馬步芳 王立新 張培培 姚尚辰 常艷

(中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 102629)

根據(jù)《國(guó)務(wù)院辦公廳關(guān)于開展仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)的意見》(國(guó)辦發(fā)〔2016〕8號(hào))等有關(guān)規(guī)定，為加快推進(jìn)仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局于2020年5月12日發(fā)布《開展化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)工作的公告》(2020年第62號(hào))標(biāo)志著化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)工作正式實(shí)施?？股厮幬镌谧⑸鋭┲姓加休^大比例[1]。按抗生素組分構(gòu)成特點(diǎn)可分為單組分和多組分抗生素兩個(gè)大類。中國(guó)藥典2020版二部中已收載的多組分抗生素注射劑包括：注射用替考拉寧、硫酸慶大霉素注射液B等[2]。對(duì)于單組分抗生素注射劑一致性評(píng)價(jià)的策略已有文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，但對(duì)于多組分抗生素注射劑的一致性評(píng)價(jià)又該如何開展？在已頒布的《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求》中，并未對(duì)“多組分”提出具體要求。根據(jù)既往仿制藥一致性評(píng)價(jià)經(jīng)驗(yàn)，在質(zhì)量研究與控制技術(shù)要求方面需參考相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則以及國(guó)內(nèi)外藥典的收載要求，特別是原研或參比制劑所在國(guó)藥典中的質(zhì)控項(xiàng)目和限度規(guī)定。但當(dāng)國(guó)內(nèi)外藥典對(duì)于多組分抗生素的質(zhì)控存在明顯差異，特別是在組分和有關(guān)物質(zhì)控制的限度上存較大分歧時(shí)，這種差異或分歧又會(huì)對(duì)此類抗生素注射劑一致性評(píng)價(jià)產(chǎn)生哪些影響？本文嘗試以替考拉寧品種為例展開討論。

替考拉寧是一種糖肽類多組分抗生素，其組分可分為A2組和A3組。A2組包括A2-1組、A2-2、A2-3組、A2-4、A2-5組和A2-6組；其中，A2-1組包括主要組分A2-1，以及RS3(A2-1a)和RS4(A2-1b)兩個(gè)小組分；A2-3組和A2-5組分別包括主要組分A2-3和A2-5，A2-6組包括2個(gè)親脂性較大的類似物RS1和RS2[6-7]。A3組包括主要組分A3-1，該化合物是A2的去?；咸烟前樊a(chǎn)物[8]。替考拉寧各主要組分化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。在臨床應(yīng)用中，5個(gè)主要組分A2-1至A2-5的抗菌活性與藥代動(dòng)力學(xué)特性相對(duì)差異較小，A3-1組分及4個(gè)小組分RS1至RS4的體外活性與A2組的5個(gè)主要組分并無(wú)顯著性差異[9-10]。此外，A2組和A3組中還存在多個(gè)結(jié)構(gòu)、活性和毒性均未知的微量組分。

圖1 替考拉寧各主要組分化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of main components of teicoplanin

對(duì)于發(fā)酵類的多組分抗生素，產(chǎn)品中各組分的比例與菌種和發(fā)酵工藝有關(guān)，由于菌種、培養(yǎng)基組成、發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度以及提取工藝等多種因素的影響，組分比例差異不可避免[11]。這種差異可能與臨床用藥的療效和毒副反應(yīng)的發(fā)生率直接相關(guān)[12]，故需制定合理的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組分含量及有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制，以保證用藥的安全性和有效性。歐洲藥典(EP)、英國(guó)藥典(BP)、日本藥典(JP)、中國(guó)藥典(ChP)中收載了替考拉寧品種，各國(guó)藥典均在控制效價(jià)活性含量的同時(shí)采用HPLC法對(duì)其組分及有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)控。經(jīng)比較，各國(guó)標(biāo)準(zhǔn)中：液相色譜條件基本一致，各組分和有關(guān)物質(zhì)計(jì)算方法完全相同，均采用相對(duì)比例作為質(zhì)控指標(biāo)，但對(duì)各組分和有關(guān)物質(zhì)的控制限度卻存在較大差異[13-16]。

在國(guó)內(nèi)，替考拉寧和注射用替考拉寧分別有3個(gè)和5個(gè)生產(chǎn)批號(hào)。根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心2019年6月3日發(fā)布的《化學(xué)仿制藥參比制劑目錄(第二十二批)》，注射用替考拉寧的參比制劑為其原研賽諾菲(Sanofi S.p.A)公司生產(chǎn)的他格適(Targocid)，規(guī)格為200mg。國(guó)產(chǎn)仿制注射用替考拉寧包含0.2 g和0.4 g兩個(gè)規(guī)格涉及3個(gè)生產(chǎn)廠家。本文以市場(chǎng)流通環(huán)節(jié)獲取的注射用替考拉寧參比制劑、國(guó)內(nèi)3個(gè)不同廠家生產(chǎn)的仿制藥以及2批次替考拉寧國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品作為研究對(duì)象展開討論。

1 材料與方法

1.1 主要儀器及試劑

儀器 Waters e2695液相色譜儀；Waters 2998 Photodiode Array Detector。

試劑 無(wú)水磷酸二氫鈉、氫氧化鈉均為分析純；乙腈為色譜純；水為超純水。

1.2 供試品

賽諾菲安萬(wàn)特SANOFI(參比制劑)提供替考拉寧注射用粉針(200mg)樣品3批(批號(hào)：A8681、A8682、A8683)；國(guó)產(chǎn)企業(yè)提供替考拉寧原料藥共8批，標(biāo)記為A廠(批號(hào)：2121-170901、2121-180501、2121-180502)，B廠(批號(hào)：YTN1810401、YTN1811401)，C廠(批號(hào)：306T181214A、306T181215A、306T181216A)；中國(guó)食品藥品檢定研究院提供替考拉寧國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品2批(批號(hào)：130374-201002、130374-201903)

1.3 溶液配制

分別取各廠家替考拉寧注射用粉針和原料藥以及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品各適量，以水溶解并稀釋成含替考拉寧約2 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。

靈敏度溶液：取供試品溶液適量，以水稀釋成含替考拉寧約0.01 mg/mL的溶液，作為靈敏度溶液。

1.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用EP10.0中的色譜條件，洗脫方法見表1；色譜柱為X Bridge Shield RP18 5 μm，4.6 mm×250 mm。取供試品溶液和靈敏度溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液中A2-4峰與A2-5峰之間的分離度不小于1.0；靈敏度溶液中A2-2峰的信噪比不小于40。

表1 梯度洗脫方法Tab.1 Gradient elution method

1.5 組分及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

取供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各組分/有關(guān)物質(zhì)的位置描述(相對(duì)于A2-2組分峰的相對(duì)保留時(shí)間，RRT)及含量計(jì)算公式詳見表2和公式1～2。A2-2組分峰的保留時(shí)間約為18 min。

表2 各組分/有關(guān)物質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間Tab.2 Relative retention time of teicoplanin components/related substances

公式1：

公式2：

式中S2為A2組峰面積之和；S3為A3組峰面積之和；x為某一組分/有關(guān)物質(zhì)的峰面積。

2 結(jié)果與討論

2.1 測(cè)定結(jié)果

2.1.1 各國(guó)藥典對(duì)替考拉寧組分和有關(guān)物質(zhì)控制要求比較

各國(guó)藥典自首次收載起[17-20]，對(duì)替考拉寧組分/有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的色譜條件和含量計(jì)算方法保持一致，但對(duì)于受控組分及其質(zhì)控限度存在差異(表3)：日本藥典和中國(guó)藥典保持一致，并沿用至今[13-14]，期間未進(jìn)行任何修訂；歐洲藥典和英國(guó)藥典保持一致，在EP9.8版[21]/BP2020[15]版中作了較大幅度的修訂，沿用至今(EP10.0版[16])，修訂后版本與JP17和ChP2020版之間存在較大差異。關(guān)鍵差異可以概述為兩點(diǎn)：首先，受控組分不同；第二，限度規(guī)定方式和數(shù)值不同。JP17/ChP2020、EP7.0/BP2010和EP9.8/BP2020規(guī)定的受控組分?jǐn)?shù)量分別為3個(gè)、8個(gè)和13個(gè)。除A2-2外，EP7.0/BP2010對(duì)各受控組分的限度規(guī)定方式與JP17/ChP2020一致，均為規(guī)定含量上限或下限，僅在數(shù)值上有差異；EP9.8/BP2020對(duì)除A2-6組之外的所有受控組分含量上下限均有明確的數(shù)值規(guī)定。與JP17/ChP2020和EP7.0/BP2010相比，EP9.8/BP2020增加了“有關(guān)物質(zhì)”這一質(zhì)控項(xiàng)。此外，EP/BP對(duì)雜質(zhì)A的含量有限度規(guī)定，而JP17/ChP2020無(wú)此質(zhì)控項(xiàng)。各藥典標(biāo)準(zhǔn)對(duì)受控組分間相對(duì)比例的規(guī)定允許波動(dòng)的范圍由大到小依次為：JP17/ChP2020＞EP7.0/BP2010＞EP9.8/BP2020。

表3 各國(guó)藥典對(duì)替考拉寧組分/有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)控限度Tab.3 Control limits of teicoplanin components and related substances in different pharmacopoeias

2.1.2 不同來(lái)源替考拉寧組分/有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果

測(cè)定結(jié)果(表4)具有以下兩個(gè)特點(diǎn)：第一，同一來(lái)源內(nèi)部，同一組分/有關(guān)物質(zhì)的含量在不同批次間存在波動(dòng)，波動(dòng)差異由大到小排序：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品＞A廠家＞B廠家＞C廠家＞參比制劑，其中參比制劑同一組分/有關(guān)物質(zhì)的含量在不同批次間相對(duì)穩(wěn)定；第二，不同來(lái)源樣品中各組分構(gòu)成的相對(duì)比例間存在顯著性差異，典型色譜圖詳見圖2，各主要組分/有關(guān)物質(zhì)含量比較的示意圖如圖3所示。

圖2 不同來(lái)源的替考拉寧產(chǎn)品的典型色譜圖Fig.2 Typical chromatograms of teicoplanin products from different sources

圖3 不同來(lái)源的替考拉寧產(chǎn)品的組分含量比較示意圖Fig.3 Comparison diagram of component content of teicoplanin products from different sources

表4 不同來(lái)源的替考拉寧組分和有關(guān)物質(zhì)含量Tab.4 Teicoplanin components and related substances content from different sources

根據(jù)各國(guó)藥典中對(duì)替考拉寧及其有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)控限度規(guī)定：全部樣品均可符合JP17/ChP2020的限度要求；除A廠家的3批樣品外，其他樣品均可符合EP7.0/BP2010的限度要求；僅參比制劑的全部批次樣品可符合EP10.0/BP2020的限度要求。

2.2 國(guó)內(nèi)外質(zhì)控差異可能對(duì)多組分抗生素注射劑一致性評(píng)價(jià)產(chǎn)生的影響

理想的一致性評(píng)價(jià)首先需選擇參比制劑。鑒于在人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)成員國(guó)上市的原研藥物通常均通過(guò)了嚴(yán)格的臨床試驗(yàn)，且處方明確，工藝相對(duì)穩(wěn)定，因此，常作為參比制劑的首選[4]。但對(duì)于多組分抗生素而言，國(guó)產(chǎn)仿制產(chǎn)品的組分構(gòu)成及其相對(duì)比例是否均須與參比制劑保持高度一致？

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在日本上市的注射用萬(wàn)古霉素和替考拉寧仿制藥，其在實(shí)際治療中抗菌活性較原研產(chǎn)品分別低約14.6%和17.3%[22]。通過(guò)進(jìn)一步研究，可能導(dǎo)致國(guó)產(chǎn)仿制注射用萬(wàn)古霉素較原研制劑活性偏低的原因有以下兩個(gè)方面：一方面是原研制劑的裝量通常較國(guó)產(chǎn)制劑的裝量約高13%[23]；另一方面，萬(wàn)古霉素雖為單組分抗生素，但其來(lái)源于生物發(fā)酵，產(chǎn)品中的小組分/雜質(zhì)可以與萬(wàn)古霉素B競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合萬(wàn)古霉素靶位，導(dǎo)致療效降低[24]，而國(guó)產(chǎn)注射用鹽酸萬(wàn)古霉素中萬(wàn)古霉素B的含量較原研產(chǎn)品約低2%～3%[23]。目前，影響注射用替考拉寧臨床療效的原因尚未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。但對(duì)于多組分抗生素如慶大霉素和替考拉寧等，不同的組分對(duì)特定致病菌可能表現(xiàn)出不同的抗菌活性[25-26]。已有文獻(xiàn)報(bào)道，當(dāng)采用某一特定評(píng)價(jià)模型時(shí)，若仿制藥與參比制劑的組分構(gòu)成及其相對(duì)比例間存在差異時(shí)，可能導(dǎo)致表現(xiàn)出不同的抗感染效果[27]，雖然其提示在對(duì)特定的患者治療時(shí)候，可能出現(xiàn)療效不一致的現(xiàn)象，但這種差異可能在治療其他致病菌的感染時(shí)呈現(xiàn)出完全不同的治療效果[4]。鑒于多組分抗生素的組分差異客觀存在的事實(shí)基礎(chǔ)，在對(duì)此類品種開展一致性評(píng)價(jià)過(guò)程中，應(yīng)盡量明確各組分的毒/活性特點(diǎn)，并關(guān)注各組分對(duì)臨床耐藥菌的有效性，更為全面、客觀地對(duì)仿制藥和參比制劑在實(shí)際臨床療效/安全性間的差異進(jìn)行評(píng)價(jià)，而并非在組分構(gòu)成及其相對(duì)比例上追求與參比制劑保持絕對(duì)一致。ChP2015年版在修訂硫酸慶大霉素及其注射液標(biāo)準(zhǔn)時(shí)便體現(xiàn)出了這一思路[28]，ChP2015并不鼓勵(lì)通過(guò)提高C1a組分(理論效價(jià)最高的組分)的比例來(lái)提高產(chǎn)品的效價(jià)，而是希望通過(guò)對(duì)無(wú)效組分/雜質(zhì)的控制，提高總組分的含量來(lái)提高產(chǎn)品的效價(jià)[25]。對(duì)于替考拉寧品種而言，從實(shí)現(xiàn)臨床療效一致性角度出發(fā)，在評(píng)價(jià)過(guò)程中建議重點(diǎn)關(guān)注：除結(jié)構(gòu)已明確的有效組分外，是否還存在有其他結(jié)構(gòu)未知的有效組分，特別是對(duì)于臨床耐藥菌有效的其他組分；此外，現(xiàn)有A2組中5個(gè)主要組分(A2-1～A2-5)間的相對(duì)比例變化是否會(huì)引起臨床療效的顯著變化，如存在顯著差異，則應(yīng)在保證療效一致的前提下盡量明確相對(duì)比例間可接受的變化范圍等。

除合理評(píng)估國(guó)產(chǎn)仿制藥與參比制劑療效/安全性的一致性外，如何保證產(chǎn)品質(zhì)量的持續(xù)一致性是另一需要完善的關(guān)鍵性問(wèn)題?；谫|(zhì)量源于設(shè)計(jì)(quality by design，QbD)理念，通常目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量可通過(guò)產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(critical quality attributes，CQAs)進(jìn)行表征[29-30]。在一致性評(píng)價(jià)過(guò)程中，不僅應(yīng)理解參比制劑的CQAs，還需明確參比制劑生產(chǎn)過(guò)程中涉及的關(guān)鍵原輔料屬性(critical material attributes，CMAs)和關(guān)鍵工藝參數(shù)(critical process parameters，CPPs)，建立CMAs、CPPs和產(chǎn)品CQAs的關(guān)系，通過(guò)精準(zhǔn)控制進(jìn)而達(dá)到控制成品質(zhì)量的目的[4]。根據(jù)此評(píng)價(jià)思路，就目前國(guó)產(chǎn)仿制注射用替考拉寧而言需要關(guān)注以下兩點(diǎn)。第一，各國(guó)產(chǎn)廠家樣品中不僅存在各組分/有關(guān)物質(zhì)的構(gòu)成及其相對(duì)比例與參比制劑間存在顯著性差異的情況，關(guān)鍵問(wèn)題在于同一廠家內(nèi)部不同批次間同一組分/有關(guān)物質(zhì)的含量存在較大波動(dòng)，提示：國(guó)產(chǎn)仿制注射用替考拉寧的CPPs與參比制劑存在差異的同時(shí)，各國(guó)產(chǎn)廠對(duì)各自現(xiàn)有CPPs的控制精準(zhǔn)度亦與參比制劑存在顯著差距。第二，在處方上，部分國(guó)產(chǎn)注射用替考拉寧與參比制劑存在差異。參比制劑處方中含有約10%氯化鈉，部分國(guó)產(chǎn)注射用替考拉寧處方中并未明確標(biāo)注含有氯化鈉成分，據(jù)ChP2020版中注射用替考拉寧中氯化鈉的含量規(guī)定為“不得過(guò)5.0%”，與替考拉寧原料項(xiàng)下保持一致[14]，提示，制劑中氯化鈉來(lái)源為原料生產(chǎn)工藝引入而非制劑處方添加。在用法上，除常規(guī)靜脈滴注或肌注外，僅參比制劑提供3～5min靜脈推注的使用方式。保證其可直接靜脈推注給藥的前提正是參比制劑處方中含有約10%氯化鈉，使其按規(guī)定方法溶解后形成等滲溶液。此外，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，等滲溶液在臨床中的應(yīng)用，特別是對(duì)于兒童患者、正接受手術(shù)的低鈉血癥患者或在重癥加護(hù)病房(ICU)中的患者使用時(shí)更為安全[31-34]。建議在一致性評(píng)價(jià)過(guò)程中關(guān)注兩者在處方和用法上的差異。

3 結(jié)論

受諸多因素影響，多組分抗生素品種在組分/有關(guān)物質(zhì)構(gòu)成及其相對(duì)比例間不可避免的存在差異。建議在此類品種仿制藥一致性評(píng)價(jià)過(guò)程中應(yīng)盡量明確：各組分的毒/活性特點(diǎn)，并關(guān)注各組分對(duì)臨床耐藥菌的有效性；各主要組分相對(duì)比例間的變化與臨床療效的相關(guān)性；關(guān)鍵原輔料屬性、關(guān)鍵工藝參數(shù)與關(guān)鍵質(zhì)量屬性間的相互關(guān)系，以及其對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量持續(xù)可控產(chǎn)生的影響等。