袁敏艷，張敏，張碩，曹思源，2，季嘉城，2，王鵬嬌，張榮平，高秀麗，2#（.省部共建藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴陽 550025；2.貴州醫(yī)科大學(xué)微生物與生化藥學(xué)工程中心，貴陽 550025；.貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，貴陽 550025；.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，昆明 650500）

抗宮炎軟膠囊（Kanggongyan soft capsule，KSC）是由抗宮炎片更改劑型而來的中藥第九類新藥，包含廣東紫珠、烏藥、益母草3味中藥[1]。其中，廣東紫珠具有抗炎、止血、抗結(jié)核和抗血小板聚集的作用[2]；烏藥具有促進(jìn)循環(huán)、止痛和散寒的作用[3]；益母草可用于治療痛經(jīng)經(jīng)閉、惡露不盡、月經(jīng)不調(diào)等婦科疾病[4]。KSC在臨床主要用于治療慢性宮頸炎、慢性盆腔炎、宮頸柱狀上皮異位等婦科疾病。

對(duì)于KSC的質(zhì)量控制研究，目前多集中于對(duì)其中單一成分的含量測(cè)定[5－6]。中藥成分種類多、作用靶點(diǎn)多，以任何單一成分作為指標(biāo)都不能全面反映中藥的整體質(zhì)量[7]。為確保中藥及中藥制劑發(fā)揮穩(wěn)定的治療效果，需要對(duì)其進(jìn)行合理的質(zhì)量控制。中藥指紋圖譜是一種能夠全面反映中藥或中藥制劑整體化學(xué)特征的質(zhì)量分析方法[8]，被廣泛應(yīng)用于中藥及中藥制劑的質(zhì)量控制。近年來，超高效液相色譜（UPLC）法因其靈敏度高、操作方便等優(yōu)點(diǎn)被廣泛用于中藥及中藥制劑的質(zhì)量控制[9]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)可整合大量信息，通過計(jì)算并結(jié)合相關(guān)實(shí)驗(yàn)，揭示“藥物-基因-靶點(diǎn)-疾病”相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系[10]。分子對(duì)接技術(shù)可以模擬藥物活性成分治療疾病的過程，具有快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，有助于縮短藥物開發(fā)周期[11]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接的結(jié)合已成為中藥研究的常用方法[12]。因此，本研究將指紋圖譜、含量測(cè)定、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)相結(jié)合，分析KSC的潛在質(zhì)量標(biāo)志物（quality marker，Q-marker），以期為KSC的質(zhì)量控制及后續(xù)研究提供科學(xué)參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有Agilent 1290型UPLC儀（美國(guó)Agilent公司）、TB-215型電子天平（美國(guó)Denver Instrument公司）、KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、WP-UP-YJ-20型純水儀（四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

廣東紫珠干浸膏（批號(hào)200601）、益母草干浸膏（批號(hào)200601）、烏藥干浸膏（批號(hào)200501）均由貴州匯正制藥有限責(zé)任公司提供；去甲異波爾定對(duì)照品（批號(hào)P10M9L61140）、鹽酸益母草堿對(duì)照品（批號(hào)R04N8F-47273）、連翹酯苷B對(duì)照品（批號(hào)R14N9F74963）、金石蠶苷對(duì)照品（批號(hào)H29M3X1）、毛蕊花糖苷對(duì)照品（批號(hào)W14O10C100217）、異毛蕊花糖苷對(duì)照品（批號(hào)W17J10C90785）均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，純度均不低于98%。KSC（批號(hào)分別為200101、200102、200303、200501、200502、200503、200504、200602、200603、200701、200702、200704、200705、200801、200805、200806、200902、200903、201001、201002，規(guī)格每粒裝0.65 g，編號(hào)依次為S1～S20）均由貴州匯正制藥有限公司提供。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 UPLC指紋圖譜分析

2.1.1 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取去甲異波爾定、鹽酸益母草堿、連翹酯苷B、毛蕊花糖苷、金石蠶苷、異毛蕊花糖苷對(duì)照品各適量，置于同一10 mL量瓶中，加50%甲醇使溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成上述對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為0.052、0.175、0.150、0.146、0.168、0.175 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取KSC內(nèi)容物約1.0 g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，回流1 h，放冷，再次稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，即得。

2.1.3 色譜條件 色譜柱為CAPCELL PAK C18IF2（100 mm×2.1 mm，2 μm）；以乙腈（A）-0.5%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～20 min，88%B→83%B；20～35 min，83%B→65%B；35～37 min，65%B→10%B；37～40 min，10%B→88%B）；流速為0.2 mL/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量為2 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)在0～10 min時(shí)為280 nm，10～40 min時(shí)為332 nm。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 精密稱取KSC內(nèi)容物（編號(hào)S4），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以5號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.00%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD均小于5.00%（n＝6），表明方法精密度良好。

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取KSC內(nèi)容物（編號(hào)S4），按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，共6份，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以5號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.00%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD均小于5.00%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取KSC內(nèi)容物（編號(hào)S4），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以5號(hào)峰為參照峰，計(jì)算各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.00%（n＝6），相對(duì)峰面積的RSD均小于5.00%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 指紋圖譜建立、相似度評(píng)價(jià)及共有峰指認(rèn) 取20批KSC內(nèi)容物，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將各樣品色譜圖以“AIA”格式文件導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》進(jìn)行分析。以S1為參照?qǐng)D譜，設(shè)置時(shí)間窗寬度為0.1 min，對(duì)色譜峰進(jìn)行多點(diǎn)校正，隨后進(jìn)行Mark峰匹配，生成20批KSC的疊加指紋圖譜，并采用中位數(shù)法生成對(duì)照指紋圖譜（R），見圖1。20批KSC樣品圖譜與對(duì)照指紋圖譜（R）的相似度分別為1.000、0.997、0.999、0.999、0.999、1.000、0.999、1.000、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、1.000、0.998、0.999、0.999、0.999、0.999、1.000，均大于0.99，說明各批次樣品的質(zhì)量較穩(wěn)定、一致。共標(biāo)記了12個(gè)共有峰；通過對(duì)比KSC供試品溶液（編號(hào)S4）和混合對(duì)照品溶液的色譜圖，共指認(rèn)出6個(gè)色譜峰，分別為去甲異波爾定（1號(hào)峰）、鹽酸益母草堿（3號(hào)峰）、連翹酯苷B（5號(hào)峰）、毛蕊花糖苷（6號(hào)峰）、金石蠶苷（7號(hào)峰）、異毛蕊花糖苷（9號(hào)峰），結(jié)果見圖2。

圖1 20批KSC樣品的UPLC疊加指紋圖譜及對(duì)照指紋圖譜（R）

圖2 KSC供試品溶液和混合對(duì)照品溶液的UPLC疊加圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 專屬性試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液和空白對(duì)照溶液（50%甲醇），按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖（圖略）。結(jié)果顯示，空白對(duì)照溶液對(duì)6種成分的檢測(cè)無干擾，提示方法專屬性良好。

2.2.2 線性關(guān)系考察 按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備混合對(duì)照品溶液，用50%甲醇作溶劑，配制成系列濃度梯度的對(duì)照品混合溶液：去甲異波爾定質(zhì)量濃度分別為1.625、3.250、6.500、13.000、26.000、52.000 μg/mL，鹽酸益母草堿質(zhì)量濃度分別為2.734、5.469、10.938、21.875、43.750、87.500 μg/mL，連翹酯苷B質(zhì)量濃度分別為4.688、9.375、18.750、37.500、75.000、150.000 μg/mL，毛蕊花糖苷質(zhì)量濃度分別為4.563、9.125、18.250、36.500、73.000、146.000 μg/mL，金石蠶苷質(zhì)量濃度分別為 5.250、10.500、21.000、42.000、84.000、168.000 μg/mL，異毛蕊花糖苷質(zhì)量濃度分別為5.469、10.938、21.875、43.750、87.500、175.000 μg/mL。取上述系列對(duì)照品混合溶液，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以各成分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，6種成分在其相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。

表1 KSC中6種成分的回歸方程與線性范圍

2.2.3 精密度試驗(yàn) 精密稱取KSC內(nèi)容物（編號(hào)S1），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，6種成分峰面積的RSD均小于3.00%（n＝6），表明方法精密度良好。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取KSC內(nèi)容物（編號(hào)S1），共6份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并用外標(biāo)法計(jì)算6種成分的含量。結(jié)果顯示，6種成分含量的RSD均小于3.00%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取KSC內(nèi)容物（編號(hào)S1），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、12、24 h時(shí)按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，6種成分峰面積的RSD均小于3.00%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的KSC內(nèi)容物（編號(hào)S1）6份，每份約0.5 g，分別按與已知成分含量1∶1的比例加入混合對(duì)照品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，去甲異波爾定、鹽酸益母草堿、連翹酯苷B、毛蕊花糖苷、金石蠶苷、異毛蕊花糖苷的平均加樣回收率分別為94.53%、100.55%、99.92%、102.98%、97.85%、101.16%，RSD均小于3.00%（n＝6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.2.7 樣品測(cè)定 取20批KSC內(nèi)容物，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。每批樣品平行測(cè)定3次，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算樣品中各成分的含量，取平均值。結(jié)果見表2。

表2 20批KSC樣品中6個(gè)成分的含量（n＝3，mg/g）

2.3 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

通過分析20批KSC的指紋圖譜及含量測(cè)定結(jié)果，推測(cè)金石蠶苷、連翹酯苷B、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷、去甲異波爾定、鹽酸益母草堿可能為KSC的Q-marker，遂采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法進(jìn)行進(jìn)一步的分析。

2.3.1 活性成分靶點(diǎn)及宮頸炎相關(guān)靶點(diǎn)篩選 將金石蠶苷（poliumoside）、連翹酯苷B（forsythoside B）、毛蕊花糖苷（acteoside）、異毛蕊花糖苷（isoacteoside）、去甲異波爾定（norisoboldine）、鹽酸益母草堿（leonurine hydrochloride）作為關(guān)鍵詞輸入TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php），共獲取到這6個(gè)成分的126個(gè)靶點(diǎn)，通過UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.uniprot.org/）將靶點(diǎn)名轉(zhuǎn)換為對(duì)應(yīng)的基因名。通過PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/）進(jìn)行檢索，將所得成分分子結(jié)構(gòu)文件導(dǎo)入SwissTargetPrediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)。檢 索 GeneCards（http：//www.genecards.org/）、OMIM（https：//omim.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)獲取與宮頸炎相關(guān)的靶點(diǎn)。將GeneCard、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到的宮頸炎的靶點(diǎn)結(jié)果合并，去除重復(fù)數(shù)據(jù)，獲得宮頸炎相關(guān)疾病靶點(diǎn)1 447個(gè)。對(duì)藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集，得到KSC治療宮頸炎的作用靶點(diǎn)52個(gè)，將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，獲得“藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)（圖3）。

圖3 KSC治療宮頸炎的“藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

2.3.2 蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò) 將KSC治療宮頸炎的52個(gè)潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING在線數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/），限定物種為“Homo sapiens”，設(shè)置最低置信度為0.9，同時(shí)隱藏游離的靶點(diǎn)，將所得靶點(diǎn)的相互作用信息導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件進(jìn)行可視化分析，構(gòu)建蛋白-蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)。利用“Analyze Network”功能對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，計(jì)算各節(jié)點(diǎn)的度值（degree）、介數(shù)中心性（betweenness centrality，BC）和接近中心性（closeness centrality，CC），以degree、BC、CC的中位數(shù)為閾值篩選得到14個(gè)核心靶點(diǎn)（圖4），即為KSC治療宮頸炎的關(guān)鍵靶點(diǎn)。按照degree對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行排序，將排名前2位的靶點(diǎn)即蛋白激酶B1（protein kinase B1，AKT1）和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）作為核心靶點(diǎn)進(jìn)行分析。

圖4 KSC治療宮頸炎關(guān)鍵靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.3.3 基因本體和KEGG通路富集分析 將潛在核心靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/summary.jsp）進(jìn)行基因本體（gene ontology，GO）功能富集和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析。KEGG通路富集分析顯示，潛在靶點(diǎn)參與了94條通路，主要包括炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、氧化應(yīng)激、癌癥通路及細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡等，其中磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3 kinase，PI3K）-AKT通路是最重要的一條通路。GO富集分析共涉及230條信息，其中生物學(xué)過程184條，主要涉及炎癥反應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、藥物反應(yīng)；細(xì)胞組分25條，主要與胞液、細(xì)胞核等有關(guān)；分子功能21條，主要包括調(diào)控蛋白激酶、PI3K活性等。

2.4 分子對(duì)接

從“成分-核心靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)中將基因靶點(diǎn)以degree值的高低進(jìn)行排序，選取前2個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)（AKT1、TNF）分別與6個(gè)成分進(jìn)行分子對(duì)接。從RCSB蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//rcsb.org/）中獲得靶點(diǎn)（TNF、AKT1）的三維結(jié)構(gòu)文件，通過AutoDockTools軟件對(duì)蛋白晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行初始化處理，并轉(zhuǎn)換為對(duì)接所需“pdbqt”格式文件。通過Chem3D Pro 14.0軟件對(duì)化學(xué)成分的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行MM2力場(chǎng)優(yōu)化，并通過AutoDockTools軟件設(shè)置可旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)并轉(zhuǎn)換為對(duì)接所需“pdbqt”格式文件。采用AutoDock Vina分子對(duì)接軟件進(jìn)行分子對(duì)接打分。較低的自由結(jié)合能更有利于受體和配體之間的結(jié)合[13]。6個(gè)成分與靶點(diǎn)的最低結(jié)合能均小于0，其中6個(gè)成分與AKT1的結(jié)合能均小于－6.6 kJ/mol，與TNF的結(jié)合能均小于－6.4 kJ/mol，提示分子間具有很好的結(jié)合親和力。KSC的主要活性成分和核心靶點(diǎn)的高結(jié)合能力表明KSC可能是通過調(diào)節(jié)以上靶點(diǎn)發(fā)揮治療作用的。

3 討論

中藥質(zhì)量控制是保證中藥臨床用藥安全和有效的重要措施[14]。目前，僅見廖春玲[15]對(duì)抗宮炎制劑（片劑、顆粒劑、膠囊）展開過HPLC指紋圖譜研究。本研究建立了KSC的UPLC指紋圖譜，同時(shí)對(duì)其中的6個(gè)成分進(jìn)行了含量測(cè)定，并通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接研究分析出去甲異波爾定、鹽酸益母草堿、連翹酯苷B、金石蠶苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷可作為KSC的Q-marker。

KSC清濕熱、止帶下的功效與其主要活性成分的抗菌、抗炎等作用密切相關(guān)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，廣東紫珠為KSC方中君藥，主要活性成分為苯乙醇苷類，包括金石蠶苷、連翹酯苷B、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷；益母草的主要活性成分為益母草堿；烏藥的活性成分為去甲異波爾定。從KEGG通路富集結(jié)果來看，PI3K-AKT通路是最重要的一條通路，該通路已被證明是免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)的關(guān)鍵通路[16]。PI3K-AKT通路可通過激活A(yù)KT下游的核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、雷帕霉素靶蛋白、缺氧誘導(dǎo)因子1來促進(jìn)促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而誘發(fā)炎癥反應(yīng)[17]。鹽酸益母草堿可通過NF-κB信號(hào)通路抑制炎癥反應(yīng)并改善骨關(guān)節(jié)炎大鼠的軟骨退化，同時(shí)對(duì)酒精性肝損傷也有保護(hù)作用[18]；連翹酯苷B可通過抑制NF-κB信號(hào)通路減輕阿爾茨海默病的神經(jīng)炎癥[19]；毛蕊花糖苷具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗病原微生物、保護(hù)神經(jīng)等多種藥理作用[20]，其作用機(jī)制可能與抑制NF-κB信號(hào)通路從而抑制TNF-α、IL-6的釋放有關(guān)[21]；金石蠶苷具有抗炎、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)等作用，可通過抑制NF-κB信號(hào)通路減輕TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷[22]；去甲異波爾定具有抗炎、調(diào)節(jié)脂代謝、治療急性肺損傷等作用，可通過下調(diào)絲裂原激活蛋白激酶來抑制脂多糖刺激的RAW264.7細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生[23]。由此可見，KSC可能通過相關(guān)靶點(diǎn)調(diào)節(jié)PI3K-AKT通路及其下游靶點(diǎn)通路來抑制炎癥因子的釋放，從而起到抗炎作用。

綜上，去甲異波爾定、鹽酸益母草堿、連翹酯苷B、毛蕊花糖苷、金石蠶苷、異毛蕊花糖苷可作為KSC的Q-marker。