李小勇，郭琴，郭海志

作者單位：資陽市第一人民醫(yī)院,a神經(jīng)內(nèi)科，b檢驗(yàn)科，四川 資陽 641300

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是一種由社會、生理、心理等多種因素引起的神經(jīng)退行性疾病，臨床上主要表現(xiàn)為注意力渙散、認(rèn)知障礙、情感障礙、記憶障礙、行為異常等［1］。AD起病隱匿，病情發(fā)展機(jī)制復(fù)雜，與β淀粉樣蛋白（amyloid-beta，Aβ）代謝異常密切相關(guān)，主要危害老年型人群，其患病率隨著年齡的增長逐漸升高，隨著全球人口老齡化的加劇，AD患病人數(shù)也逐漸升高，給社會及家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)［2-3］。目前關(guān)于AD的治療仍是世界難題之一，關(guān)于緩解或者改善AD病情的藥物和方法較少，原因可能是AD發(fā)病緩慢，早期癥狀不明顯，且呈現(xiàn)不可逆性［4］。因此尋找與AD發(fā)生發(fā)展相關(guān)的生物因子仍是研究的熱點(diǎn)?？扇苄缘兔芏戎鞍资荏w相關(guān)蛋白1（soluble Low-density lipoprotein receptor-related protein 1，sLRP-1）隸屬于低密度脂蛋白受體家族，在腦內(nèi)、血管等組織中均有表達(dá)，與AD病情密切相關(guān)，具有維持腦內(nèi)環(huán)境及清除腦內(nèi)Aβ的作用，主要通過調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等對Aβ的攝取功能來發(fā)揮其Aβ清除能力［5-6］。本研究通過對AD病人血清中sLRP-1表達(dá)水平的測定來分析其與AD之間的關(guān)系，為AD的診斷及治療開發(fā)新的靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 樣本量估算本研究假說認(rèn)為sLRP-1表達(dá)水平對AD病人具有一定的診斷價值，能有效區(qū)分健康對照和AD病人，根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，sLRP-1曲線下面積為0.7，設(shè)單側(cè)α=0.005，β=0.95，組間比例1∶1，采用PASS 15軟件估算樣本量，AD組樣本量N1=69例，對照組樣本量N2=69例，考慮失訪、拒訪的情況10%計算，最終至少需要AD組、對照組各77例，總計至少納入154例。

1.2 一般資料選擇2016年7月至2020年2月在資陽市第一人民醫(yī)院確診的AD病人82例為AD組，年齡范圍為67～86歲，年齡（76.1±14.4）歲，病史范圍為1～14年，病史（8.4±2.7）年，男性35例，女性47例。同時選擇在資陽市第一人民醫(yī)院進(jìn)行體檢的健康者95例為對照組，年齡范圍為70～85歲，年齡（75.7±12.6）歲，男性46例，女性49例，兩組研究對象的年齡及性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）AD的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考美國國立神經(jīng)病語言障礙卒中研究所及阿爾茨海默病協(xié)會（NINCDS-ADRDA）制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；（2）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）突然起病或卒中樣發(fā)作；（2）早期有偏癱、共濟(jì)失調(diào)、感覺喪失、視野缺損等局灶性神經(jīng)性體征；（3）有精神分裂、抑郁等精神類疾病史；（4）伴嚴(yán)重心臟、肝臟、腎臟等器官疾病等。

癡呆分級標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)個人自理狀況、記憶力、解決問題能力、業(yè)余習(xí)慣嗜好、社會事物認(rèn)知、意動定向力、家居生活料理等方面進(jìn)行測評，采用臨床癡呆分級量表（CDR）評定，由臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師進(jìn)行匯總，分為輕度癡呆（1分）、中度癡呆（2分）、重度癡呆（3分）。

所有相關(guān)樣品的采集均獲得病人及其近親屬知情同意并簽字，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》。

1.3 主要試劑與儀器全自動生化分析儀，購自美國Bio-Rad公司；sLRP-1、Aβ1-42 ELISA試劑盒，購自于美國Invitrogen公司。

1.4 研究方法

1.4.1 血液樣品預(yù)處理采集所有受試者空腹靜脈血3～5 mL，室溫靜置20 min，3 000 r/min，4℃，離心10 min，收集血清裝至特定離心管中，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?，用于后續(xù)相關(guān)指標(biāo)的測定。

1.4.2 ELISA法檢測血清sLRP-1的表達(dá)水平及相關(guān)指標(biāo)的測定根據(jù)相應(yīng)ELISA試劑盒中的說明書測定所有受試者血清中sLRP-1、Aβ1-42含量；用全自動生化分析儀測定血清中三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量。計算病人體質(zhì)指數(shù)（BMI）、日常生活能力評估量表（ADL評分）、AD評定量表認(rèn)知（ADAS-cog評分）、智力狀況檢查評分（MMSE評分）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法利用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。以±s對計量資料進(jìn)行表述，兩組比較采用t檢驗(yàn)，三組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用SNK-q法，ROC法分析血清sLRP-1表達(dá)水平對AD的診斷價值，Pearson相關(guān)性分析血清sLRP-1表達(dá)水平與臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性；計數(shù)資料用例（%）進(jìn)行描述，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較與對照組相比，AD病人年齡、性別、文化程度、BMI、血清中TG、TC、LDL-C水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），AD病人ADAS-cog顯著升 高（P＜0.05），血清中HDL-C、ADL評分、MMSE評分均顯著下降（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1 阿爾茨海默病（AD）組及對照組一般資料比較

2.2 兩組血清sLRP-1表達(dá)水平及Aβ1-42濃度比較與對照組相比，AD組血清sLRP-1表達(dá)水平降低（P＜0.05），血清中Aβ1-42濃度升高（P＜0.05）。

表2 AD組與對照組血清可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1（sLRP-1）表達(dá)水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

表2 AD組與對照組血清可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1（sLRP-1）表達(dá)水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

項目對照組AD組t值P值例數(shù)95 82 sLRP-1/（mg/L）17.84±5.31 11.16±3.63 8.18＜0.001 Aβ1-42/（μg/L）38.31±10.77 53.34±16.07 7.39＜0.001

2.3 不同分組AD病人血清sLRP-1表達(dá)水平及Aβ 1-42濃度比較隨著癡呆程度的加深，AD病人血清中sLRP-1表達(dá)水平呈依次降低趨勢（P＜0.05），血清中Aβ1-42濃度呈依次升高趨勢（P＜0.05）。結(jié)果見表3。

表3 輕度、中度、重度癡呆血清可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1（sLRP-1）表達(dá)水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

表3 輕度、中度、重度癡呆血清可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1（sLRP-1）表達(dá)水平及β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）濃度比較/±s

注：①與輕度癡呆相比，P＜0.05。②與中度癡呆相比，P＜0.05。

組別輕度癡呆中度癡呆重度癡呆F值P值例數(shù)30 24 28 sLRP-1/（mg/L）13.01±4.03 11.18±3.02①9.15±3.05①②9.15＜0.001 Aβ1-42/（μg/L）46.17±13.59 54.39±16.13①60.12±17.68①②5.70 0.005

2.4 AD病人血清sLRP-1表達(dá)水平與臨床指標(biāo)相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析表明AD病人血清中sLRP-1表達(dá)水平與血清中Aβ1-42以及ADAS-cog評分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.88，r=-0.74，P＜0.05），與HDL-C水平、ADL評分、MMSE評分呈正相關(guān)（r=0.81，r=0.70，r=0.79，P＜0.05）。

2.5 sLRP-1表達(dá)水平對AD的診斷價值ROC曲線結(jié)果表明，血清sLRP-1表達(dá)水平診斷AD曲線下面積（AUC）為0.84，95%CI為（0.77，0.90），靈敏度為82.1%，特異度為84.1%，截斷值為13.943 mg/L。

3 討論

AD是常發(fā)于老年性人群的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，年齡越大患病率越高，早期AD病人常伴有認(rèn)知障礙、記憶混亂、社交障礙等臨床特征，重度癡呆病人則表現(xiàn)為日常生活不能自理、嚴(yán)重記憶喪失等，完全依賴照護(hù)者，具有病程長、治療效果較差、康復(fù)困難等特點(diǎn)，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量及生命健康，給病人家屬和社會帶來沉重負(fù)擔(dān)。目前全世界AD病人有兩千多萬例，隨著人們壽命的不斷延長，AD患病人數(shù)也在逐漸增加［6，8］。關(guān)于AD的發(fā)病機(jī)制假說“Aβ級聯(lián)假說”認(rèn)為是Aβ蛋白代謝異常在AD的病情發(fā)生及發(fā)展中起到重要作用［9］，Aβ蛋白由Aβ前體蛋白水解而來，廣泛存在于腦脊液、血液、腦間質(zhì)液中，具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性作用，能促使血管淀粉樣變性、神經(jīng)纖維纏結(jié)、神經(jīng)元受損，沉積的Aβ常會誘發(fā)細(xì)胞凋亡、炎癥、氧化應(yīng)激等一系列不良反應(yīng)，進(jìn)一步加重AD病情［10-11］。

研究發(fā)現(xiàn)sLRP-1在血管內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元等細(xì)胞中均有表達(dá)，與腦老化、腦萎縮等過程密切相關(guān)，是人體血腦屏障中轉(zhuǎn)運(yùn)Aβ的主要受體之一，Aβ與sLRP-1的相關(guān)配體（Aβ前體蛋白、載脂蛋白等）結(jié)合形成復(fù)合物，被sLRP-1識別，通過血腦屏障將可溶性的Aβ轉(zhuǎn)運(yùn)出腦，研究發(fā)現(xiàn)低表達(dá)的sLRP-1會加劇血管及腦內(nèi)Aβ的聚集，進(jìn)而影響神經(jīng)元的狀態(tài)，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞過早凋亡［6，12］。曹利等［13］研究顯示，AD病人血清sLRP水平顯著低于血管性癡呆、非AD變性癡呆及正常人，且對AD的甄別具有一定價值。本研究中，AD組病人血清sLRP-1表達(dá)水平顯著低于對照組，血清中Aβ1-42濃度顯著高于對照組，隨著癡呆程度的加深，AD病人血清中sLRP-1表達(dá)水平呈依次降低趨勢，血清中Aβ1-42濃度呈現(xiàn)依次升高趨勢，提示血清sLRP-1水平與AD的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)，可能原因?yàn)閟LRP-1水平下降可能加速Aβ蛋白在腦組織中的積累，促進(jìn)AD的發(fā)展，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

資料顯示ADAS-cog評分及ADL評分可以反映病人的口頭表達(dá)能力、詞語回憶、詞語辨析、語言理解能力、回憶能力、日常生活能力等，對于評估AD病人的認(rèn)知能力具有良好的信度和效度［14］，MMSE評分能反應(yīng)AD病人的智力情況，研究發(fā)現(xiàn)AD的發(fā)生與老年人血脂水平存在一定的關(guān)聯(lián)，HDL-C具有一定的抗炎作用及抑制腦內(nèi)Aβ生成作用，高HDLC水平還具有調(diào)節(jié)大腦結(jié)構(gòu)穩(wěn)定及神經(jīng)細(xì)胞流動性等作用，研究顯示AD病人體內(nèi)HDL-C水平呈現(xiàn)低水平［15-16］，本次研究發(fā)現(xiàn)，AD病人ADAS-cog評分高于對照組，血清中HDL-C、ADL評分、MMSE評分均低于對照組，與相關(guān)研究一致。Pearson相關(guān)性分析表明AD病人血清中sLRP-1表達(dá)水平與血清中Aβ 1-42濃度、ADAS-cog評分呈負(fù)相關(guān)，與血清HDL-C水平、ADL評分、MMSE評分呈正相關(guān)，進(jìn)一步提示血清sLRP-1表達(dá)水平與AD病人病情進(jìn)展密切相關(guān)。ROC曲線結(jié)果表明，血清sLRP-1表達(dá)水平診斷AD曲 線下 面 積（AUC）為0.84，95%CI為（0.77，0.90），靈敏度和特異度較高，對AD病情具有一定的診斷價值，當(dāng)sLRP-1水平低于13.943 mg/L時，有發(fā)生AD的風(fēng)險，需加強(qiáng)監(jiān)測與預(yù)防。

綜上所述，血清sLRP-1表達(dá)水平與AD病人病情的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)，對AD具有一定的診斷價值，但是關(guān)于sLRP-1在AD病人體內(nèi)異常表達(dá)的具體機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步研究。