陳瑋鴻,柳紅芳,郭 燕,張夢(mèng)久

(1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院，北京 100700；2. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

糖尿病腎臟病是高血糖導(dǎo)致的腎臟結(jié)構(gòu)和功能障礙性疾病，因患者腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)和功能障礙，不能完全排泄體內(nèi)代謝廢物如硫酸吲哚酚、硫酸對(duì)甲酚等腸源性尿毒癥毒素，直接導(dǎo)致腸道微環(huán)境改變，腸道菌群失衡，引起腸壁通透性增加，腸腔內(nèi)大量的脂多糖、甲酚、吲哚啉基分子等毒素通過(guò)腸壁進(jìn)入血液循環(huán)，促進(jìn)體內(nèi)微炎癥形成，產(chǎn)生一系列促炎性因子，導(dǎo)致腎小球內(nèi)炎癥放大，腎小管上皮細(xì)胞壞死、腎間質(zhì)纖維化，加重糖尿病腎病的發(fā)展[1]。中醫(yī)認(rèn)為糖尿病腎臟病與隋代甄立言《古今錄驗(yàn)方》中的“腎消病”最為密切相關(guān)[2]，《古今錄驗(yàn)方》云：“渴而飲水不能多，但腿腫腳先瘦小，陰痿弱，數(shù)小便者，此是腎消病也?！盵3]糖尿病腎臟病臨床主要表現(xiàn)為疲倦乏力、腰膝酸軟、顏面肢體浮腫、惡心嘔吐、二便不暢等，目前研究認(rèn)為其病機(jī)特點(diǎn)是本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜，本虛以脾腎氣虛為根本，標(biāo)實(shí)以濕熱、痰濁、瘀血夾雜膠結(jié)為主[4-6]。消渴病起于中焦而及下焦，發(fā)展到后期累及于腎臟，導(dǎo)致脾腎兩臟失用，脾失健運(yùn)，不能升清降濁，腎不主水，氣化失常，開(kāi)合不利，導(dǎo)致水濕痰濁內(nèi)蘊(yùn)，日久郁而化熱，脾腎兩虛，積傷入絡(luò)，血脈運(yùn)行不暢，最終導(dǎo)致濕熱、痰濁、瘀血等，其中以濕熱因素居多?，F(xiàn)有研究認(rèn)為糖尿病腎臟病與腸道菌群失衡關(guān)系密切，但中醫(yī)證型與腸道菌群分布特征的關(guān)系鮮有報(bào)道,因此本研究探討了糖尿病腎臟病濕熱證患者腸道菌群分布的特征，旨在為糖尿病腎臟病的中西醫(yī)結(jié)合防治提供有意義的參考。

1 資料和方法

1.1診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.1.12型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《中國(guó)2型糖尿病防治指南2017年版》的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，符合下述3條任意一條即可診斷：①典型糖尿病癥狀，如原因不明的體重減輕、多飲、多食、多尿加上隨機(jī)(一天中任意時(shí)間)的靜脈血漿葡萄糖值≥11.1 mmoL/L；②空腹(至少8 h沒(méi)有進(jìn)食熱量)靜脈血漿葡萄糖值≥7.0 mmoL/L；③葡萄糖負(fù)荷后2 h靜脈血漿葡萄糖值≥11.1 mmoL/L。無(wú)糖尿病典型癥狀者，需改日重復(fù)檢測(cè)。

1.1.2糖尿病腎臟病診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《中國(guó)2型糖尿病防治指南2017年版》的糖尿病腎臟病診斷標(biāo)準(zhǔn)，符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)或腎臟組織活檢證實(shí)。臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：確診糖尿病后，隨機(jī)尿液的尿白蛋白/尿肌酐≥30 mg/g為尿白蛋白排泄增加，3～6個(gè)月內(nèi)重復(fù)檢測(cè)，其中3次中任意2次有尿白蛋白排泄增加，排除發(fā)熱、感染、心力衰竭等因素后可診斷為糖尿病腎臟??；或確診糖尿病后，估算腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)<60 mL/(min·1.73 m2)3個(gè)月以上，排除其他慢性腎臟病即可診斷為糖尿病腎臟病。

1.1.3中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 通過(guò)文獻(xiàn)查閱，結(jié)合既往課題數(shù)據(jù)和糖尿病腎臟病相關(guān)行業(yè)規(guī)范，通過(guò)問(wèn)卷咨詢、會(huì)議討論的靈活方式進(jìn)行了5輪專家咨詢，制定出《中醫(yī)證候調(diào)查表》，認(rèn)為濕熱證型符合下述2個(gè)及2個(gè)以上癥狀方可判定：肢體困重、食少納呆、脘腹脹滿、口干口苦、舌苔黃膩。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1單純2型糖尿病患者納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)但無(wú)糖尿病腎臟病變；②采樣前2個(gè)月未服用過(guò)抗生素、二甲雙胍、阿卡波糖、黃連素、微生物活菌制劑、乳果糖、通便藥物等；③血壓(100～170)/(40～80)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，糖化血紅蛋白4%～10%，血肌酐58～110 μmol/L。

1.2.2糖尿病腎臟病濕熱證患者納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合糖尿病腎臟病診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)濕熱證辨證標(biāo)準(zhǔn)；②采樣前2個(gè)月未服用過(guò)抗生素、二甲雙胍、阿卡波糖、黃連素、微生物活菌制劑、乳果糖、通便藥物等，采樣前1個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)外用灌腸療法、結(jié)腸透析者；③血壓(100～170)/(40～80)mmHg，糖化血紅蛋白4%～10%，血肌酐58～700 μmol/L。

1.2.3糖尿病腎臟病非濕熱證患者納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合糖尿病腎臟病診斷標(biāo)準(zhǔn)且不符合中醫(yī)濕熱證辨證標(biāo)準(zhǔn)；②采樣前2個(gè)月未服用過(guò)抗生素、二甲雙胍、阿卡波糖、黃連素、微生物活菌制劑、乳果糖、通便藥物等，采樣前1個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)外用灌腸療法、結(jié)腸透析者；③血壓(100～170)/(40～80)mmHg，糖化血紅蛋白4%～10%，血肌酐58～700 μmol/L。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn) ①患胃腸道疾病、腸道產(chǎn)氣疾病者；②患急、慢性全身或局部感染者；③6個(gè)月內(nèi)有手術(shù)或外傷史者；④6個(gè)月內(nèi)有惡性高血壓、心腦血管意外和糖尿病酮癥酸中毒等危急重病病史者；⑤患嚴(yán)重的呼吸、消化、肝病、血液、腫瘤、自身免疫等疾病者；⑥妊娠、哺乳者；⑦不自愿受試或不簽署知情同意書(shū)者。

1.4一般資料 參考上述標(biāo)準(zhǔn)，選擇2018年10月—2019年11月就診于北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院的20例糖尿病腎臟病濕熱證患者作為糖尿病腎病濕熱組， 20例健康體檢者作為健康組，20例單純2型糖尿病患者作為糖尿病組，20例糖尿病腎臟病非濕熱證患者作為糖尿病腎病非濕熱組，入組者年齡18～80歲。4組間年齡、體質(zhì)指數(shù)、收縮壓、舒張壓比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，糖尿病腎病濕熱組和糖尿病腎病非濕熱組肌酐、尿酸、C反應(yīng)蛋白、24 h尿蛋白定量、糖化血紅蛋白比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，糖尿病腎病濕熱組和健康組肌酐、C反應(yīng)蛋白比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，糖尿病腎病濕熱組和糖尿病組患者肌酐、C反應(yīng)蛋白、糖化血紅蛋白比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見(jiàn)表1。本研究經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查同意(DZMEC-KY-2018-21)。

表1 4組受檢者基線資料比較

組別例數(shù)肌酐/[中位數(shù)(四分位數(shù)間距),μmol/L]尿酸/(x±s,μmol/L)C反應(yīng)蛋白/[中位數(shù)(四分位數(shù)間距),mg/L]24 h尿蛋白定量/[中位數(shù)(四分位數(shù)間距),g/24 h]糖化血紅蛋白/(x±s,%)糖尿病腎病濕熱組2089.85(74.63)371.80±104.931.50(2.73)1.13(3.12)7.27±1.93糖尿病腎病非濕熱組20103.95(179.05)379.34±77.321.00(0.94)1.66(7.76)6.98±1.09健康組2054.75(23.70)①293.01±91.213.55(26.59)①糖尿病組2054.55(15.03)①334.38±98.921.66(2.15)①7.10±1.29①

1.5研究方法 收集各組受檢者糞便樣本進(jìn)行基因DNA提取，獲取糞便樣本的生物學(xué)信息。將4組檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行菌門(mén)和菌屬水平分析，使用R語(yǔ)言作圖工具繪制柱狀圖，比較各組腸道菌群的多樣性、菌落組成、物種豐度。

1.5.1糞便樣本基因檢測(cè)方法 讓受試者將糞便排到干凈的容器中，用無(wú)菌勺挖取中后部?jī)?nèi)側(cè)的糞便約1 g，放入腸道菌群保存管中，并立刻放入-80 ℃冰箱進(jìn)行低溫保存。按照以下步驟進(jìn)行檢測(cè)：①提取糞便樣本中基因組DNA后，使用1%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)提取的基因組DNA進(jìn)行質(zhì)檢；②按糞便樣本基因16s V3-V4區(qū)域，合成帶有錯(cuò)位堿基的融合引物，每個(gè)樣本重復(fù)3次，將同一樣本的PCR產(chǎn)物混合后，用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，使用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒(AXYGEN公司)切膠回收PCR產(chǎn)物，三羥甲基氨基甲烷與鹽酸配比溶液洗脫，2%瓊脂糖電泳檢測(cè)；③Miseq文庫(kù)構(gòu)建：首先基因兩端連接“Y”字形接頭，使用磁珠篩選純化接頭自連片段，利用PCR擴(kuò)增構(gòu)建文庫(kù)模板的富集，氫氧化鈉變性，產(chǎn)生單鏈DNA片段；④Miseq上機(jī)測(cè)序：DNA片段的一端與引物堿基互補(bǔ)，另一端隨機(jī)與附近的另外一個(gè)引物互補(bǔ)，兩端都固定在芯片上，形成“橋”，通過(guò)PCR擴(kuò)增，產(chǎn)生DNA簇，DNA擴(kuò)增子線性化使DNA簇成為單鏈，加入改造過(guò)的DNA聚合酶和帶有4種熒光標(biāo)記的脫氧核糖核苷三磷酸，每次循環(huán)只合成一個(gè)堿基，用激光掃描反應(yīng)板表面，根據(jù)捕捉的熒光序號(hào)，讀取模板序列第一輪反應(yīng)所聚合上去的核苷酸種類，將“熒光基團(tuán)”和“終止基團(tuán)”化學(xué)切割，恢復(fù)3’端黏性，繼續(xù)聚合第二個(gè)核苷酸，然后依次統(tǒng)計(jì)每輪收集到的熒光信號(hào)結(jié)果，最終獲知模板DNA片段的序列。

1.5.2數(shù)據(jù)質(zhì)控優(yōu)化 ①利用Trimmomatic軟件、Pear軟件對(duì)Fastq數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控：對(duì)于Trimmomatic軟件，采用滑動(dòng)窗口方法,窗口大小制定為50 bp，平均質(zhì)量值為20，最小保留序列長(zhǎng)度為120，Pear軟件用于去除具有N的序列；②利用Flash軟件、Pear軟件根據(jù)PE的重疊關(guān)系對(duì)兩端序列進(jìn)行拼接處理，最小重疊設(shè)置10 bp，錯(cuò)配率為0.1，得到Fasta序列；③根據(jù)已知數(shù)據(jù)庫(kù)用嵌合體識(shí)別方法比對(duì)去除Fasta序列的嵌合體，對(duì)于未知數(shù)據(jù)庫(kù)使用自比對(duì)方法進(jìn)行去除，同時(shí)去除不符合要求的短序列，得到優(yōu)質(zhì)Fasta數(shù)據(jù)；④下機(jī)的雙端序列數(shù)據(jù)，再去除短序列和引物并拼接后得到經(jīng)過(guò)過(guò)濾的低質(zhì)量的原始序列，原始序列再經(jīng)進(jìn)一步去除嵌合體、短序列后得到優(yōu)質(zhì)序列；⑤為了便于進(jìn)行生物信息統(tǒng)計(jì)分析，將數(shù)據(jù)質(zhì)控優(yōu)化后得到的優(yōu)質(zhì)序列進(jìn)行97%相似水平的OTUs聚類分析，選用 uparse聚類法?；诰垲惤Y(jié)果，進(jìn)行多樣性分析及物種注釋分析。

2 結(jié) 果

2.1OTUs聚類結(jié)果 共產(chǎn)生1 726個(gè)OTUs，經(jīng)過(guò)抽平處理剩余1 592個(gè)OTUs，其中健康組平均每個(gè)樣品含204.7個(gè)OTUs，糖尿病組平均每個(gè)樣品含176個(gè)OTUs，糖尿病腎病濕熱組平均每個(gè)樣品含206.1個(gè)OTUs，糖尿病腎病非濕熱組平均每個(gè)樣品含204.8個(gè)OTUs，4組OTUs的平均數(shù)量：糖尿病腎病濕熱組>糖尿病腎病非濕熱組>健康組>糖尿病組。

2.2樣本量合理曲線 基于4組受檢者的OTUs聚類結(jié)果繪制物種積累曲線(見(jiàn)圖1)，發(fā)現(xiàn)隨著樣本量的增加，曲線緩慢上升，后逐漸平穩(wěn)，表明此時(shí)并不會(huì)隨樣本量的增加而發(fā)現(xiàn)大量新物種，說(shuō)明本研究樣本量較為充分。

圖1 基于4組受檢者腸道菌群的OTUs聚類結(jié)果繪制的物種積累曲線

2.3測(cè)序量合理曲線 基于4組受檢者的OTUs聚類結(jié)果繪制稀釋性曲線和Shannon-Wiener曲線(見(jiàn)圖2及圖3)，發(fā)現(xiàn)隨著測(cè)序量的增加，曲線趨向平坦，說(shuō)明測(cè)序數(shù)據(jù)量合理，更多的數(shù)據(jù)量只會(huì)產(chǎn)生少量新的OTU，可以反映4組樣本中絕大部分的微生物多樣性信息。

圖2 基于4組受檢者腸道菌群的OTUs聚類結(jié)果繪制的稀釋性曲線

圖3 基于4組受檢者腸道菌群的OTUs聚類結(jié)果繪制的Shannon-Wiener曲線

2.4多樣性指數(shù)比較 基于OUTs聚類結(jié)果，使用SPSS軟件做箱線圖判斷chao1指數(shù)、observed spe-cies指數(shù)、PD whole tree指數(shù)、shannon指數(shù)離散程度，見(jiàn)圖4。結(jié)果糖尿病腎病濕熱組chao1指數(shù)、observed species指數(shù)、PD whole tree指數(shù)、shannon指數(shù)高于健康組、糖尿病組、糖尿病腎病非濕熱組，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

圖4 基于OUTs聚類結(jié)果的4組腸道菌群多樣性指數(shù)箱形圖

2.5菌群構(gòu)成及豐度

2.5.1菌門(mén)水平構(gòu)成及豐度 4組受試者腸道菌群物種菌門(mén)水平豐度見(jiàn)圖5，主要存在8個(gè)菌門(mén)：厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)、放線菌門(mén)(Actinobacteria)、變形菌門(mén)(Proteobacteria)、梭桿菌門(mén)(Fusobacteria)、疣微菌門(mén)(Verrucomicrobia)、互養(yǎng)菌門(mén)(Synergistetes)、軟壁菌門(mén)(Tenericutes)，其中厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)、放線菌門(mén)(Actinobacteria)、變形菌門(mén)(Proteobacteria)為優(yōu)勢(shì)菌門(mén)，4組優(yōu)勢(shì)菌門(mén)豐度見(jiàn)圖6。Metastats分析，糖尿病腎病濕熱組放線菌門(mén)(Actinobacteria)的豐度明顯高于健康組(P<0.05)，變形菌門(mén)(Proteobacteria)的豐度明顯低于糖尿病腎病非濕熱組(P<0.05)，其余菌門(mén)的豐度各組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表2。

橫坐標(biāo)為樣本名稱圖5 4組受試者腸道菌群物種菌門(mén)水平豐度(相對(duì)豐度1%以上的物種信息)

圖6 4組受試者腸道菌群菌門(mén)水平物種組成情況

表2 4組受試者腸道菌群菌門(mén)水平物種相對(duì)豐度比較

2.5.2菌屬水平構(gòu)成及豐度 在菌屬水平上，4組受試者樣本主要獲得72個(gè)菌屬(見(jiàn)圖7)，豐度前10的菌屬有擬桿菌屬(Bacteroides)、布勞特氏菌屬(Blautia)、普拉梭菌屬(Faecalibacterium)、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、普雷沃菌屬(Prevotella)、Unidentified、乳桿菌屬(Lactobacillus)、優(yōu)桿菌屬(Eubacterium)、巨型球菌屬(Megasphaera)、巨單胞菌屬(Megamonas)，4組物種菌屬豐度見(jiàn)圖8。 Metastats分析，與健康組比較，糖尿病腎病濕熱組布勞特氏菌屬(Blautia)、毛螺菌屬(Lachnospira)、羅斯氏菌屬(Roseburia)的豐度明顯降低(P均<0.05)，雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、乳桿菌屬(Lactobacillus)的豐度明顯升高(P均<0.05)；與糖尿病組比較，糖尿病腎病濕熱組布勞特氏菌屬(Blautia)的豐度明顯降低(P<0.05)，普雷沃菌屬(Prevotella_2)、瘤胃球菌(Ruminococcaceae_UCG-002)、優(yōu)桿菌屬(Eubac-terium_eligens_group)的豐度明顯升高(P均<0.05)；與糖尿病腎病非濕熱組比較，糖尿病腎病濕熱組糞芽孢菌屬(Coprobacillus)的豐度明顯升高(P<0.05)，克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、腸桿菌屬(Enterorhabdus)、變形菌屬(Proteus)的豐度明顯降低(P均<0.05)，見(jiàn)表3～5。

橫坐標(biāo)為樣本名稱 圖7 4組受試者腸道菌群物種菌屬水平豐度(相對(duì)豐度1%以上的物種信息)

圖8 4組受試者腸道菌群菌屬水平物種組成情況

表3 健康組和糖尿病腎病濕熱組腸道菌群菌屬水平豐度值比較

表4 糖尿病組和糖尿病腎病濕熱組腸道菌群菌屬水平豐度值比較

表5 糖尿病腎病濕熱組和糖尿病腎病非濕熱組腸道菌群菌屬水平豐度值比較

3 討 論

糖尿病腎臟病是糖尿病常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥，糖尿病患者中約34.2%的患者合并白蛋白尿，其中微量白蛋白尿占26.0%，大量白蛋白尿占8.2%，因糖尿病導(dǎo)致的慢性腎功能不全的住院率逐年升高，已經(jīng)超過(guò)慢性腎小球腎炎導(dǎo)致的慢性腎功能不全的住院率，成為腎臟代替治療的首要原因之一[7]。目前，糖尿病腎臟病的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，公認(rèn)的機(jī)制有基因多態(tài)性、血流動(dòng)力學(xué)改變、糖代謝紊亂、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等，近年來(lái)糖尿病腎臟病患者腸道內(nèi)微環(huán)境日益受到人們的重視。

本研究中，糖尿病腎病濕熱組變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)的豐度低于糖尿病腎病非濕熱組，厚壁菌門(mén)、放線菌門(mén)的豐度高于糖尿病腎病非濕熱組。厚壁菌門(mén)的差異主要表現(xiàn)在糞芽孢菌屬。既往文獻(xiàn)報(bào)道，糞芽孢菌屬在腸癌大鼠、慢性功能性便秘患者、老年人中豐度明顯升高[8-10]，是潛在的致病菌，與癌癥關(guān)系密切。變形菌門(mén)的差異主要表現(xiàn)在腸桿菌屬、克雷伯菌屬、變形菌屬，這3種菌屬均為變形菌門(mén)腸桿菌科革蘭染色陰性的細(xì)菌，是可以引起多種條件性致病感染的常見(jiàn)病原菌，常分布于外傷創(chuàng)面、泌尿道、呼吸道等部位，近年來(lái)耐藥性逐步增強(qiáng)，在承德市中心醫(yī)院的調(diào)查研究中發(fā)現(xiàn)腸桿菌屬和克雷伯菌屬對(duì)含β-內(nèi)酰胺環(huán)的抗菌藥物的耐藥率幾乎都達(dá)到100%[11]，對(duì)其他類抗生素也存在著不同程度的耐藥情況，所以導(dǎo)致臨床治療存在一定的困難，治愈率低，病死率高。糖尿病腎臟病中醫(yī)證型與腸道菌群相關(guān)研究較少，筆者查閱其他疾病，如功能性便秘的脾胃濕熱證與非脾胃濕熱證患者的糞便腸道菌群分布情況，發(fā)現(xiàn)非脾胃濕熱證患者腸道菌屬內(nèi)腸桿菌屬數(shù)量明顯增多[12]，這與本研究中非濕熱證糖尿病腎臟病患者腸道菌群分布情況相似。

本研究中，糖尿病腎病濕熱組梭桿菌門(mén)、厚壁菌門(mén)的豐度低于糖尿病組，放線菌門(mén)的豐度高于糖尿病組。厚壁菌門(mén)的差異主要表現(xiàn)在布勞特氏菌屬，該菌屬是腸道發(fā)酵膳食纖維產(chǎn)生短鏈脂肪酸的微生物之一，短鏈脂肪酸在糖尿病、肥胖等代謝疾病中有積極作用，除了可維持腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)外，還可以降低血糖、改善胰島素抵抗等[13]。放線菌門(mén)的差異主要表現(xiàn)在雙歧桿菌屬，該菌屬作為人體重要的微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，具有調(diào)節(jié)免疫功能、保護(hù)腸道黏膜屏障、改善肝功能等多種作用[14-16]。其他條件致病菌如普雷沃菌6屬、普雷沃菌2屬、柰瑟菌屬，產(chǎn)丁酸有益菌屬如瘤胃球菌(Ruminococcaceae_UCG-002)、優(yōu)桿菌屬(Eubacterium_eligens_group)的豐度在糖尿病腎臟病濕熱證患者中均明顯升高。普雷沃菌屬主要寄生在人體腸道、泌尿道、口腔系統(tǒng)中，是人體重要菌群之一。當(dāng)機(jī)體免疫力紊亂或免疫力低下時(shí)，普雷沃菌屬則為條件致病菌，可引起內(nèi)源性感染。柰瑟菌屬為革蘭染色陰性球菌，主要包括腦膜炎柰瑟菌、淋球菌等25個(gè)種，其中腦膜炎柰瑟菌、淋球菌嚴(yán)格以人為宿主，菌種豐度與流行性腦脊髓膜炎、淋病、結(jié)直腸腺癌等疾病呈正相關(guān)[17-18]。毛螺旋菌屬、瘤胃球菌屬、優(yōu)桿菌屬可以產(chǎn)生丁酸，丁酸是腸道上皮細(xì)胞能量的主要來(lái)源,而且在保護(hù)腸道黏膜的完整性、改善微生物菌群比例、調(diào)節(jié)腸道炎癥性反應(yīng)、降低血糖、增加胰島素敏感性方面有重要作用，是人體重要的有益菌屬[19-20]。

本研究中，糖尿病腎病濕熱組厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、梭桿菌門(mén)、變形菌門(mén)的豐度低于健康組，放線菌門(mén)的豐度高于健康組。厚壁菌門(mén)的差異主要表現(xiàn)為布勞特氏菌屬、毛螺旋菌屬、羅斯氏菌、韋榮球菌屬含量降低，這些菌屬可以產(chǎn)生丁酸，丁酸能通過(guò)降低腸道pH值調(diào)節(jié)腸道微生物結(jié)構(gòu)，增加有益菌數(shù)量，抑制病原菌的定植[21]。放線菌門(mén)的差異主要表現(xiàn)在雙歧桿菌屬。其他如變形菌門(mén)中的乳桿菌屬、假單胞菌屬、柰瑟菌屬均有明顯升高，其中乳桿菌屬為革蘭染色陽(yáng)性菌屬，同雙歧桿菌屬一同被歸為人體腸道的有益菌，有預(yù)防和治療腸道類疾病、自身免疫性疾病、代謝性疾病等作用，可改善糖耐受，降低血糖、血脂等[22-23]。對(duì)于有益菌含量升高，筆者猜想可能是糖尿病腎臟病患者腸道長(zhǎng)期受到高血糖的刺激，腸道內(nèi)菌群構(gòu)成發(fā)生改變，為應(yīng)對(duì)腸道內(nèi)炎癥、內(nèi)毒素等而產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，從而導(dǎo)致雙歧桿菌屬、乳桿菌屬數(shù)量增高。假單胞菌屬為革蘭染色陰性桿菌，代表菌種為銅綠假單胞菌，在某種程度上均為條件致病菌，當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)容易發(fā)生感染，也是醫(yī)院感染的重要病原菌，常見(jiàn)于呼吸系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)及外傷創(chuàng)面的感染，耐藥率較高[24]。

總之，糖尿病腎臟病濕熱證和非濕熱證患者均有不同程度的致病菌、有益菌增加，因?yàn)槟c道內(nèi)微生態(tài)系統(tǒng)復(fù)雜多變，至今未完全闡明，且考慮到可能因?yàn)闃颖玖?、檢測(cè)方法、控制因素等多方面原因，研究結(jié)果有待進(jìn)一步探究。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。