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        檢測(cè)外周血EB病毒DNA載量對(duì)感染性疾病患者病情評(píng)估的臨床意義

        2022-10-18 09:05:48陶秀珍
        大醫(yī)生 2022年19期
        關(guān)鍵詞:檢測(cè)

        陶秀珍

        (廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣西南寧 530199)

        感染性疾病屬于臨床常見(jiàn)疾病,指病原微生物入侵導(dǎo)致的身體受損癥狀和感染應(yīng)答表現(xiàn)。EB病毒是雙鏈DNA病毒,屬于一類嗜人B淋巴細(xì)胞病毒,而EB病毒感染是臨床常見(jiàn)的病毒性傳染病,所引起的癥狀輕重程度不一,會(huì)對(duì)患者的身體健康造成嚴(yán)重威脅[1]。結(jié)合患者的臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果有助于判斷其病情并對(duì)其臨床轉(zhuǎn)歸情況開(kāi)展預(yù)測(cè)。有研究顯示,外周血EB病毒DNA(EBV-DNA)載量檢測(cè)能準(zhǔn)確且靈敏顯示患者的EB病毒感染狀況,早期提示并預(yù)測(cè)其病變程度[2]。本研究分析檢測(cè)外周血中EBV-DNA載量對(duì)評(píng)估感染性疾病患者病情的價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 回顧性分析2020年1月至12月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院收治的293例感染性疾病患者的臨床資料,選取EBV-DNA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的68例患者,根據(jù)病毒載量[(1.0×104)copies/mL[3]中位數(shù)]的不同分為低病毒載量組(38例)和高病毒載量組(30例)。低病毒載量組患者中男性23例,女性15例;年齡14~86歲,平均年齡(49.28±5.62)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18.4~26.8 kg/m2,平均BMI(21.86±1.32) kg/m2;病程 1~30 d,平均病程(12.42±2.16)d。高病毒載量組患者中男性18例,女性12例;年齡14~87歲,平均年齡(49.62±5.40)歲;BMI 18.5~26.9 kg/m2,平均BMI(21.74±1.28) kg/m2;病程 1~32 d,平均病程(12.68±2.05)d。兩組患者一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),組間具有可比性。本研究經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《感染性疾病診療指南》[4]中感染性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn);②年齡14~87歲;③依從性較好。排除標(biāo)準(zhǔn):①確診為肺炎支原體、腺病毒、巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、肝炎病毒、柯薩奇病毒或者腸道病毒71型等病毒感染者;②免疫系統(tǒng)或者血液系統(tǒng)存在基礎(chǔ)病者;③臨床資料不完整。

        1.2 研究方法 抽取所有患者清晨空腹外周靜脈血2 mL,將血液注入至2 mL乙二胺四乙酸鈉鹽抗凝劑(江西洪達(dá)醫(yī)療器械集團(tuán)有限公司)的采血管中,搖動(dòng)5~10次使其充分混合搖勻,待靜脈血和抗凝劑混合均勻后,置于4~8 ℃環(huán)境下保存。按照1∶1的比例將1 mL血樣和1 mL濃度為0.9%的氯化鈉注射液混合均勻,然后將其緩慢注入裝有500 μL淋巴細(xì)胞分離溶液(武漢生物制品研究所,國(guó)藥準(zhǔn)字S10930007,規(guī)格:100 mL)的離心玻璃管內(nèi),采用醫(yī)用離心機(jī)(德州博昂生物技術(shù)有限公司,魯?shù)滦祩?0200189號(hào),型號(hào):TD-5M-i )以2 000 r/min轉(zhuǎn)速離心20 min,采用塑料吸管吸取中間的白細(xì)胞層,然后置入1.5 mL刻度的離心管內(nèi),以12 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min,棄去上清液,混合均勻沉淀物和50 μL的DNA提取液,置于恒溫100 °C環(huán)境下保存10 min,以12 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min,提取DNA待用。將提取的DNA樣本上清液2 μL加到裝有43 μL酶反應(yīng)液(廣州達(dá)安基因股份有限公司)的PCR反應(yīng)管內(nèi),以8 000 r/min離心數(shù)秒,置于熒光定量擴(kuò)增儀(美國(guó)ABI,型號(hào):Step One Plus)樣品槽內(nèi),結(jié)合對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陽(yáng)性定量參考物、陰性質(zhì)控物、標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)樣本,開(kāi)展相應(yīng)循環(huán)條件設(shè)置同時(shí)結(jié)合參數(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

        1.3 觀察指標(biāo) ①比較兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)。抽取兩組患者清晨空腹靜脈血2 mL置于抗凝置管內(nèi),予以瑞氏血細(xì)胞染色,采用血細(xì)胞分析儀(邁瑞,型號(hào):BC-6800 Plus)檢測(cè)兩組患者血白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、異常淋巴細(xì)胞比例、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(LYMPH)及比例(LYMPH%)、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)(MONO)及比例(MONO%)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)及血紅蛋白(HGB)水平。②比較兩組患者生化指標(biāo)。抽取兩組患者清晨空腹靜脈血2 mL置于無(wú)抗凝劑的真空試管內(nèi),采用全自動(dòng)生化分析儀(德國(guó)羅氏,型號(hào):P800)檢測(cè)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、乳酸脫氫酶(LD)、總膽汁酸(TBA)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脫氫酶同工酶(LDH)水平。③分析常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)與EBV-DNA載量的相關(guān)性。④比較兩組患者退熱及住院時(shí)間。⑤比較兩組患者有效率。顯效:結(jié)束治療后發(fā)熱、咳嗽、咳痰等臨床癥狀消失,且實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果恢復(fù)到正常狀態(tài);好轉(zhuǎn):結(jié)束治療后各項(xiàng)臨床癥狀減輕,實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果改善;無(wú)效:結(jié)束治療后各項(xiàng)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果無(wú)任何好轉(zhuǎn)甚至加重[5]??傆行?(顯效+好轉(zhuǎn))例數(shù)/總例數(shù)×100%。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示,組間比較行χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料以()表示,組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);相關(guān)性分析采取Spearman檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)比較 兩組患者WBC、MONO、MONO%、PLT、HGB水 平 比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高病毒載量組患者外周血內(nèi)的異常淋巴細(xì)胞比例、LYMPH、LYMPH%水平均高于低病毒載量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

        表1 兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)比較()

        表1 兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)比較()

        注:WBC:白細(xì)胞計(jì)數(shù);MONO:?jiǎn)魏思?xì)胞;LYMPH:淋巴細(xì)胞;PLT:血小板;HGB:血紅蛋白。

        組別 例數(shù) WBC(×109/L) 異常淋巴細(xì)胞比例(%) MONO(×109/L) MONO%(%)高病毒載量組 30 12.14±3.50 6.48±1.25 1.14±0.32 9.48±2.52低病毒載量組 38 11.50±3.62 1.85±0.48 1.16±0.28 9.68±2.40 t值 0.734 20.990 0.284 0.334 P值 0.465 0.011 0.777 0.740組別 例數(shù) LYMPH(×109/L) LYMPH%(%) PLT(×109/L) HGB(g/L)高病毒載量組 30 6.26±1.35 48.46±12.14 280.14±60.12 115.62±25.18低病毒載量組 38 4.28±1.02 37.98±10.24 275.62±58.40 116.85±24.32 t值 6.891 7.191 0.313 0.204 P值 0.036 0.041 0.755 0.839

        2.2 兩組患者生化指標(biāo)比較 兩組患者ALT和AST水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),高病毒載量組患者血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平均高于低病毒載量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

        表2 兩組患者生化指標(biāo)比較()

        表2 兩組患者生化指標(biāo)比較()

        注:ALT:谷丙轉(zhuǎn)氨酶;AST:谷草轉(zhuǎn)氨酶;LD:乳酸脫氫酶;TBA:總膽汁酸;CK-MB:肌酸激酶同工酶;LDH:乳酸脫氫酶同工酶。

        組別 例數(shù) ALT(U/L) AST(U/L) LD(U/L) TBA(μmol/L) CK-MB(U/L) LDH(U/L)高病毒載量組 30 36.78±9.76 50.62±14.15 334.12±58.16 12.68±2.45 31.78±6.02 60.96±15.84低病毒載量組 38 35.98±9.65 48.56±12.60 279.25±50.65 7.75±1.62 23.05±5.42 48.76±12.35 t值 0.338 0.634 4.154 9.958 6.280 3.570 P值 >0.05 >0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05

        2.3 常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)和EBV-DNA載量的相關(guān)性分析 外周血中異常淋巴細(xì)胞比例、LYMPH、LYMPH%與外周血中EBV-DNA載量呈正相關(guān)(P<0.05),血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平與外周血中EBV-DNA載量呈正相關(guān)(P<0.05),見(jiàn)表3。

        表3 常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)與EBV-DNA載量的相關(guān)性分析

        2.4 兩組患者退熱及住院時(shí)間比較 高病毒載量組患者的退熱及住院時(shí)間均長(zhǎng)于低病毒載量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表4。

        表4 兩組患者退熱及住院時(shí)間比較(d,)

        表4 兩組患者退熱及住院時(shí)間比較(d,)

        組別 例數(shù) 退熱時(shí)間 住院時(shí)間高病毒載量組 30 4.95±1.32 8.96±2.14低病毒載量組 38 3.10±1.02 5.78±1.32 t值 6.522 7.531 P值 <0.05 <0.05

        2.5 兩組患者有效率比較 高病毒載量組患者的有效率低于低病毒載量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表5。

        表5 兩組患者有效率比較 [例(%)]

        3 討論

        感染性疾病通常是因細(xì)菌、病毒和真菌或衣原體、支原體感染導(dǎo)致,機(jī)體免疫力降低易出現(xiàn)各類感染性疾病,影響患者健康。確定感染性疾病患者的病情嚴(yán)重程度后及時(shí)予以進(jìn)一步治療對(duì)促進(jìn)康復(fù)、改善預(yù)后有著重要意義。EBV-DNA載量檢測(cè)在診斷EBV感染中有著方便、迅速和特異度較高等特點(diǎn),有助于提升診斷準(zhǔn)確度,目前已有多類方法被應(yīng)用到EBV感染檢測(cè)中,但普遍存在假陽(yáng)性率較高及檢測(cè)率較低等缺點(diǎn)。

        熒光定量PCR屬于檢測(cè)EBV-DNA載量一類準(zhǔn)確、可靠、靈敏的技術(shù),可較好反映出患者感染狀況,病毒載量高低能作為評(píng)定患者病情的一項(xiàng)重要指標(biāo)[6]。本研究收集感染性疾病患者的外周血,后經(jīng)熒光定量PCR對(duì)其單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)的EBV-DNA載量開(kāi)展檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示,高病毒載量患者外周血異常淋巴細(xì)胞比例與LYMPH、 LYMPH%高于低病毒載量組,伴隨EBV載量不斷增加,患者臨床癥狀更為明顯,能于常規(guī)外周血指標(biāo)中體現(xiàn)出來(lái)。感染EBV病毒后,異常的淋巴細(xì)胞和病毒會(huì)浸潤(rùn)機(jī)體中各個(gè)臟器,引發(fā)全身性的臟器病理學(xué)改變,從而出現(xiàn)各類臨床癥狀及相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)異常[7-8]。研究發(fā)現(xiàn),感染EBV患者伴隨EBV-DNA載量不斷升高,其肝功能及心臟功能等生化指標(biāo)水平也有明顯上升[9]。本研究發(fā)現(xiàn),高病毒載量組患者血清LD、TBA、LDH以及CK-MB水平高于低病毒載量組,說(shuō)明隨著EBVDNA載量增加,患者臟器的受損程度也在不斷加重。本研究的創(chuàng)新之處在于分析了常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)和EBV-DNA載量的相關(guān)性:結(jié)果顯示,外周血中異常淋巴細(xì)胞比例、LYMPH、LYMPH% 與外周血中EBV-DNA載量呈正相關(guān),血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平與EBV-DNA載量也呈正相關(guān)。與胡杰等[10]研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示,高病毒載量組患者的退熱及住院時(shí)間均長(zhǎng)于低病毒載量組,且高病毒載量組患者的有效率低于低病毒載量組,由此可見(jiàn),EBV-DNA載量高低對(duì)判斷患者的臨床轉(zhuǎn)歸有著重要的指示作用。

        綜上所述,檢測(cè)外周血中EBV-DNA載量在感染性疾病患者病情評(píng)估及預(yù)后判斷中有著重要價(jià)值,能為臨床醫(yī)師開(kāi)展診療工作提供一定參考依據(jù)。但本研究依舊有不足,如納入的病例數(shù)較少,且病例全部來(lái)源于同一家醫(yī)院,得出的研究結(jié)果存在局限性,還需未來(lái)開(kāi)展大樣本、多中心、長(zhǎng)期試驗(yàn),以進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)論。

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