應(yīng)用硅膠G 板展開(kāi)，未見(jiàn)姜黃素斑點(diǎn)。換成聚酰胺薄膜進(jìn)行展開(kāi)，斑點(diǎn)清晰。展開(kāi)劑經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)調(diào)整為正己烷：乙酸乙酯：無(wú)水乙醇（16：3 ：1），Rf值為0.3，展開(kāi)斑點(diǎn)清晰、穩(wěn)定。

流動(dòng)項(xiàng)的選擇：分別考察了乙腈- 水- 冰醋酸（45：55：6）、乙腈-水-冰醋酸（50：50：6）和乙腈-水-冰醋酸（55：45：6）三個(gè)流動(dòng)相，其中乙腈-水-冰醋酸（45 ：55 ：6）對(duì)姜黃素的分離效果明顯。

經(jīng)多批次試驗(yàn)，止汗貼在現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加郁金、五倍子的薄層鑒別法及姜黃素為有效成分的含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)便快速，為止汗貼的臨床效果提供了技術(shù)保障。我院制劑室將一如既往地為患者提供療效穩(wěn)定的制劑，為其健康保駕護(hù)航。