孫春霞，朱曉琴，王玉美，王慧，丁偉潔，張長立

（1.淮安市婦幼保健院，江蘇 淮安 22300 1；淮安市婦幼保健院2.保健部；3.新生兒疾病篩查科；4.群體保健科，江蘇 淮安 223001；5.中國礦業(yè)大學(xué)公共管理學(xué)院，江蘇 徐州 221000）

耳聾是新生兒中常見的先天性疾病之一，如果未被及時(shí)診斷或治療，不僅影響新生兒語言的學(xué)習(xí)，還會(huì)導(dǎo)致心理和行為異常，在教育、就業(yè)等方面有諸多限制，加重家庭的負(fù)擔(dān)［1-2］。我國新生兒中先天性耳聾發(fā)病率將近有3‰，其中重度以上的先天性耳聾患者占0.1%～0.3%，90% 以上出生于聽力正常家庭［3］。因此，對(duì)新生兒進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)，不但可以提高遺傳性耳聾患者的檢出率，還能指導(dǎo)生育、改善預(yù)后以及明確診斷標(biāo)準(zhǔn)?；窗驳貐^(qū)自2019 年開始進(jìn)行新生兒耳聾基因篩查。本研究采用微陣列芯片法對(duì)淮安地區(qū)7 660 例新生兒4 個(gè)耳聾基因的15 個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2019 年12 月至2020 年9 月在淮安市出生并自愿接受耳聾基因檢測(cè)的7 660 例新生兒為研究對(duì)象。

1.2 基因檢測(cè)

采集出生3～7 天并充分哺乳的新生兒足跟血，制成≥8 mm 的干血斑，于4℃保存。通過PCR 擴(kuò)增，使用微陣列芯片法對(duì)4 個(gè)常見致聾基因的致聾位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)陽性結(jié)果采用高通量測(cè)序方法復(fù)核驗(yàn)證。

1.3 聽力篩查

新生兒出生48 小時(shí)后，在自然睡眠狀態(tài)下，于環(huán)境噪聲＜40 dBA 的房間使用耳聲發(fā)射進(jìn)行聽力篩查，初篩不通過則聯(lián)系父母進(jìn)行復(fù)篩。

2 結(jié)果

2.1 15 位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果

2.1.1 耳聾基因單基因突變位點(diǎn)篩查結(jié)果 7 660例受檢新生兒中，共檢出耳聾基因突變者478 例，突變攜帶率為6.24%。單基因突變467 例，其中GJB2 突變228 例，突變攜帶率約2.98%；GJB3 突變28 例，突變攜帶率約0.37%，SLC26A4 突變193 例，突變攜帶率約2.52%；線粒體12SrRNA 突變18 例，突變攜帶率約0.23%。見表1、圖1。

圖1 耳聾單基因突變位點(diǎn)篩查結(jié)果（15 位點(diǎn)）

2.1.2 兩個(gè)及以上耳聾基因位點(diǎn)突變篩查結(jié)果7 660 例耳聾基因突變者中發(fā)現(xiàn)11 例兩個(gè)及以上耳聾基因位點(diǎn)突變，突變攜帶率0.14%。其中，GJB2 雙雜合突變2 例；GJB2/SLC26A4 雙雜合突變7 例；GJB2/GJB3 雙雜合突變1 例；GJB2/線粒體12SrRNA 雙雜合突變1 例。見表1、圖2。

圖2 兩個(gè)及以上耳聾基因突變位點(diǎn)突變篩查結(jié)果（15 位點(diǎn)）

表1 淮安市新生兒耳聾基因篩查統(tǒng)計(jì)結(jié)果（15 位點(diǎn)）

續(xù)表1 淮安市新生兒耳聾基因篩查統(tǒng)計(jì)結(jié)果（15 位點(diǎn)）

2.2 高通量測(cè)序法100 位點(diǎn)復(fù)核檢測(cè)結(jié)果（除去與15 位點(diǎn)重復(fù)數(shù)例）

2.2.1 耳聾基因單基因突變位點(diǎn)篩查結(jié)果 7 660例受檢新生兒中，共檢出耳聾基因突變者109 例，突變攜帶率為1.42%。單基因突變109 例，其中GJB2 突變20 例；GJB3 突變7 例；SLC26A4 突變46 例；線粒體12SrRNA 突變36 例。見表2。

2.2.2 兩個(gè)及以上耳聾基因位點(diǎn)突變篩查結(jié)果7 660 例耳聾基因突變者中發(fā)現(xiàn)1 例兩個(gè)及以上耳聾基因位點(diǎn)突變，為GJB3/SLC26A4c.547G＞A/c.697G＞C雙雜合突變。見表2、圖3。

圖3 耳聾單基因突變位點(diǎn)篩查結(jié)果（100 位點(diǎn)）

表2 淮安市新生兒耳聾基因篩查統(tǒng)計(jì)結(jié)果（100 位點(diǎn)）

續(xù)表2 淮安市新生兒耳聾基因篩查統(tǒng)計(jì)結(jié)果（100 位點(diǎn)）

2.3 聽力篩查結(jié)果

除去嬰兒不配合，家長不了解聽篩結(jié)果等無效數(shù)據(jù)外，在7 660 例新生兒聽力篩查結(jié)果中，聽力篩查未通過者39 例，未通過率0.51%。

3 討論

截至2018 年2 月底，全國新生兒耳聾基因免費(fèi)篩查已完成269.91 萬例。篩查發(fā)現(xiàn)，在覆蓋12個(gè)省區(qū)市、近270 萬檢測(cè)總量中，耳聾基因突變比例為4.37%，即每百名中國人里，約有4～5 人攜帶耳聾基因［4］。

從文中看，淮安市7 660 例新生兒耳聾基因攜帶率為6.24%，高于山東地區(qū)的5.04%［5］，北京海淀區(qū)的4.0%［6］，湖南省的3.68%［7］，珠海地區(qū)的4.2%［8］；這可能與檢測(cè)方法以及我國不同地區(qū)耳聾基因分布頻率不一致有關(guān)。

從統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，突變基因中以GJB2 突變和SLC26A4 突變?yōu)橹?，攜帶率分別為2.98% 和2.52%；其次為GJB3 突變，突變攜帶率約0.37%；線粒體12SrRNA 突變所占比例最小，突變攜帶率約0.23%；該順位與其他省份基本一致［9-11］。在雙突變類型中，GJB2/SLC26A4 雙雜合突變所占比例最高，數(shù)量為7 例；其次是GJB2 雙雜合突變，數(shù)量為2 例；GJB2/GJB3 雙雜合突變與GJB2/線粒體12SrRNA 雙雜合突變?cè)诒敬谓y(tǒng)計(jì)中均為1 例，數(shù)據(jù)過小具有偶然性，不能作為估計(jì)其發(fā)生概率大小的依據(jù)。

從表1 數(shù)據(jù)還可以看出，無論是單基因突變還是多基因突變，均以GJB2 和SLC26A4 突變?yōu)橹?。GJB2 基因?qū)儆诔Ｈ旧w隱性遺傳，是導(dǎo)致非綜合征型遺傳性耳聾最常見的突變基因。該基因純合或復(fù)合雜合突變可導(dǎo)致雙耳先天性重度、極重度感音神經(jīng)性耳聾，發(fā)病年齡主要在嬰幼兒期［12］。本次篩查共檢出228 例GJB2 單基因雜合突變、11 例雙雜合突變。SLC26A4 基因突變也為常染色體隱性遺傳，需要純合突變或復(fù)合雜合突變（同時(shí)有2 例致病位點(diǎn)雜合突變）才會(huì)發(fā)病，單例位點(diǎn)的單雜合突變?yōu)閿y帶者，一般不發(fā)病［13］。本次篩查共檢出193 例SLC26A4 單基因雜合突變、7 例雙雜合突變。

除以上15 例位點(diǎn)外，本次篩查還對(duì)常見耳聾基因的其他突變位點(diǎn)進(jìn)行了檢測(cè)，共計(jì)100 例。我們發(fā)現(xiàn)以下基因位點(diǎn)突變也有相對(duì)較高的攜帶率，如線粒體12SrRNA m.7444G＞A 均質(zhì)突變；SLC26A4 c.697G＞單雜合突變；GJB2 c.512insAACG單雜合突變；GJB2 c.257C＞G 單雜合突變。見表2。

新生兒耳聾基因篩查技術(shù)的發(fā)展與進(jìn)步為聽力殘疾兒童帶來福音，超過60%的耳聾與遺傳相關(guān)，要預(yù)知、預(yù)防、診斷耳聾，基因篩查非常有效。通過新生兒耳聾基因篩查，可以指導(dǎo)抗生素的應(yīng)用。氨基糖甙類抗生素可導(dǎo)致耳聾，其中一部分患者（線粒體DNA A1555G 基因突變）對(duì)上述藥物極其敏感，少劑量短時(shí)應(yīng)用此類抗生素后也有可能發(fā)生耳聾，所謂“一針致聾”［14］。因此在用藥前進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)是非常必要的。除了明確耳聾的病因，尚可指導(dǎo)攜帶線粒體DNA A1555G基因突變但未發(fā)病母親家族中的親屬用藥，避免他們因使用氨基糖甙類藥物也發(fā)生耳聾的悲劇。

基因篩查可以幫助我們明確病因，預(yù)測(cè)療效。如基因診斷結(jié)果提示先天性耳聾是由于GJB2 基因突變導(dǎo)致的，那該患兒的聽神經(jīng)及傳導(dǎo)通路以及聽覺語言中樞應(yīng)該是正常的，進(jìn)行人工耳蝸移植可以獲得良好的效果［15］。

此外，基因篩查對(duì)地區(qū)出生缺陷防控有很大意義［16］。通過耳聾基因篩查可以指導(dǎo)婚育，優(yōu)生優(yōu)育。對(duì)已生育一個(gè)聾兒的家庭，可進(jìn)行再次生育時(shí)的產(chǎn)前基因診斷，避免再次生育聾兒；對(duì)第一胎為耳聾基因攜帶者的兒童父母，可進(jìn)行第二胎產(chǎn)前基因診斷，避免第二胎生育聾兒。對(duì)耳聾基因攜帶者進(jìn)行婚配指導(dǎo)，應(yīng)避免與同一基因型突變攜帶者生育后代，或進(jìn)行產(chǎn)前遺傳咨詢及診斷。

但是目前我們并沒有掌握新生兒遺傳性耳聾基因的全部，部分新生兒的先天性耳聾仍無法用現(xiàn)有研究成果進(jìn)行解釋，還需要進(jìn)一步研究相關(guān)基因位點(diǎn)。