楊 洪，劉怡文，孔金玉

1)河南科技大學(xué)體育學(xué)院 河南洛陽 471000 2)河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院；河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院分子生物實(shí)驗(yàn)室；河南科技大學(xué)腫瘤研究所；河南省腫瘤表觀遺傳學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 河南洛陽 471000

肺癌發(fā)病率與病死率極高，其中約80%為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。NSCLC早期多表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)疾病的一般癥狀，易被忽略，確診時(shí)多發(fā)展至晚期，預(yù)后極差[1]。有研究[2]報(bào)道表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的激活突變是NSCLC的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素，以EGFR-酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-tyrosine kinase inhibitors，EGFR-TKIs)為主的分子靶向治療為晚期NSCLC患者開啟了“希望之門”，但耐藥的產(chǎn)生使后續(xù)治療無法進(jìn)行。因此，研究NSCLC獲得性耐藥機(jī)制以及尋找延緩耐藥產(chǎn)生的方法成為降低NSCLC病死率的有效策略。有學(xué)者[3-4]發(fā)表了關(guān)于EGFR-TKIs獲得性耐藥機(jī)制的研究成果，且已在肺癌中成功分離、富集出了腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSCs)[5]。盡管傳統(tǒng)的放、化療對(duì)腫瘤有一定的治療效果，但臨床數(shù)據(jù)顯示CSCs對(duì)各種治療均具有抗性，CSCs被認(rèn)為是腫瘤耐藥、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源[6]。TKIs藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用可能引起CSCs大量富集，導(dǎo)致NSCLC獲得性耐藥。有研究[7-8]證實(shí)乙醛脫氫酶1(acetaldehyde dehydrogenase 1，ALDH1)可作為NSCLC優(yōu)選的干細(xì)胞標(biāo)記物。

近年來，有氧運(yùn)動(dòng)已成為腫瘤輔助治療的新趨勢(shì)。乳腺癌及前列腺癌患者治療后進(jìn)行有效的有氧運(yùn)動(dòng)可顯著改善其生活質(zhì)量，并延長(zhǎng)其生存期[9-10]；而肥胖、缺乏運(yùn)動(dòng)和高代謝綜合征的宮頸癌患者復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率則顯著增加[11]，提示有氧運(yùn)動(dòng)可作為腫瘤治療的有效輔助措施。有研究[12-14]顯示，有氧運(yùn)動(dòng)可加速血液循環(huán)，改善組織供氧量，有利于腫瘤組織中缺氧誘導(dǎo)因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)降解，削弱其對(duì)CSCs的維持作用。

本研究首先檢測(cè)NSCLC親本細(xì)胞系及吉非替尼耐藥細(xì)胞系中HIF-1、ALDH1與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)蛋白、CSCs百分比及吉非替尼半數(shù)抑制濃度(IC50)，探索NSCLC吉非替尼獲得性耐藥產(chǎn)生的潛在分子機(jī)制；然后通過有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合吉非替尼干預(yù)皮下荷瘤裸鼠，進(jìn)一步研究有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)NSCLC吉非替尼獲得性耐藥的影響，為NSCLC的臨床治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 主要材料、試劑與儀器人NSCLC親本細(xì)胞系PC-9及吉非替尼誘導(dǎo)的人NSCLC耐藥細(xì)胞系PC-9-GR(本實(shí)驗(yàn)室凍存)；吉非替尼治療后耐藥復(fù)發(fā)的NSCLC患者腫瘤組織活檢樣本及血液樣本(河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科志愿者)；吉非替尼(美國Selleck Chemicals公司)；CCK-8試劑盒(日本同仁公司)；ALDEFLUOR?干細(xì)胞檢測(cè)試劑盒(加拿大Stemcell Technologies公司)；PKH67細(xì)胞熒光標(biāo)記試劑盒(美國Sigma-Aldrich公司)；RPMI 1640培養(yǎng)基(美國Gibco公司)；4～6周齡健康SPF級(jí)BALB/c雄性裸鼠[體重約20 g，常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(蘇)2016-0010]；HIF-1、ALDH1、VEGF和內(nèi)參GAPDH抗體(英國Abcam公司)；二抗和BCA蛋白定量試劑盒(中國康為世紀(jì)生物科技有限公司)；PVDF膜(美國Millipore公司)；Trizol和ECL發(fā)光顯影液(美國Invitrogen公司)；凝膠成像系統(tǒng)和酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad公司)；倒置光學(xué)顯微鏡(日本尼康公司)；PE小動(dòng)物活體光學(xué)成像系統(tǒng)(美國珀金埃爾默公司)；流式細(xì)胞儀(美國貝克曼公司)；SA101C動(dòng)物跑臺(tái)(江蘇賽昂斯生物科技有限公司)。

1.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

1.2.1PC-9及PC-9-GR細(xì)胞吉非替尼IC50的CCK-8法檢測(cè) 分別于96孔板中配制100 μL兩株細(xì)胞懸液(每孔1 000個(gè)細(xì)胞)，加入不同濃度(0.000 1、0.000 2、0.000 3、0.000 5、0.001、0.002、0.003、0.03、0.08、0.2、1.0、3.0、8.0、10.0 μmol/L)的吉非替尼，至培養(yǎng)箱(37 ℃，含體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2)中培養(yǎng)24 h。向每孔加入10 μL CCK-8溶液，酶標(biāo)儀測(cè)定OD450 nm，比較吉非替尼對(duì)不同細(xì)胞的24 hIC50，具體步驟參考文獻(xiàn)[15-16]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2HIF-1、ALDH1及VEGF蛋白表達(dá)的Western blot法檢測(cè) 提取各組細(xì)胞及各組裸鼠腫瘤組織新鮮蛋白后，用BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)濃度并定量。每泳道30 μg總蛋白，100 g/L SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，PVDF膜轉(zhuǎn)膜，50 g/L脫脂牛奶溶液封閉1 h，HIF-1、ALDH1、VEGF和內(nèi)參GAPDH(用TBST按照1∶1 000稀釋)抗體4 ℃孵育過夜。二抗(用TBST按照1∶2 000稀釋)孵育2 h，ECL顯影液檢測(cè)目的蛋白條帶，凝膠成像系統(tǒng)采集圖像，Image Lab軟件測(cè)定蛋白條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白條帶灰度值比值為最終蛋白相對(duì)表達(dá)量[15-16]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3ALDH1+標(biāo)記的CSCs百分比的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 用ALDEFLUOR?檢測(cè)緩沖液重懸細(xì)胞。每個(gè)待測(cè)樣本均設(shè)置一個(gè)“檢測(cè)”管(DEAB-)與一個(gè)“對(duì)照”管(DEAB+)，于流式細(xì)胞儀檢測(cè)ALDH1+標(biāo)記的CSCs百分比，具體步驟參考說明書及文獻(xiàn)[15-16]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)取24只4～6周齡雄性裸鼠。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度(25±2) ℃，濕度40%～60%，自然晝夜照明。飼養(yǎng)條件：飼料、飲水均為SPF級(jí)，裸鼠自由進(jìn)食、飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng) 1周。隨機(jī)分為對(duì)照組、吉非替尼治療組、有氧運(yùn)動(dòng)組和有氧運(yùn)動(dòng)+吉非替尼組(聯(lián)合組)4 組。每組6只，SPF級(jí)鼠籠飼養(yǎng)。皮膚消毒后，于每只裸鼠右側(cè)腋下接種PKH67熒光標(biāo)記后的PC-9-GR細(xì)胞5×106個(gè)。荷瘤成功后，吉非替尼治療組和聯(lián)合組裸鼠每日口腔灌注吉非替尼，劑量為75 mg/kg，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

有氧運(yùn)動(dòng)組及聯(lián)合組裸鼠在適應(yīng)性跑臺(tái)訓(xùn)練5 d(速度1 m/min，跑臺(tái)坡度0°)后，給予運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練[17]：①跑臺(tái)速度為17 m/min(84%VO2max)，每 15 d重復(fù)校準(zhǔn)1次，跑臺(tái)坡度均為 0°。②每次訓(xùn)練前均做10 min熱身運(yùn)動(dòng)(速度1 m/min，跑臺(tái)坡度 0°)。③運(yùn)動(dòng)過程中使用毛刷刺激裸鼠，將其維持在跑臺(tái)跑道前1/3處。④每次實(shí)驗(yàn)后均需檢查裸鼠是否受傷，如受傷則及時(shí)治療和休息。⑤裸鼠運(yùn)動(dòng)1次/d， 60 min/次。⑥每周運(yùn)動(dòng)6 d，休息1 d。⑦實(shí)驗(yàn)周期為8周(56 d)。對(duì)照組及吉非替尼治療組不做運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。

實(shí)驗(yàn)期間由小動(dòng)物活體成像儀拍攝并檢測(cè)腫瘤大小，具體測(cè)量方法參照本課題組前期研究[15]。結(jié)束后頸椎脫臼法處死裸鼠，并將瘤體剝離稱重。稱重后將瘤體分為兩部分：一部分配制成單細(xì)胞懸液，應(yīng)用ALDEFLUOR?干細(xì)胞檢測(cè)試劑盒，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組瘤體內(nèi)ALDH1+標(biāo)記的CSCs百分比。另一部分經(jīng)液氮冷凍研磨，提取各組裸鼠腫瘤組織新鮮蛋白后，用于HIF-1、ALDH1及VEGF蛋白表達(dá)的Western blot法檢測(cè)。

1.4 裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)NSCLC患者用于入組標(biāo)準(zhǔn)：①病理學(xué)明確診斷為NSCLC。②吉非替尼耐藥復(fù)發(fā)患者。③臨床信息完整。④愿意配合并簽署知情同意書。⑤經(jīng)病理活檢取得腫瘤組織最短徑≥2 mm，且無壞死或非腫瘤組織。本研究成功入組7位吉非替尼治療后耐藥復(fù)發(fā)的NSCLC患者，并同時(shí)采集患者血液樣本≥10 mL。將患者血液樣本1 000 r/min離心5 min，留取血清分裝至多個(gè) EP 管內(nèi)(1 mL/管)置于-80 ℃冰箱儲(chǔ)存?；颊吣[瘤組織樣本離體后立即用生理鹽水沖洗，剔除壞死或非腫瘤組織，沒入患者血清，于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱孵育5 min后接種于裸鼠皮下。

采用25號(hào)套管針分別將患者的腫瘤組織接種于裸鼠右側(cè)近腋窩處，每個(gè)患者的腫瘤組織接種6只裸鼠。飼養(yǎng)環(huán)境及條件同1.3。接種后每周檢測(cè)各組裸鼠成瘤情況，此為第1代人源腫瘤(patient derived xenograft,PDX)模型。8 周后頸椎脫臼法處死裸鼠，并將瘤體剝離，接種于新一批裸鼠右側(cè)腋下，接種方法同前，此為第2代PDX模型。直至第3代PDX模型建立成功后，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。本研究共獲取7例患者的腫瘤組織標(biāo)本，其中3例患者的腫瘤標(biāo)本在裸鼠腋下移植成功并成功培養(yǎng)至第3代(共18只)。

取第3代PTX模型鼠，采用分層隨機(jī)的方法，以患者為分層因素，每個(gè)患者的移植瘤隨機(jī)分為2組：1號(hào)患者移植瘤對(duì)照組(對(duì)照組1)，1號(hào)患者移植瘤實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)組1)；2號(hào)患者移植瘤對(duì)照組(對(duì)照組2)，2號(hào)患者移植瘤實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)組2)；3號(hào)患者移植瘤對(duì)照組(對(duì)照組3)，3號(hào)患者移植瘤實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)組3)。每組3只，SPF級(jí)鼠籠飼養(yǎng)。移植瘤成瘤后，各組裸鼠均每日口腔灌注吉非替尼，劑量為75 mg/kg，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。各移植瘤實(shí)驗(yàn)組裸鼠給予運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，方案見1.3。其余各移植瘤對(duì)照組裸鼠不做運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)期間，每7 d通過游標(biāo)卡尺檢測(cè)并記錄腫瘤體積，腫瘤體積(cm3)=π/6×長(zhǎng)×寬2[15]；8周后頸椎脫臼法處死裸鼠，并將瘤體剝離稱重。稱重后檢測(cè)各組瘤體內(nèi)ALDH1+標(biāo)記的CSCs百分比及HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白的表達(dá)情況，方法同1.2。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 26.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)比較PC-9與PC-9-GR細(xì)胞中HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)和CSCs百分比、吉非替尼IC50的差異。應(yīng)用2×2析因設(shè)計(jì)的方差分析比較吉非替尼治療及有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)裸鼠成瘤能力及瘤體內(nèi)HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)及CSCs百分比的影響。應(yīng)用配對(duì)資料t檢驗(yàn)比較同一時(shí)間點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)組與各對(duì)照組之間移植瘤體積、質(zhì)量的差異以及移植瘤組織中HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)和CSCs百分比的差異。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 PC-9及PC-9-GR細(xì)胞的吉非替尼IC50，HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)及CSCs百分比比較結(jié)果見圖1、表1。由圖1、表1可知，與PC-9相比，PC-9-GR中上述指標(biāo)均顯著增高(P<0.05)。

1：PC-9細(xì)胞；2：PC-9-GR細(xì)胞

2.2 各組荷瘤裸鼠腫瘤體積和質(zhì)量的比較結(jié)果見表2。由表2可知，吉非替尼治療及有氧運(yùn)動(dòng)均可降低裸鼠荷瘤能力，且二者存在協(xié)同作用。

表2 各組荷瘤裸鼠腫瘤體積和質(zhì)量的比較結(jié)果 (n=6)

2.3 各組荷瘤裸鼠瘤體內(nèi)HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)及CSCs百分比的比較結(jié)果見圖2、表3。由圖2、表3可知，吉非替尼對(duì)裸鼠瘤體內(nèi)上述指標(biāo)無影響，而有氧運(yùn)動(dòng)可使上述指標(biāo)降低，二者不存在交互作用。

1：對(duì)照組；2：吉非替尼治療組；3：有氧運(yùn)動(dòng)組；4：聯(lián)合組

表3 各組荷瘤裸鼠瘤體內(nèi)HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)及CSCs百分比的比較結(jié)果(n=6)

2.4 各組裸鼠移植瘤體積和質(zhì)量的比較結(jié)果見表4。由表4可知，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤體積及質(zhì)量均減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.5 各組裸鼠移植瘤組織中HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)及CSCs百分比檢測(cè)結(jié)果見圖3、表5。由圖3、表5可知，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤組織中HIF-1、ALDH1、VEGF表達(dá)及CSCs均減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

NSCLC目前主要的治療手段為手術(shù)、放療、化療等，但治療效果仍不理想。因此，尋找與NSCLC惡性進(jìn)展密切相關(guān)的因素、為治療提供可能的新靶點(diǎn)具有極其重要的意義。EGFR優(yōu)勢(shì)突變的NSCLC患者對(duì)TKIs藥物反應(yīng)良好，但易產(chǎn)生耐藥[2]。研究[5-6]表明，目前的治療手段主要針對(duì)已分化的細(xì)胞，而不是CSCs，恰恰這些數(shù)量極少的CSCs決定了惡性腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移及對(duì)治療的敏感性。CSCs的檢測(cè)與分選已成為腫瘤治療的關(guān)鍵。ALDH1是一種將醛類氧化成羧酸類的依賴NAD(P)+的酶，具有高度氧化活性，參與基因表達(dá)、組織分化和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等功能[7-8]。2007年Ginestier等[18]發(fā)現(xiàn) ALDH1 是乳腺癌干細(xì)胞的標(biāo)志物，揭開了ALDH1在CSCs領(lǐng)域研究的篇章。此后，陸續(xù)有研究[19-21]證實(shí)ALDH1是包括NSCLC在內(nèi)的多種腫瘤的CSCs標(biāo)志物，且其高表達(dá)與患者臨床預(yù)后密切相關(guān)。目前，已有研究團(tuán)隊(duì)利用熒光染料 Aldefluor，根據(jù)ALDH1在細(xì)胞中的不同熒光強(qiáng)度，檢測(cè)分選出CSCs[15-16]。

CSCs異常增殖和分化的潛能與其所處的微環(huán)境密切相關(guān)。由于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)較快，血液供應(yīng)相對(duì)不足，腫瘤組織易形成缺氧微環(huán)境。腫瘤細(xì)胞缺氧時(shí)，氧化磷酸化代謝途徑受阻，線粒體內(nèi)膜電子呼吸鏈傳遞異常，導(dǎo)致活性氧(reactive oxygen species，ROS)增多，不能被及時(shí)清除，而腫瘤細(xì)胞為適應(yīng)缺氧環(huán)境，滿足自身迅速生長(zhǎng)的能量需求，其代謝過程重塑，主要通過大量ROS抑制脯氨酸羥化酶活性，阻斷其對(duì)HIF-1的降解，導(dǎo)致HIF-1異?；罨?，從而調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因及各種細(xì)胞信號(hào)通路以耐受缺氧，最終引起腫瘤細(xì)胞干性增強(qiáng)及放化療抵抗[22-24]。本研究發(fā)現(xiàn)，與親本細(xì)胞PC-9相比，耐藥細(xì)胞PC-9-GR中HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白與CSCs百分比均增高，提示吉非替尼長(zhǎng)期誘導(dǎo)可使NSCLC細(xì)胞中HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白高表達(dá)，導(dǎo)致CSCs大量富集，這可能是NSCLC吉非替尼獲得性耐藥產(chǎn)生的重要原因之一。

目前，有氧運(yùn)動(dòng)已成功應(yīng)用于不同類型癌癥的治療階段，對(duì)于減少發(fā)病率、控制和改善不適癥狀、提高患者的生理機(jī)能、改善患者的負(fù)性情緒和培養(yǎng)戰(zhàn)勝癌癥的信心有著顯著的效果[25-26]。生理學(xué)方面，有氧運(yùn)動(dòng)可提高腫瘤患者心肺功能，促進(jìn)血液循環(huán)，減輕肢體疼痛，緩解器官功能衰退；降低患者應(yīng)激水平，提高抗氧化能力，改善機(jī)體免疫功能[27]。心理學(xué)方面，有氧運(yùn)動(dòng)可促進(jìn)患者心理壓力轉(zhuǎn)移，提高自我掌控感，增強(qiáng)應(yīng)對(duì)疾病的自信心及主觀幸福感，進(jìn)一步提高患者生活質(zhì)量[28]。資料[12]顯示，有氧運(yùn)動(dòng)可使ROS生成減少，上調(diào)內(nèi)源性抗氧化酶如谷胱甘肽過氧化物酶和線粒體超氧化物歧化酶，加速HIF-1降解。同時(shí)，有氧運(yùn)動(dòng)可抑制HIF反應(yīng)基因TGF-β、VEGF、IL-6、IGF等細(xì)胞因子的生成，調(diào)節(jié)多個(gè)信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞干性，提高腫瘤患者生存率[13]。

裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)中，吉非替尼治療及有氧運(yùn)動(dòng)均可降低裸鼠荷瘤能力，且二者存在協(xié)同作用；吉非替尼對(duì)裸鼠瘤體內(nèi)HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表達(dá)及CSCs百分比無影響，而有氧運(yùn)動(dòng)可使上述指標(biāo)降低，二者不存在交互作用；提示有氧運(yùn)動(dòng)可通過抑制HIF-1、ALDH1、VEGF表達(dá)及CSCs富集，抑制腫瘤惡性增殖。本研究結(jié)果表明在吉非替尼耐藥的情況下，進(jìn)行有效的有氧運(yùn)動(dòng)，可通過引起HIF-1、ALDH1、VEGF及CSCs減少，從而使腫瘤細(xì)胞重新對(duì)吉非替尼敏感，且有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合吉非替尼治療可更有效地抑制腫瘤的惡性增殖。裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組裸鼠成瘤能力顯著降低，提示有氧運(yùn)動(dòng)可有效增強(qiáng)耐藥瘤體對(duì)吉非替尼的應(yīng)答效力，從而抑制其惡性增殖；且實(shí)驗(yàn)組裸鼠瘤體內(nèi)HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白的表達(dá)及CSCs百分比均顯著降低，提示有氧運(yùn)動(dòng)可通過抑制耐藥細(xì)胞HIF-1、ALDH1及VEGF表達(dá)，導(dǎo)致CSCs減少，從而使耐藥瘤體重新對(duì)吉非替尼敏感。由此可見，有氧運(yùn)動(dòng)可作為NSCLC治療中的有效輔助措施。

綜上所述，NSCLC吉非替尼獲得性耐藥的產(chǎn)生與藥物引起CSCs大量富集密切相關(guān)，而合理有效的有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)CSCs的抑制作用有助于增強(qiáng)耐藥細(xì)胞對(duì)吉非替尼的應(yīng)答效力。資料[2]顯示，EGFR-TKIs激發(fā)耐藥的主要分子機(jī)制有EGFR T790M突變、KRAS突變、c-MET擴(kuò)增以及小細(xì)胞肺癌表型轉(zhuǎn)化等。由于疾病的多樣性和復(fù)雜性，有氧運(yùn)動(dòng)逆轉(zhuǎn)EGFR-TKIs耐藥的分子機(jī)制有待進(jìn)一步探討，但進(jìn)行合理有效的有氧運(yùn)動(dòng)，對(duì)患者的臨床治療具有非常重要的意義。因動(dòng)物實(shí)驗(yàn)周期短，裸鼠未出現(xiàn)惡病質(zhì)狀態(tài)，可更好地執(zhí)行運(yùn)動(dòng)方案，而臨床患者各方面功能狀態(tài)較差，需制定個(gè)性化運(yùn)動(dòng)方案。