任玉琴

（古浪縣人民醫(yī)院，甘肅古浪 733100）

隨著社會的發(fā)展，越來越多的人關(guān)注保健，在生活中也常服用保健品。有很多不法商人在保健品中會非法添加具有降糖作用的藥物達(dá)到降糖效果，從而夸大其保健療效。目前，有很多方法用于檢測非法添加降糖藥，如薄層色譜法[1-4]、高效液相法[5-9]、液質(zhì)法[10-14]、毛細(xì)管電泳法[15-16]、近紅外光譜法[17]和拉曼光譜法[18]。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對市售的糖尿病人用的食療包、保健品進(jìn)行篩查，檢測其中是否含有二甲雙胍、格列吡嗪、格列齊特和格列喹酮降糖藥，本方法快速簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于保健品中非法添加降糖藥的快速篩查。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品：降糖茶、降糖食療包和苦瓜洋參膠囊等降糖保健品20批次，均為市售。

試劑：二甲雙胍、格列喹酮、格列吡嗪和格列齊特標(biāo)準(zhǔn)品，購于中國藥品生物制品檢定所；甲醇、乙腈（色譜純），美國Mreda公司；正己烷、乙酸銨、乙酸（色譜純），美國Fisher Scientific公司；水為超純水。

1.2 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；配有二極管檢測器（DAD）；MS1003S電子分析天平，瑞士Mettler Toledo公司；Milli-Q超純水儀，美國Millipore公司；IKA-RV10真空濃縮儀，德國IKA公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：安杰爾C18色譜柱（250 mm×2.1 mm，5 μm）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動相：乙酸銨10 mmol·mL-1水溶液（A）+和乙腈溶液（B）；梯度洗脫程序：0～5 min，20%～80%乙腈（B）；5～20 min，80%乙腈（B）；20 min，20%乙腈（B）；流速：0.8 mL·min-1。

1.3.2 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，用乙腈溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容至刻度，配制成1 000 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于-20 ℃以下儲存。移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL，再用乙腈逐級配制成1 μg·mL-1、10 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1和 200 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，混合標(biāo)準(zhǔn)品工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.3 樣品處理

取試樣適量混勻，研細(xì)，稱取粉末10 g（準(zhǔn)確至0.001 g），置25 mL容量瓶中，加15 mL乙腈超聲提取（功率300 W、頻率50 kHz）30 min，以8 000 r·min-1離心5 min，取上清有機(jī)液，殘?jiān)右译嫒芤褐貜?fù)提取，合并兩次有機(jī)液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加1 mL乙腈復(fù)溶，過0.45 μm濾膜，備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜方法的建立

吸取1.3.2項(xiàng)下的混合標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液100 μg·mL-1，進(jìn)樣10 μL，按照色譜條件進(jìn)樣檢測，4種降糖藥能夠得到很好的分離，且不受其他雜質(zhì)干擾，色譜圖見圖1。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜圖

2.2 線性關(guān)系

以 1.3.2 項(xiàng)下的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液 1 μg·mL-1、10 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1和 200 μg·mL-1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，4 種藥物的濃度（X，μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)內(nèi)容詳見表1。

2.3 檢出限和定量限

在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下，取混合標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液100 μg·mL-1稀釋后，進(jìn)高效液相色譜儀分析檢測，測定信噪比，取信噪比約為3的溶液濃度作為定性檢測限，取信噪比約為10的溶液濃度作為定量檢測限。由表1可知，4種藥品的檢出限為0.5～1.0 g·kg-1，定量限為 1.0 ～ 4.0 g·kg-1。

表1 4種藥物的線性方程、檢出限和定量限

2.4 回收率和精密度

取1.3.2項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)儲備液依次加入降糖食療包空白基質(zhì)中，配制成濃度分別為 1 μg·mL-1、10 μg·mL-1和50 μg·mL-1的加標(biāo)樣品，每個(gè)濃度平行實(shí)驗(yàn)6次，按照1.3.3項(xiàng)樣品處理方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算回收率和精密度，結(jié)果見表2。由表2可知，二甲雙胍、格列喹酮、格列吡嗪和格列齊特的平均回收率為84.3%～105.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.2%～4.3%，方法的準(zhǔn)確度、精密度良好。

表2 4種藥物的回收率和精密度

2.5 樣品測定

應(yīng)用建立的本方法，對市場銷售的20批次降糖和食療降糖保健品進(jìn)行快速篩查，僅有4批次保健品檢出疑似二甲雙胍藥品，但含量較低且低于檢出限，需進(jìn)一步檢測，其他樣品中均未檢出非法添加降糖藥。

3 結(jié)論

糖尿病是一種復(fù)雜的代謝型疾病，與先天遺傳因素或個(gè)人的生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)、活動方式以及居住環(huán)境等有關(guān)。

本研究建立的高效液相色譜檢測方法可以同時(shí)測定食品中非法添加的4種降糖藥，具有檢測時(shí)間短、靈敏度高、準(zhǔn)確度可靠的特點(diǎn)，適用于食品中非法添加4種降糖藥（二甲雙胍、格列吡嗪、格列齊特和格列喹酮）的檢測需要。