張毅，趙丹丹，莫芳芳，高思華

（1．北京開放大學(xué)，北京 100081；2．北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

2型糖尿?。═2DM）是由于機(jī)體各靶器官對(duì)胰島素的敏感性下降，產(chǎn)生的一系列代謝綜合征，受遺傳、環(huán)境、飲食、壓力等多方面因素的影響[1]。肝臟是胰島素的靶器官之一，也是脂質(zhì)代謝的重要場所，當(dāng)機(jī)體對(duì)胰島素敏感性下降時(shí)，肝臟內(nèi)可出現(xiàn)彌漫的脂肪變性，排除明確可致肝損害的誘因后，都可歸為非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）范疇[2]。T2DM患者因胰島素抵抗常伴有脂質(zhì)代謝紊亂甚至出現(xiàn)NAFLD，這與肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮的作用密切相關(guān)[3]。在機(jī)體感受到影響蛋白折疊或脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)的信號(hào)刺激時(shí)，一定程度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可幫助細(xì)胞加速折疊未折疊蛋白、降解錯(cuò)誤折疊的蛋白，從而維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。但長時(shí)間、持續(xù)的ERS會(huì)引發(fā)機(jī)體糖脂代謝紊亂、脂質(zhì)異位沉積甚至細(xì)胞凋亡[4-6]。肝細(xì)胞富含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，ERS參與了NAFLD、肝硬化、病毒性肝炎等的過程，亦可加劇T2DM患者的脂質(zhì)代謝紊亂和肝臟的脂肪變性[7]。由此可見，對(duì)于T2DM合并NAFLD的患者而言，調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激尤為重要。噻唑烷二酮類藥物是胰島素增敏劑，可增強(qiáng)外周組織對(duì)胰島素的敏感性，從而發(fā)揮降低血糖的效果。吡格列酮是臨床較常用于治療T2DM的噻唑烷二酮類藥物，吡格列酮除可降糖外，還具有糾正脂質(zhì)代謝紊亂、抗炎等多種作用，也是臨床上用于治療NAFLD的常用藥物之一。

降糖消渴顆粒是以肝脾腎同調(diào)理論為指導(dǎo)，結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)創(chuàng)制的中藥復(fù)方制劑[8-9]。前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)[10-12]，高脂飼料誘導(dǎo)成T2DM模型的KKAy小鼠，除血糖、血脂升高外，其肝臟HE染色均出現(xiàn)組織結(jié)構(gòu)的改變及脂肪性空泡，表現(xiàn)出不同程度的脂肪變性，即出現(xiàn)了NAFLD。降糖消渴顆粒一方面可降低2型糖尿病KK-Ay小鼠空腹血糖水平、糖化血紅蛋白含量，提高葡萄糖耐量；另一方面還可減少血清和肝臟中三酰甘油、膽固醇、高/低密度脂蛋白的含量，改善肝臟組織結(jié)構(gòu)，降低肝臟氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的程度。但其改善脂質(zhì)代謝，減輕NAFLD的機(jī)制是否通過調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激實(shí)現(xiàn)的，仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

本實(shí)驗(yàn)選用高脂飼料誘導(dǎo)的T2DM（已出現(xiàn)NAFLD）KK-Ay小鼠為研究對(duì)象[10]，在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)肝臟中脂質(zhì)代謝及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)基因和蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測，探討降糖消渴顆粒改善糖尿病小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的可能機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物及飼料 雄性8周齡KK-Ay小鼠、C57/6J小鼠，購自北京華阜康生物科技有限公司，審批號(hào)：SCXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)屏障環(huán)境動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，合格證號(hào)：SCXK（京）2011-0024。環(huán)境溫度維持在22～24℃，相對(duì)濕度維持在40%±10%，光照為12 h/12 h明暗周期。每日為動(dòng)物提供充足的飼料和新鮮的飲用水，高脂飼料（20%蔗糖、2．5%膽固醇、10%豬油、1%膽酸鈉、66．5%基礎(chǔ)飼料）及普通飼料購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司。飼養(yǎng)期間，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。

本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)準(zhǔn)許。

1.2 藥物 降糖消渴顆粒及制備方法詳見前期文獻(xiàn)[10-11]，規(guī)格：5．01 g生藥/g顆粒。吡格列酮片由北京太洋藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。給藥藥品均保存于4℃條件下，用前去離子水配制成所需濃度混懸液，超聲30 min使其充分溶解。

1.3 主要試劑與儀器 光學(xué)顯微鏡（日本奧林帕斯）、Trizol試劑（美國 Invitrogen公司）、SYBR Mix試劑盒（美國ABI公司）、Step One PLUS熒光定量PCR儀器（美國ABI公司）、電動(dòng)勻漿器（德國IKA儀器設(shè)備有限公司）、SAM超微紫外分光光度計(jì)[島津國際貿(mào)易（上海）有限公司]、半裙邊PCR板及封板膜（美國ABI公司）、PCR引物設(shè)計(jì)合成（上海生工生物工程有限公司）、10%中性緩沖液福爾馬林固定液（北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司）、兔抗peIF2α 抗體（CST）、兔抗 GRP78抗體（Abcam）、兔來源超敏免疫組化試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）、小鼠來源超敏免疫組化試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）、山羊血清工作液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型制備 本實(shí)驗(yàn)選取40只雄性KKAy小鼠誘導(dǎo)T2DM模型，8只雄性C57BL/6J小鼠作為正常對(duì)照組。所有小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，給予KK-Ay小鼠高脂飼料飼養(yǎng)造模，期間C57BL/6J小鼠給予普通飼料。4周后，禁食不禁水12 h，檢測各組小鼠空腹血糖水平，以空腹血糖≥13．9 mmol/L為成模標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)過4周高脂飼料誘導(dǎo)，本實(shí)驗(yàn)中所有KK-Ay小鼠均成模。

2.2 分組及給藥方法 將成模后的小鼠按照體質(zhì)量和空腹血糖水平隨機(jī)分為5組，分別為模型組，吡格列酮組，降糖消渴顆粒高、中、低（7，3．5，1．75 g/kg）劑量組，每組8只，其中中劑量由人鼠等效劑量換算得出，高、低劑量分別為人鼠等效劑量的2倍和0．5倍。中藥治療各組小鼠給予不同濃度（體積相等）降糖消渴顆?；鞈乙汗辔?，吡格列酮組實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃劑量計(jì)算如下：給藥劑量=6．5 mg/kg體質(zhì)量×給藥體積（0．1 mL/10 g體質(zhì)量），模型組和正常組予等體積蒸餾水灌胃。治療時(shí)長為10周，期間每日上午灌胃1次，實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠延續(xù)造模期間的飲食模式。

2.3 指標(biāo)檢測

2.3.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)基因檢測 治療周期結(jié)束后，麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，開腹暴露肝臟并摘除，4℃預(yù)冷的生理鹽水清洗后分裝，液氮保存?zhèn)溆?。剪取約100 mg肝組織，Trizol法提取肝組織總RNA，使用SAM紫外微量分光光度計(jì)檢測所提取RNA的純度及濃度。將提取的總 RNA 稀釋成 0．1 μg/μL，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書建立20 μL反應(yīng)體系，將總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，-20℃保存?zhèn)溆谩＿M(jìn)一步以SYBR Mix（10 μL）+c DNA 模板（2 μL）+上/下游引物（各1μL）+RNase free water（6 μL），反應(yīng)總體積為20 μL的反應(yīng)體系，使用熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)條件如下：50℃，2min；95℃，10min；95℃，20 s；60℃，15 s，40個(gè)循環(huán)，結(jié)束后 4℃保存。每組取4個(gè)樣本，各樣本設(shè)2個(gè)復(fù)孔進(jìn)行上樣，結(jié)果用相對(duì)定量分析，采用 2-ΔΔCT計(jì)算，ΔCT=Ct目的基因-Ctβactin，ΔΔCT=ΔCT 實(shí)驗(yàn)組-ΔCT 正常組，RQ=（2-ΔΔCT）。引物序列見表1。

表1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)引物序列Tab.1 Primer sequence of endoplasmic reticulum stress related indexes

2.3.2 脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)基因檢測 實(shí)驗(yàn)操作及結(jié)果計(jì)算方法同2．3．1，引物序列見表2。

表2 脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)引物序列Tab.2 Primer sequence of lipid metabolism related indexes

2.3.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)蛋白檢測 肝組織切片依次浸入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中充分脫蠟，梯度濃度乙醇復(fù)水，去離子水沖洗干凈。在組織表面滴加30%過氧化氫溶液封閉組織內(nèi)的內(nèi)源性過氧化氫酶，然后加入適量抗原修復(fù)液修復(fù)，再加入10%山羊血清工作液封閉后，按照抗體說明書步驟，依次孵育Ⅰ抗、Ⅱ抗。將新鮮配置、避光保存的DAB工作液滴加到玻片上的肝組織表面，電鏡下觀察，當(dāng)組織表面呈現(xiàn)棕色后立刻終止反應(yīng)，然后用蘇木素對(duì)肝細(xì)胞核進(jìn)行染色。將載有肝組織的玻片依次浸入梯度濃度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，干燥后鏡檢并拍攝圖片。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 19．0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。多組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P＜0．05表示差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用Graph Pad Prism 6．0軟件繪制結(jié)果圖，使用Image Pro Plus軟件分析各組IOD/Area值的變化。

3 結(jié)果

3.1 降糖消渴顆粒對(duì)糖尿病小鼠肝臟IRE1α、XBP1基因表達(dá)的影響 糖尿病小鼠肝組織IRE1α、XBP1的 mRNA 表達(dá)較正常小鼠顯著上調(diào)（P＜0．01）。中劑量降糖消渴顆?？上抡{(diào)IRE1α的mRNA表達(dá)（P＜0．05）。見表3。

表3 降糖消渴顆粒及吡格列酮對(duì)各組小鼠肝臟IRE1α、XBP1 mRNA 表達(dá)量的影響（±s）Tab.3 Effect of JTXKG and pioglitazone on the liver IRE1α，XBP1 mRNA expressions in mice（±s）

表3 降糖消渴顆粒及吡格列酮對(duì)各組小鼠肝臟IRE1α、XBP1 mRNA 表達(dá)量的影響（±s）Tab.3 Effect of JTXKG and pioglitazone on the liver IRE1α，XBP1 mRNA expressions in mice（±s）

注：與正常組比較，**P＜0．01；與模型組比較，#P＜0．05。

組別 劑量（g/kg） 動(dòng)物數(shù) IRE1α XBP1 RQ（倍） RQ（倍）正常組 - 4 1．00±0．09 1．00±0．09模型組 - 4 4．42±1．33** 2．09±0．09**吡格列酮組 0．006 5 4 2．50±1．17 2．05±0．14降糖消渴顆粒高劑量組 7．00 4 1．97±0．96 1．45±0．39降糖消渴顆粒中劑量組 3．50 4 1．24±0．23# 1．97±0．13降糖消渴顆粒低劑量組 1．75 4 2．06±0．63 2．01±0．34

3.2 降糖消渴顆粒對(duì)T2DM小鼠肝臟SREBP-1c、SREBP2、Insig-1和FAS的mRNA表達(dá)的影響 糖尿病小鼠肝臟中SREBP-1c、SREBP2、Insig-1的mRNA表達(dá)較正常小鼠顯著上調(diào)（P＜0．01），F(xiàn)AS 也有所升高（P＜0．05）。吡格列酮體現(xiàn)出了良好的降低SREBP2（P＜0．01）和 Insig-1（P＜0．05）的基因表達(dá)量的作用。各濃度降糖消渴顆粒均下調(diào)了糖尿病小鼠肝臟SREBP-1c的 mRNA 表達(dá)（P＜0．01）。中、低劑量中藥還具有減少 SREBP2的 mRNA 表達(dá)（P＜0．01）和 FAS的 mRNA 表達(dá)（P＜0．05）的作用。除此之外，中劑量降糖消渴顆粒還可下調(diào)Insig-1的mRNA表達(dá)（P＜0．05）。見表4。

表4 降糖消渴顆粒及吡格列酮對(duì)各組小鼠肝臟SREBP-1c、SREBP2、Insig-1、FAS mRNA表達(dá)量的影響（±s）Tab.4 Effect of JTXKG and pioglitazone on the liver SREBP-1c，SREBP2，Insig-1 and FAS mRNA expressions in mice（±s）

表4 降糖消渴顆粒及吡格列酮對(duì)各組小鼠肝臟SREBP-1c、SREBP2、Insig-1、FAS mRNA表達(dá)量的影響（±s）Tab.4 Effect of JTXKG and pioglitazone on the liver SREBP-1c，SREBP2，Insig-1 and FAS mRNA expressions in mice（±s）

注：與正常組比較，*P＜0．05，**P＜0．01；與模型組比較，#P＜0．05，##P＜0．01。

組別 劑量（g/kg） 動(dòng)物數(shù) SREBP-1c SREBP2 Insig-1 FAS RQ（倍） RQ（倍） RQ（倍） RQ（倍）正常組 - 4 1．01±0．16 1．00±0．10 1．01±0．16 1．02±0．25模型組 - 4 2．23±0．40** 2．15±0．17** 0．19±0．01** 1．75±0．33*吡格列酮組 0．006 5 4 1．93±0．54 1．18±0．12## 0．35±0．07# 1．49±0．50降糖消渴顆粒高劑量組 7．00 4 1．08±0．27## 2．10±0．38 0．27±0．05 1．34±0．28降糖消渴顆粒中劑量組 3．50 4 1．04±0．23## 1．43±0．30## 0．44±0．13# 1．08±0．18#降糖消渴顆粒低劑量組 1．75 4 1．02±0．12## 1．58±0．25## 0．27±0．09 1．07±0．08#

3.3 降糖消渴顆粒對(duì)糖尿病小鼠肝臟p-eIF2α、GRP78蛋白表達(dá)的影響 正常小鼠肝細(xì)胞內(nèi)peIF2α（見圖1A）和 GRP78（見圖2A）的含量很少。糖尿病小鼠肝臟內(nèi)出現(xiàn)大量棕色陽性顆粒，IOD/Area值較正常小鼠變化明顯（P＜0．01），eIF2α 磷酸化水平（見圖1B）和GRP78（見圖2B）含量顯著升高。經(jīng)吡格列酮及各劑量降糖消渴顆粒治療后，肝臟內(nèi)eIF2α的磷酸化水平（見圖1 C-F）和GRP78（見圖2 C-F）表達(dá)量都有不同程度的降低（P＜0．01），說明吡格列酮和降糖消渴顆粒均降低了肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的水平，對(duì)肝臟起到一定的保護(hù)作用。

圖1 各組小鼠肝臟中p-eIF2α免疫組化結(jié)果（×40）Fig.1 Immunohistochemical results of p-eIF2α in liver of mice in each group（×40）

圖2 各組小鼠肝臟中GRP78免疫組化結(jié)果（×40）Fig.2 Immunohistochemical results of GRP78 in liver of mice in each group（×40）

圖3 各組小鼠肝臟中p-eIF2α、GRP78的IOD/Area值Fig.3 IOD/area value of p-eIF2α，GRP78 in liver of mice in each group

4 討論

降糖消渴顆粒[10-12]由生地黃、山萸肉、生曬人參、茯苓、丹參、黃連等10味藥按照一定的比例組成，是在“肝脾腎三臟同調(diào)，辨證治療2型糖尿病”學(xué)術(shù)思想指導(dǎo)下創(chuàng)立的系列復(fù)方之一，針對(duì)T2DM最常見的“肝脾腎氣陰兩虛，挾熱挾瘀”證型而設(shè)。肝主疏泄、脾主運(yùn)化、腎主藏精，三臟協(xié)同作用，共同維持人體氣血津精等精微物質(zhì)的生成、流通、敷布以及轉(zhuǎn)化，肝、脾、腎任何一臟失常，都會(huì)漸次波及其余兩臟，出現(xiàn)三臟同病的局面，最終導(dǎo)致糖尿病的發(fā)生[8]。中醫(yī)學(xué)中的水谷精微轉(zhuǎn)化過程與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的糖脂代謝類似，肝脾腎三臟各司其職則精微物質(zhì)得以正常轉(zhuǎn)化，相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的糖脂代謝平衡狀態(tài)。三臟同病，則痰濁、瘀血等病理產(chǎn)物叢生，相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的糖脂代謝紊亂狀態(tài)，異位沉積在肝臟中則導(dǎo)致NAFLD的發(fā)生。

肝臟在胰島素的作用下，通過維持循環(huán)和儲(chǔ)存脂質(zhì)的動(dòng)態(tài)平衡來調(diào)節(jié)機(jī)體的脂質(zhì)代謝過程[13]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的3條信號(hào)通路，由3種不同的跨膜蛋白介導(dǎo)，均可調(diào)控肝臟脂質(zhì)含量。正常情況下，跨膜蛋白與分子伴侶GRP78結(jié)合處于失活狀態(tài)，當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生后，GRP78與跨膜蛋白解離轉(zhuǎn)而與未折疊蛋白結(jié)合，因此，GRP78可作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志物[14]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路之一的PERK-eIF2α通路可調(diào)控脂質(zhì)生成和肝臟脂肪變性，參與了胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下脂質(zhì)在肝臟的異位沉積[15]。肝臟中的SREBP-1c可調(diào)節(jié)脂肪酸和三酰甘油的合成，SREBP2主要調(diào)控膽固醇的合成和攝取[16]。當(dāng)SREBP-1c和SREBP2被激活時(shí)，與Insig1脫離，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜釋放，激活FAS，入核后增加脂肪酸、三酰甘油和膽固醇的合成[17]。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下，未折疊蛋白同樣可激活SREBPs生成更多的脂類供內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜利用以減輕應(yīng)激環(huán)境下造成的膜損傷，緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[18]。

本實(shí)驗(yàn)造模所用方法為高脂飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)2型糖尿病模型，前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示[10]，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物空腹血糖遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出正常值且已出現(xiàn)了胰島素抵抗，肝臟也出現(xiàn)了明顯的脂肪變性。降糖消渴顆?？筛纳聘咧嬍痴T導(dǎo)T2DM合并NAFLD小鼠糖脂代謝，減少肝臟脂肪含量，減輕肝臟脂肪變性程度及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。因此本實(shí)驗(yàn)是在胰島素抵抗的狀態(tài)下進(jìn)一步探索肝臟內(nèi)影響脂質(zhì)代謝的可能通路的，擬在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索降糖消渴顆粒改善T2DM合并NAFLD狀態(tài)下的肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝是否是通過調(diào)控肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激實(shí)現(xiàn)的。

本實(shí)驗(yàn)中，糖尿病小鼠肝臟中IRE1α、XBP1的mRNA表達(dá)較正常組均升高，p-eIF2α、GRP78的蛋白表達(dá)量顯著增加，提示糖尿病狀態(tài)下小鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生。通過對(duì)脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子 SREBP-1c、SREBP2、Insig-1 及其下游 FAS 的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)由高脂飲食誘導(dǎo)的糖尿病小鼠肝臟中SREBP-1c和SREBP2的mRNA表達(dá)量均有所上調(diào)，反映糖尿病小鼠肝臟中脂質(zhì)合成旺盛，這是肝臟脂質(zhì)堆積，最終發(fā)展成為NAFLD的重要原因之一。結(jié)合肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)，提示糖尿病狀態(tài)下，肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與脂質(zhì)沉積具有一定的正相關(guān)性。經(jīng)吡格列酮治療后，糖尿病小鼠肝組織中SREBP2的表達(dá)降低，Insig-1的表達(dá)升高，提示肝臟脂質(zhì)合成作用有所減低；p-eIF2α、GRP78的蛋白表達(dá)量明顯下降，而IRE1α、XBP1的mRNA表達(dá)變化不明顯，除了進(jìn)一步驗(yàn)證了肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與脂質(zhì)合成具有相關(guān)性外，還提示吡格列酮可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的p-eIF2α通路起作用的。降糖消渴顆粒對(duì)肝臟脂質(zhì)代謝紊亂和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的改善作用均較明顯，不僅中、低劑量組顯著降低了SREBP-1c和SREBP2的mRNA表達(dá)量，免疫組化結(jié)果也顯示各劑量組顯著降低肝臟內(nèi)eIF2α的磷酸化水平，減少GRP78含量，減輕了肝組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平。因此推測降糖消渴顆?？山档吞悄虿顟B(tài)下肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，減少脂質(zhì)在肝臟中的過度合成的。

綜上所述，T2DM（合并NAFLD）KK-Ay小鼠肝臟的脂質(zhì)合成作用與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)具有相關(guān)性。低、中（1．75，3．5 g/kg）劑量降糖消渴顆粒可在一定程度上下調(diào)實(shí)驗(yàn)小鼠肝臟中脂質(zhì)代謝相關(guān)因子SREBPs的表達(dá)，以減少肝臟脂質(zhì)的過度合成，同時(shí)減輕肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，共同起到改善糖尿病肝臟脂質(zhì)代謝紊亂的作用。