孫萬奎，胡 冰

(涼州區(qū)畜牧獸醫(yī)技術推廣中心，甘肅 武威 733000)

本試驗選取乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺聯(lián)合造模的方法，通過測定不同組小鼠給藥前后體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)及全血中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的含量，進而分析生當歸水煎液的補血作用及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

當歸由甘肅中醫(yī)藥大學提供。

1.2 藥物、試劑

環(huán)磷酰胺(注射型)、乙酰苯肼、山東阿膠漿、雙蒸水、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒(南京建成)等。

1.3 實驗器械與儀器

小鼠代謝籠、剖檢常用器械、血細胞全自動分析儀、超聲波清洗機、旋轉蒸發(fā)儀、分析天平、電熱套、離心機、燒杯、圓底燒瓶、電子天平、冰箱(海爾)、移液槍等。

1.4 動物

清潔級雄性昆明小鼠80只，每組20只，體重20±2 g，由甘肅中醫(yī)藥大學提供。

2 實驗方法

2.1 當歸水煎液的制備

生當歸25 g，加入2倍蒸餾水，浸泡2 h，然后加熱煮沸2次，1 h/次，混合兩次水煎液，紗布過濾，旋轉蒸發(fā)儀濃縮為0.5 g生藥/mL，即濃縮到50 mL。

按此方法制備150 mL水煎液。

2.2 分組與造模

實驗小鼠隨機分為4組：正常對照組、陽性對照組(0.4 mL/20 g，每隔24 h灌阿膠漿1次)、模型組、生當歸水煎液組，每組20只小鼠。生當歸水煎液組劑量均為10 g/kg(按生藥量計算，每日一次，每只小鼠早上灌胃0.4 mL)，模型組小鼠和正常對照組均灌給相同量的蒸餾水，每24 h一次，連續(xù)9 d。模型組、陽性對照組、生當歸水煎液組在灌藥的第2天和第5天注射(皮下)乙酰苯肼生理鹽水溶液20 mg/kg、40 mg/kg，從第5天起,每天注射(腹腔)環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液40 mg/kg，連續(xù)注射(腹腔)4 d。正常對照組同時注射相同量的生理鹽水。

2.3 血液的采集、檢測及免疫機能的檢測

2.3.1 血液的采集 各組于最后一次給藥24 h后，摘除眼球取血同時收集血液，并在標記后按照葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒進行檢測。

2.3.2 血液中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒檢測 血液在標記后按照葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒進行檢測。

2.3.3 免疫器官的采集及機能檢測 小鼠用脫頸椎法處死，然后采集脾臟和胸腺并稱取重量，計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，脾臟指數(shù)=脾重(mg)/鼠重(g)×10；胸腺指數(shù)=胸腺重(mg)/鼠重(g)×10。

2.3.4 數(shù)據(jù)處理 用Spss17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行方差分析，各組數(shù)據(jù)結果以均數(shù)±標準差(±s)表示，比較各組間差異的顯著性。

3 結果與分析

3.1 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶結果及分析

按上述方法測定其葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的含量，結果見表1，圖1。從表1、圖1可以看出，與正常組比較，模型組高鐵血紅蛋白還原率明顯降低，具有顯著差異(P<0.05)，而正常血紅蛋白是亞鐵血紅蛋白，可被氧化成為高鐵血紅蛋白，當G-6-PD的含量正常時，通過戊糖旁路形成的NADPH可作為輔酶，在遞氫體參與下，高鐵血紅蛋白被還原成血紅蛋白。但紅細胞內缺少G-6-PD時，高鐵血紅蛋白不能被還原，由此可以說明環(huán)磷酰胺和乙酰苯肼?lián)p傷小鼠血液系統(tǒng)較明顯，使得小鼠血虛，進一步說明血虛小鼠建模是正確的。相比較模型組，陽性對照組與生當歸水煎液組小鼠的高鐵血紅蛋白還原率明顯升高，特別是生當歸水煎液組具有統(tǒng)計學顯著差異(P<0.05)，表明生當歸水煎液可以顯著改善乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺對小鼠血液的破壞作用，具有一定的補血功效。

表1 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶檢測結果

圖1 高鐵血紅蛋白還原率

3.2 不同組小鼠的體重和臟器指數(shù)的結果

從表2、圖 2可知，在聯(lián)合造模之后，模型組、陽性對照組、生當歸水煎液組的小鼠都出現(xiàn)了不同程度的血虛證，外觀表現(xiàn)為：精神不振，聚堆不愿走動，乏力疲倦，食欲減退，被毛無光澤，耳部皮膚蒼白，小鼠血虛證表現(xiàn)最明顯的為模型組，隨給藥天數(shù)的增加，模型組小鼠恢復較慢，其它兩組逐漸恢復，回復較明顯的為生當歸水煎液組。由表3可見，模型組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)降低，與正常組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明小鼠血虛模型建立成功;相比較模型組，陽性對照組和生當歸水煎液組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，表明生當歸水煎液可以改善血虛小鼠體重及免疫器官功能的損傷作用。

表2 各組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)檢測結果

圖2 各組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)檢測結果

4 討論

近年來，關于血虛證動物模型研究較多，造模方法也各不相同 。實驗中小鼠給予環(huán)磷酰胺和乙酰苯肼聯(lián)合造模后，模型組、陽性對照組、生當歸水煎液組的恢復主觀情況，即小鼠的外觀表現(xiàn)、進食和皮毛色澤等，客觀情況，即生化指標分析表現(xiàn)不同，證明小鼠血虛模型在此次實驗中建立成功。正常情況下，高鐵血紅蛋白可以被還原為血紅蛋白。但紅細胞內G-6-PD缺少時，則不能被還原。本實驗顯示血虛小鼠的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶含量顯著升高，從而顯示小鼠體內的高鐵血紅蛋白顯著降低，而血紅蛋白含量顯著升高，由此表明生當歸水煎液的補血機制可能與提高血紅蛋白的含量有關。

胸腺和脾臟都是重要的免疫器官，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，筆者以小鼠胸腺、脾臟作為免疫器官的試驗指標，研究生當歸水煎液對小鼠機體免疫功能的影響。結果表明生當歸水煎液可以使血虛小鼠的胸腺、脾臟指數(shù)提高，并對小鼠的胸腺和脾臟的免疫活性有增強作用，對免疫抑制的血虛小鼠的免疫力有改善作用，可見還有增強機體的免疫的功能。

綜上所述，生當歸水煎液對血虛小鼠具有一定的補血作用，其補血機制可能與提高血紅蛋白的含量有關；同時，它還可能增強機體免疫機能。