程 大 梅

（荊門市第二人民醫(yī)院 荊門 448000）

地中海貧血是血液系統(tǒng)常見遺傳病的一種，指珠蛋白基因缺陷或缺陷導(dǎo)致血紅蛋白珠蛋白肽鏈中某種或多種合成受到抑制導(dǎo)致合成不平衡而引起的一種溶血性疾病，臨床表現(xiàn)存在一定差異，輕型地貧可不出現(xiàn)任何癥狀，而重型地貧可于出生后數(shù)日出現(xiàn)肝脾腫大、黃疸、貧血等癥狀，多數(shù)患兒可引起發(fā)育不良，對患兒健康產(chǎn)生不利影響，甚至可導(dǎo)致患兒死亡[1]。我國地貧高發(fā)區(qū)域位于南方，其中β地貧攜帶率高達(dá)3%，α地貧攜帶率可達(dá)到10%[2-3]。因此，對地貧產(chǎn)前篩查工作顯得極為重要及迫切，以防止重型地貧兒出生[4]。本次選取2020年1月-2021年12月于荊門市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科門診接受常規(guī)產(chǎn)檢的孕期夫婦共1542例，研究診斷地中海貧血基因在優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象選取2020年1月-2021年12月于荊門市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科門診接受常規(guī)產(chǎn)檢的夫婦共1542例，夫婦雙方均為當(dāng)?shù)貞艏?，其中?71例，年齡21歲-45歲，平均（27.59±2.61）歲；女771例，年齡22歲-38歲，平均（27.65±2.47）歲。入組者均簽署知情同意書。

1.2 方法

入組者均行血常規(guī)及血紅蛋白電泳，并檢測地中海貧血基因：

1.2.1 血細(xì)胞分析方法

設(shè)備選用XN型全自動血細(xì)胞分析儀，由日本希森美康公司提供，開展血常規(guī)五分類檢查，測定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白濃度；設(shè)備選用SH-2020A型儀器行血紅蛋白電泳，測定方法為全自動瓊脂凝膠電泳法；每份樣本均采集2ml外周血置入EDTA抗凝管，保存于溫度為2℃-8℃環(huán)境中備用，試劑均為廠家配套試劑。以平均血紅蛋白量（MCH）≤27pg，和/或紅細(xì)胞平均體積（MCV）≤82fl，和/或HbA2≤2.4，和/或HbA2≥3.5為血液學(xué)指標(biāo)篩查出地中海貧血高危人群。

1.2.2 地中海貧血基因診斷方法

設(shè)備選用Lab-Aid820型全自動DNA提取儀，提取全血DNA，試劑采用批號分別為170104、17060試劑，每份樣本均取EDTA-2K抗凝靜脈血，行PCR擴(kuò)增（一管擴(kuò)增），導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)（FHGC）進(jìn)行膜雜交，并讀取結(jié)果。

1.2.3 優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)

針對HbA2降低或疑似α地貧者，行α-基因檢測，若夫婦一方證實(shí)為α地貧，繼續(xù)妊娠，若雙方均證實(shí)為α地貧，行胎兒產(chǎn)前診斷；針對夫婦中一方疑似α地貧另一方疑似β地貧者，分別行α-基因檢查、α+β基因檢查，若夫婦雙方均證實(shí)為α地貧，行胎兒產(chǎn)前診斷，若一方證實(shí)為α地貧，另一方證實(shí)為β地貧，繼續(xù)妊娠；針對HbA升高者，行α+β基因檢查，若雙方均證實(shí)為地貧或α復(fù)合β地貧或一方β地貧一方α復(fù)合β地貧，行胎兒產(chǎn)前診斷；若檢查結(jié)果均為正常，繼續(xù)妊娠并行胎兒產(chǎn)前診斷。

1.3 觀察指標(biāo)

計(jì)算基因突變陽性率，分析α-地貧基因、β-地貧基因及αβ復(fù)合型地貧基因的的突變類型及分布情況，對產(chǎn)前診斷結(jié)果進(jìn)行分析，并統(tǒng)計(jì)高危地貧胎兒的妊娠結(jié)局。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

經(jīng)SPSS19.0軟件分析研究數(shù)據(jù)，計(jì)量資料（符合正態(tài)分布）、計(jì)數(shù)資料分別用(±s)、%表示，分別經(jīng)t、χ2檢驗(yàn)。P＜0.05即差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因突變陽性率分析

1542例地貧篩查試驗(yàn)結(jié)果顯示，初篩陽性340例，初篩陽性率為22.05%，對初篩陽性者開展地中海貧血基因診斷結(jié)果顯示，陽性218例（14.14%），其中診斷為α-地中海貧血140例，占比為64.22%，診斷為β-地中海貧血62例，占比為28.44%，診斷為αβ復(fù)合型地中海貧血16例，占比為7.34%，見圖1。

圖1 基因突變類型分布

2.2 α-地貧基因突變類型及分布情況分析

140例α-地貧基因陽性患者中，共檢出19種基因突變類型，α缺失型基因以--SEA為主，共66例，占比為47.14%，α突變型基因以αCSα為主，共19例，占比為13.57%；-α3.7基因類型26例，占比為18.57%，其他基因突變類型共29例，占比為20.72%，見圖2。

圖2 140例α地中海貧血基因突變類型及分布情況

2.3 β-地貧基因突變類型及分布情況分析

62例β-地中海貧血基因陽性患者中，共檢出13種基因突變類型，CD41-42基因類型32例（51.61%），CD-17基因類型23例（37.10%），-28基因類型、CD27-28、CD14-15基因類型均為1例，占比均為1.61%，其他基因類型4例（6.45%）；CD41-42與CD-17基因類型占所有β-地中海貧血基因突變類型患者的88.71%，見圖3。

圖3 62例β地中海貧血基因突變類型及分布情況

2.4 αβ復(fù)合型地貧基因突變類型及分布情況分析

16例αβ復(fù)合型地貧基因陽性患者中，--SEA/CD41-42基因類型8例（50.00%），-α3.7/CD41-42基因類型4例（25.00%），--SEA/CD-17基因類型3例（18.75%），-SEA/CD14-15基因類型1例（6.25%），見表1。

表1 16例αβ復(fù)合型地貧基因突變類型及分布情況

2.5 產(chǎn)前診斷結(jié)果及高危地貧胎兒的妊娠結(jié)果分析

49對雙方均為同型基因高危地貧夫婦種孕產(chǎn)婦開展產(chǎn)前診斷結(jié)果顯示，正常胎兒檢出14例（28.57%），各類α地貧靜止型胎兒檢出4例（8.16%），各類α地貧標(biāo)準(zhǔn)型胎兒檢出8例（16.33%），各類輕型β地貧胎兒檢出6例（12.24%），各類αβ復(fù)合地貧輕型患兒檢出3例（6.12%），各類重型/中間型（α地貧，β地貧或αβ復(fù)合地貧等）地貧胎兒檢出14例（28.57%）。經(jīng)干預(yù)后14例重型/中間型地貧胎兒家庭中12例終止妊娠。高危地貧胎兒的妊娠結(jié)局見表2。

表2 高危地中海貧血胎兒的妊娠結(jié)局[n（%）]

3 討論

地貧是典型的常染色體隱性遺傳疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，由珠蛋白基因發(fā)生突變或缺失該基因等，使得某種珠蛋白鏈發(fā)生合成障礙，導(dǎo)致β鏈或α鏈合成失去平衡而引起的一種溶血性貧血。若父母雙方均為地貧基因攜帶者，其子女患重型地貧幾率高達(dá)25%[5]。鑒于地貧診斷分型的復(fù)雜性、臨床治療地貧的困難程度及遺傳危害性，及早、準(zhǔn)確診斷地貧基因分型，不僅可提高新生兒質(zhì)量，減少重型地貧兒出生，還可降低家庭與社會的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[6]?，F(xiàn)階段國內(nèi)外多采用傳統(tǒng)生化檢測、基因診斷技術(shù)等對地貧進(jìn)行檢測，其中傳統(tǒng)生化檢測方法包括血常規(guī)檢測、血紅蛋白穩(wěn)定性試驗(yàn)及血紅蛋白電泳檢測等，但由于部分輕型地貧、靜止型α-地貧或復(fù)合型地貧等缺乏典型臨床表征，極易出現(xiàn)漏診情況?；蛟\斷技術(shù)用于地貧篩查主要通過核酸電泳對缺失型α-地貧進(jìn)行檢測，雜交法對突變型α-地貧及突變型β-地貧進(jìn)行檢測，以達(dá)到診斷目的，以上檢測均需對同一樣本開展多次操作，不僅耗時較長，且操作復(fù)雜，臨床應(yīng)用具有一定局限性[7]。近年來臨床研究不斷深入，F(xiàn)HGC技術(shù)被廣泛應(yīng)用于地貧基因診斷，相較于傳統(tǒng)方法具有操作簡單、快速安全及結(jié)果易判讀等優(yōu)勢，適宜對攜帶地貧基因人群進(jìn)行臨床診斷，甚至可用于大規(guī)模人群地貧篩查，有利于產(chǎn)前對地貧診斷，減少或避免重癥地貧兒出生，以達(dá)到降低出生缺陷率的目的，實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育[8-9]。

研究發(fā)現(xiàn)，重型α-地貧常于妊娠23周-40周時于宮內(nèi)死亡，或娩出后30min死亡。針對重型β-地貧患兒，多數(shù)于出生時并未出現(xiàn)典型癥狀，通常發(fā)病開始于出生后3個月-6個月，治療僅可依靠終身輸血，以達(dá)到延長生存時間的目的，若不給予輸血治療患兒通常在5歲前死亡。中間型地貧包括中間型β-地貧及HbH病，該種地貧類型由于表型輕重程度不一，目前尚未有有效治療方法。地貧各類疾病中HbBart's水腫綜合征病情最為嚴(yán)重、危急，病因在于第16號染色體上4個α珠蛋白基因缺乏，γ珠蛋白自身可發(fā)生聚合，合成Bart's血紅蛋白，該物質(zhì)是一種四聚體，于氧具有較高親和力，可導(dǎo)致胎兒于出生時因窒息死亡[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，HbBart's水腫胎兒2例，經(jīng)干預(yù)均終止妊娠。與正常情況比較，地貧α珠蛋白基因缺失表現(xiàn)為雜合子情況下血紅蛋白對氧具有較高親和力，盡管胎兒出生后可成長發(fā)育成人，但身體發(fā)育受到嚴(yán)重影響，且影響程度與珠蛋白基因缺失程度密切相關(guān)[11-12]。因此，產(chǎn)前診斷中需采用地貧基因檢測技術(shù)進(jìn)行診斷，以預(yù)防重癥地貧兒出生。本研究發(fā)現(xiàn)，1542例育齡人群接受地中海貧血篩查試驗(yàn)，初篩陽性340例，初篩陽性率為22.05%，對初篩陽性者開展地中海貧血基因診斷，結(jié)果檢出地中海貧血基因陽性218例，陽性率為14.14%。提示荊門市是地中海貧血高發(fā)地區(qū)，且人群攜帶率較高，分析原因，荊門市每年到沿海的務(wù)工人員較多，而沿海地區(qū)是地貧高發(fā)區(qū)域，若婚配生育前未能開展相關(guān)篩查工作，勢必增加地貧患兒出生率。對于存在地貧遺傳缺血的新生兒，不僅存活率低，且體質(zhì)極差，不僅給家庭及社會帶來較大負(fù)擔(dān)，且違背了我國優(yōu)生優(yōu)育政策。由此，除加強(qiáng)遺傳咨詢及婚姻指導(dǎo)外，還需嚴(yán)格開展產(chǎn)前診斷，避免重癥地貧兒出生。本研究中，經(jīng)健康宣教，提供知情選擇等干預(yù)措施，14例重型/中間型地貧胎兒家庭中12例終止妊娠，提示健康宣教、知情選擇及產(chǎn)前診斷等干預(yù)措施，有利于提高新生兒質(zhì)量，降低重癥地貧兒出生率。

綜上所述，目前臨床對地貧尚無有效根治方法，因此加強(qiáng)遺傳咨詢、婚姻指導(dǎo)、婚前及產(chǎn)前篩查可預(yù)先發(fā)現(xiàn)重癥地貧兒，以減少或避免重癥兒出生，有利于提高人口素質(zhì)、預(yù)防出生缺陷。