唐怡，劉甜甜，曾珊珊，李健

1.江西省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江西 南昌 330003；2.九江學(xué)院附屬醫(yī)院，江西 九江 332000

茵梔黃顆粒，是由茵陳、梔子、黃芩、金銀花組成的方劑，臨床多用于治療新生兒生理性和病理性黃疸［1］。茵梔黃顆粒的用藥對象多為新生兒，由于新生兒藥物代謝能力差、藥物排泄慢的特點(diǎn)［2］，所以對用藥劑量的要求非常苛刻。茵梔黃顆粒藥品說明書標(biāo)注了成人用法用量，但新生兒的劑量較少涉及，使得新生兒用藥劑量問題變得非常棘手。

《中國藥典》2020 年版一部注明黃芩苷和梔子苷是茵梔黃顆粒重要的藥效指標(biāo)［1］，可用于評價(jià)茵梔黃顆粒的質(zhì)量。黃芩苷水溶性差、口服生物利用度低，主要以代謝物黃芩苷的形式存在［3-6］。梔子苷在體內(nèi)無明顯蓄積現(xiàn)象［7-9］。黃芩苷和梔子苷主要以原形經(jīng)尿液排出體外［9-10］。本研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）以梔子苷和黃芩苷為檢測指標(biāo)，測定現(xiàn)售的茵梔黃顆粒中的梔子苷和黃芩苷含量，考察是否符合《中國藥典》2020 年版一部規(guī)定；（2）通過收集服藥后不同時(shí)間段新生兒尿液，測定尿液中黃芩苷和梔子苷的含量，了解其藥物排泄情況，從側(cè)面了解茵梔黃顆粒在新生兒體內(nèi)的代謝情況，為新生兒用藥劑量提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀為Agilent 1260（Agilent 公司，美國）。色譜柱：XtimateTM C18（4.6 mm×200 mm，5 μm)。KQ-400DE 型超聲波清洗器（超聲電功率：150 W；工作頻率：40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司）；電子分析天平（BS110S，北京賽多利斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

梔子苷對照品購自中國食品藥品檢定研究院（批號(hào)110749-201718，純度98.70%）；黃芩苷對照品（批號(hào) RP190624，純度99.1%），購自成都麥德生科技有限公司。甲酸、乙腈為色譜純（Tidea 公司，美國）。甲醇為分析純（西隴化工股份有限公司）、蒸餾水（自制）。茵梔黃顆粒，購自山東魯南厚普制藥有限公司，批號(hào)：09210232、09210911。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

流動(dòng)相為乙腈（A）—0.1%甲酸溶液（B），梯度洗脫，程序?yàn)?～5 min，15%→20%A；5～20 min，20%→40%A；20～40 min，40%→55%A；40～45 min，55%→40%A；45～55 min，40%→15%A。流速為1.0 mL/min，柱溫35 ℃。進(jìn)樣量10 μL，色譜圖見圖1。

圖1 茵梔黃顆粒相關(guān)的高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取梔子苷和黃芩苷對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為36.98 μg/mL 和798.11 μg/mL的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取茵梔黃顆粒0.2 g，置 50 mL 容量瓶中，加 50% 甲醇約40 mL，超聲提?。?50 W，40 kHz）30 min，放冷至室溫后，用50%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液過0.45 μm 微孔濾膜，即得供試品溶液。

尿液預(yù)處理：征集10 名新生兒黃疸患者（5 名男嬰，5 名女嬰）服用茵梔黃溶液，采用新生兒尿袋收集服藥0、2、4、6、8、10 h 的尿液，取5 mL于具塞離心管中，4 000 r/min 離心10 min，吸取上清液，過0.45 μm 微孔濾膜，待用。

新生兒用藥劑量：運(yùn)用公式小兒劑量（g）=成人劑量（g）×小兒體重（kg）/70，成人劑量為每次6 g，新生兒體重按3 kg 計(jì)算，計(jì)算結(jié)果約為0.2 g。即患兒口服給藥每次0.2 g。

2.4 陰性樣品制備

按照茵梔黃顆粒的處方比例，分別制備缺梔子和黃芩的陰性制劑，并按照供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

取梔子苷和黃芩苷對照品溶液，分別稀釋1、2、5、10、20、50、100 倍，進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。以梔子苷濃度為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=13.628X+3.069 4，r=0.999 8。以黃芩苷濃度為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=1.508 8X-1.78，r=0.999 9。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2”項(xiàng)下的混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，依次測定，記錄峰面積，梔子苷的RSD值為1.78%，黃芩苷的RSD 為0.91%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取茵梔黃顆粒0.2 g，共6 份；按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依次測定，測得梔子苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD 為1.72%，黃芩苷的RSD 為1.51%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取茵梔黃顆粒0.2 g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件間隔2 h 進(jìn)行測定一次直至24 h，記錄峰面積，梔子苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD 為2.14%，黃芩苷的RSD 為1.77%。表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取批號(hào)為09210232 的茵梔黃顆粒0.1 g，6 份；各精密加入 含20.01 μg/mL 梔子苷和696.5 μg/mL黃芩苷對照品溶液 10 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。依次測定，結(jié)果見表1。經(jīng)計(jì)算，梔子苷的回收率平均值為99.98%，RSD 值為0.83%，黃芩苷的回收率平均值為99.39%，RSD 值為0.71%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

表1 梔子苷和黃芩苷的加樣回收率

2.10 樣品含量測定

取0.2 g 不同批號(hào)的茵梔黃顆粒，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每個(gè)樣品平行6 份，用外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果如表2 所示，均符合《中國藥典》2015 年版一部規(guī)定［本品每袋含梔子提取物以梔子苷（C17H24O10）計(jì)，不得少于3.0 mg。本品每袋含黃芩提取物以黃芩苷（C21H18O11）計(jì)，應(yīng)為180～220 mg。茵梔黃顆粒要求每袋3 g 裝的梔子苷含量不得低于3 mg，黃芩苷含量180～220 mg］。另稱取10 份0.2 g 批號(hào)為09210232 的茵梔黃顆粒給予10 名患有新生兒黃疸癥的新生兒服用，采用新生兒尿袋收集服藥0、2、4、6、8、10 h 的尿液。12 h 時(shí)，用三氯化鐵試劑檢測尿液中有無黃芩苷、氨基酸試劑檢測有無梔子苷，結(jié)果均為陰性，說明12 h 時(shí)梔子苷和黃芩苷代謝完畢。次日，再選用批號(hào)為09210911 的茵梔黃顆粒，同法操作。10 名新生兒不同時(shí)間段尿液中梔子苷和黃芩苷的平均值含量見表3。

表2 茵梔黃顆粒梔子苷和黃芩苷的含量（n=6）

表3 不同時(shí)間尿液中的梔子苷和黃芩苷含量 mg

3 討論

3.1 波長的選擇

藥典中規(guī)定梔子苷的檢測波長為238 nm，黃芩苷的檢測波長為280 nm。試驗(yàn)了2 個(gè)波長，發(fā)現(xiàn)波長238 nm 時(shí)，可以同時(shí)靈敏地檢測到梔子苷和黃芩苷的色譜峰，所以選擇238 nm 為測定波長。提高了實(shí)驗(yàn)的靈敏度，縮短了檢測時(shí)間。

3.2 尿液中梔子苷和黃芩苷的變化

由表3 可知，尿液中檢測的梔子苷和黃芩苷的含量均呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢，尿液中藥物濃度在用藥0～6 h 左右較高，用藥10 h 后大幅減少。這與文獻(xiàn)梔子苷和黃芩苷的代謝結(jié)果一致［4-10］。12 h內(nèi)，梔子苷和黃芩苷的累計(jì)排泄分?jǐn)?shù)分別為20.04%和16.40%，提示梔子苷和黃芩苷以原形從腎臟清除是其主要排泄途徑。另從結(jié)果中不難發(fā)現(xiàn)梔子苷和黃芩苷在體內(nèi)留存時(shí)間不長，與結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，苷鍵易水解有關(guān)。

3.3 梔子苷和黃芩苷的肝腎毒性

一定劑量的黃芩苷和梔子苷具有肝腎毒性［11-12］。吳斌等［3］發(fā)現(xiàn)黃芩苷在體內(nèi)有累積作用，口服3 h 后在肝腎濃度最高［3,5］。本實(shí)驗(yàn)測得茵梔黃顆粒的梔子苷和黃芩苷含量分別為2.002 mg/g 和69.52 mg/g，含量很低。其中，梔子苷遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于300 mg/kg的腎臟受損的最低濃度［6］。新生兒服用茵梔黃顆粒后，尿液中檢測的梔子苷和黃芩苷的含量均呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢。梔子苷和黃芩苷以原形從腎臟清除是其主要排泄途徑。梔子苷和黃芩苷在體內(nèi)留存時(shí)間不長。綜上，0.2 g 的茵梔黃顆粒，對于新生兒而言，是安全劑量。