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        Th17在AS患者外周血中的表達(dá)及意義

        2022-10-26 07:47:24戶(hù)小均
        當(dāng)代醫(yī)藥論叢 2022年19期
        關(guān)鍵詞:受試者組間抗體

        戶(hù)小均,馬 驥,黃 丹

        (綿陽(yáng)市中心醫(yī)院,四川 綿陽(yáng) 621000)

        強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是一種慢性炎癥性疾病,以髂骶關(guān)節(jié)、脊柱以及外周關(guān)節(jié)為主要病變部位,同時(shí)伴有不同程度的心血管、肺部病變。調(diào)查發(fā)現(xiàn),截至2019 年我國(guó)AS 患病率在0.44% 左右,男性的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)更高,且好發(fā)于青壯年群體,對(duì)患者家庭及社會(huì)均會(huì)造成一定負(fù)擔(dān)[1]。AS 具有一定的家族聚集性,屬于與遺傳相關(guān)的自身免疫性疾病,但患者免疫功能的改變與遺傳發(fā)病的機(jī)制目前并未闡明。關(guān)于AS 與T細(xì)胞亞群的研究存在較多爭(zhēng)議,有學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)了一種新的T 細(xì)胞亞群——輔助性T 細(xì)胞17(Th17)。該細(xì)胞屬于效應(yīng)CD4+T 細(xì)胞,來(lái)源于Th0,具有與Th1、Th2 差異的獨(dú)立分化途徑,且已有大量研究證實(shí)Th17在自身免疫性疾病、炎癥疾病中具有重要作用[2]。本研究為分析AS 患者外周血中Th17 的表達(dá)水平及其在疾病發(fā)生機(jī)制中的作用,對(duì)我院收治的AS 患者及同時(shí)期的健康受試者進(jìn)行對(duì)比,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選擇我院2021 年1 月至12 月收治的AS 患者30例為研究組,選擇同一時(shí)期于我院進(jìn)行體檢的健康受試者30 例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):1)研究組患者經(jīng)我院檢查確診為AS ;2)對(duì)照組受試者為本院體檢結(jié)果健康人群;3)簽署同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn):1)合并其他自身免疫性疾病者;2)合并惡性腫瘤者;3)出現(xiàn)嚴(yán)重感染性疾病或高熱癥狀者。剔除標(biāo)準(zhǔn):1)不能參與研究全過(guò)程者;2)研究過(guò)程中出現(xiàn)突發(fā)性疾病且對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響者;3)未按照本研究要求進(jìn)行試驗(yàn)者。研究組中有男16 例、女14 例,年齡24 ~41 歲,平均(32.52±4.11)歲。對(duì)照組中有男17 例、女13 例,年齡23 ~40 歲,平均(32.51±4.09)歲。兩組受試者的性別、年齡對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        1.2 方法

        1.2.1 檢測(cè)儀器 流式細(xì)胞儀(賽默飛世爾,Attune);細(xì)胞培養(yǎng)箱。

        1.2.2 檢測(cè)方法 1)Th17、Th1、Th2 :抽取兩組受試者的靜脈血3mL,以肝素鈉抗凝,參照固定比例進(jìn)行全血細(xì)胞刺激培養(yǎng)4h,之后用磷酸鹽緩沖劑沖洗。分成5 管,分別在其中加入10μL 抗CD4 抗體進(jìn)行染色,置于室溫暗處30min。加固定劑50μL,室溫放置15min。加入4mL PBS 清洗劑,以1500r/min 轉(zhuǎn)速離心10min,去上清液,加通透劑30μL。之后分別在5 管中加入抗白細(xì)胞介素-17(IL-17)抗體、IL-4 抗體、γ 干擾素(IFN-γ)抗體、FTTC 以及PE 抗體進(jìn)行同種型對(duì)照,混合均勻后在室溫暗處放置15min。洗滌1 次,去上清液,加PBS500μL 支撐細(xì)胞懸液,待檢。2)人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27):分別在各反應(yīng)管中加入100μL 肝素鈉行抗凝處理,再加入相應(yīng)單克隆熒光抗體10μL,混勻,以同型抗體做陰性對(duì)照,室溫避光保存30 min,溶血。之后加入PBS4mL,以1500 r/min 轉(zhuǎn)速離心5min,洗滌2 次,去上清液,加PBS500μL 配置細(xì)胞懸液,待檢。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn):分析細(xì)胞群百分比、平均熒光強(qiáng)度,HLA-B27*/B7-平均熒光強(qiáng)度>8 或細(xì)胞群百分比>90%表示呈陽(yáng)性。3)紅細(xì)胞沉降率(ESR):以魏氏法取受試者靜脈血3 mL 進(jìn)行檢測(cè)。4)C 反應(yīng)蛋白(CRP):以速率散射比濁法取受試者靜脈血3 mL 進(jìn)行檢測(cè)。

        1.3 觀察指標(biāo)

        1)對(duì)比組間Th17 的表達(dá)水平。2)對(duì)比組間Th1、Th2 的表達(dá)水平。3)分析研究組Th17 的表達(dá)水平與HLA-B27、CRP、ESR 之間的相關(guān)性。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        將本研究數(shù)據(jù)錄入SSPS12.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料采用±s表示,行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用% 表示,行χ2 檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman 分析,P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 對(duì)比組間Th17 的表達(dá)水平

        研究組Th17 的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

        表1 對(duì)比組間Th17 的表達(dá)水平(%,± s )

        表1 對(duì)比組間Th17 的表達(dá)水平(%,± s )

        組別 Th17研究組(n=30) 2.77±0.73對(duì)照組(n=30) 1.21±0.44 t 值 10.025 P 值 <0.001

        2.2 對(duì)比組間Th1、Th2 的表達(dá)水平

        研究組Th1 的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,Th2的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

        表2 對(duì)比組間Th1、Th2 的表達(dá)水平(%,± s )

        表2 對(duì)比組間Th1、Th2 的表達(dá)水平(%,± s )

        組別 Th1 Th2研究組(n=30) 3.77±0.91 4.22±1.01對(duì)照組(n=30) 4.88±1.01 3.04±0.77 t 值 4.472 5.089 P 值 <0.001 <0.001

        2.3 研究組Th17 的表達(dá)水平與HLA-B27、CRP、ESR 之間的相關(guān)性

        研究組HLA-B27 的檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,ESR為(32.54±2.24)mm/h,CRP 為(31±9)mg/L。經(jīng)Spearman 分析發(fā)現(xiàn):研究組Th17 的表達(dá)水平與HLA-B27 百分比、HLA-B27 平均熒光強(qiáng)度及ESR、CRP 無(wú) 明 顯 相 關(guān) 性(r=0.415、r=0.151、r=0.086、r=0.289,P均>0.05),但Th17 的表達(dá)水平會(huì)隨著HLA-B27 百分比及HLA-B27 平均熒光強(qiáng)度的增加而升高。

        3 討論

        AS 起病緩慢且早期癥狀不明顯。此病患者的臨床表現(xiàn)主要為腰骶部鈍痛、晨僵或翻身困難,稍活動(dòng)后減輕,隨著病情進(jìn)展,疼痛會(huì)逐漸從腰椎進(jìn)展至胸椎、頸椎等,嚴(yán)重時(shí)可發(fā)生脊柱畸形。研究顯示,AS具有家族聚集性,此病患者的一級(jí)親屬患有AS 的概率高達(dá)30%。免疫因素在AS 的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,目前共發(fā)現(xiàn)100 多種細(xì)胞因子、趨化因子參與AS 的炎性反應(yīng),AS 患者體內(nèi)的免疫炎癥因子水平要高于正常人群[3]。大量研究證實(shí),與類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)相比,AS 患者體內(nèi)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和IFN-γ 的分泌量均明顯減少。但也有研究指出,TNF-α 在AS 中呈現(xiàn)升高趨勢(shì),認(rèn)為該因子在多種脊柱關(guān)節(jié)病的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用[4]。近年來(lái)有研究證實(shí),參照細(xì)胞發(fā)育、功能及分泌細(xì)胞因子作用的差異,CD4+T 淋巴細(xì)胞應(yīng)細(xì)化為T(mén)h1、Th2、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞及Th17 四大亞群[5]。Th17 亞群分化、功能均受Th1 和Th2 因子的影響,而IL-17 能夠在免疫、防御中起到重要作用,生成調(diào)控粒細(xì)胞,阻斷細(xì)胞外病原體入侵。

        近年來(lái)臨床上關(guān)于Th17 亞群的產(chǎn)生、分化機(jī)制及在RA 中表達(dá)水平的研究較多,但關(guān)于其在AS 中的表達(dá)情況及在本病發(fā)生、發(fā)展中作用機(jī)制的研究較少。本研究借助流式細(xì)胞術(shù)分析AS 患者體內(nèi)Th17 表達(dá)水平與健康受試者的差異,以及Th17 在AS 進(jìn)展過(guò)程中的作用機(jī)制[6]。本研究顯示,研究組Th17 的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);研究組Th1 的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,Th2 的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。原因在于,Th1、Th2 及Th17 型細(xì)胞因子之間關(guān)系復(fù)雜,且IL-17 主要是通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞、核因子受體活化而發(fā)揮作用。同時(shí)發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β、IL-6等具有促進(jìn)Th17 分化的能力,而IFN-γ 則具有強(qiáng)烈抑制Th17 產(chǎn)生的作用。在加入抗IFN-γ 抗體的Th17培養(yǎng)中,發(fā)現(xiàn)IL-17 的水平升高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,與野生型小鼠相比,IFN-γ 基因敲除的小鼠體內(nèi)IL-17的分泌量相對(duì)較高[7-8]。本研究顯示,研究組HLA-B27的檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,ESR 為(32.54±2.24)mm/h,CRP 為(31±9)mg/L;經(jīng)Spearman 分析發(fā)現(xiàn):研究組Th17 的表達(dá)水平與HLA-B27 百分比、HLA-B27平均熒光強(qiáng)度及ESR、CRP 無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.415、r=0.151、r=0.086、r=0.289,P均>0.05),但Th17的表達(dá)水平會(huì)隨著HLA-B27 百分比及HLA-B27 平均熒光強(qiáng)度的增加而升高。原因在于,AS 患者體內(nèi)存在Th1 嚴(yán)重缺損或Th17 過(guò)度表達(dá)的情況,抑制了Th1 的分化,導(dǎo)致IL-1β、IL-17、TNF-α、IL-6 等炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)水平增高,促使AS 的發(fā)生、發(fā)展。

        綜上所述,AS 患者外周血中Th17、Th2 數(shù)目增多,Th1 數(shù)目減少,其體內(nèi)Th 細(xì)胞存在失衡情況,提示Th17 參與了AS 整個(gè)免疫異常變化的過(guò)程且在其中發(fā)揮著重要作用。

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