牛玉季,高帆,張亞茹,李雯雯,杜鋼軍

河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物研究所,開封475004

隨著環(huán)境污染加劇和人類生活方式的改變,全球癌癥發(fā)病率和死亡率呈逐年增長的趨勢。肝癌是亞洲人群病死率最高的惡性腫瘤之一[1]。我國每年因肝癌死亡人數(shù)占全球肝癌死亡病例數(shù)的51%。2018年世界衛(wèi)生組織發(fā)布的全球癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示[2],在185個被統(tǒng)計的國家中,13個國家肝癌的發(fā)病率占國內(nèi)癌癥總發(fā)病率的首位[3]。目前,肝癌的常規(guī)治療方法主要包括手術(shù)、放療、介入治療等,但多數(shù)患者耐受性差、復(fù)發(fā)率高、耐藥性高[4]。傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療腫瘤,具有毒副作用小、不易復(fù)發(fā)、效果顯著等優(yōu)點。中藥能夠多成分、多靶點、系統(tǒng)性調(diào)節(jié)機(jī)體功能,抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移,提高患者的生存期和生存質(zhì)量[5],但因作用機(jī)制不明,限制了其推廣應(yīng)用。勒馬回,別名水蔓菁、斬龍劍、蜈蚣草等,屬于多年生草本,以地上全草入藥[6-7]。勒馬回在民間最早用于充饑,廣泛分布于河北、山西、山東、河南、江蘇等地[8]。其主要成分有黃酮類、酚類、揮發(fā)油類、有機(jī)酸類等[9]。1977年版《中國藥典》一部記載,勒馬回味苦,性微寒,具有清熱解毒、利尿、止咳化痰等功效,與肝癌的中醫(yī)病機(jī)相符合。本研究旨在探討勒馬回對小鼠H22肝癌移植瘤生長的影響,并采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析其抑制腫瘤生長的分子機(jī)制。

1 試驗材料

1.1 藥材

勒馬回購自河南省開封市天濟(jì)大藥房,經(jīng)河南大學(xué)生藥教研室袁王俊教授鑒定為玄參科植物水蔓菁(Veronica linariifoliaPall.ex Link subsp.Dilatata(Nakai et Kitag.)Hong)的地上干燥全草。

1.2 實驗動物和瘤株

雄性昆明小鼠,體質(zhì)量M=18～26 g,由河南省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供,許可證號:SCXK(豫)2015-0002;H22肝癌細(xì)胞,由中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所提供。

1.3 儀器

EM-KC150 數(shù)顯游標(biāo)卡尺(河?xùn)|區(qū)星光扳鉗工具廠);ThermoFisher Multiskan FC 酶標(biāo)儀(上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司);超凈工作臺(蘇州仁川潔凈科技有限公司);LDZX-75KBS 立式壓力蒸汽滅菌鍋(四川新德醫(yī)療器械廠);HT-100血流變黏度測試儀(淄博恒拓分析儀器有限公司);臺式高速冷凍離心機(jī)(北京京立離心機(jī)有限公司)等。

1.4 試劑

印度墨汁;生理鹽水;EDTA-2Na;0.1%(v/v)Na HCO3。

2 試驗方法

2.1 勒馬回水煎液制備方法

稱取勒馬回干燥全草40 g,加蒸餾水適量沒過藥材,浸泡30 min,中火煎煮30 min,過濾,取濾液。重復(fù)上述過程,煎煮3次,合并濾液,文火加熱濃縮至200 mL,得到濃度為0.2 g/mL 的勒馬回水煎液[10],分裝置于-80 ℃冰箱內(nèi)。

2.2 H22皮下移植瘤小鼠模型的建立

取接種9～10 d的H22肝癌腹水型小鼠,處死,于無菌環(huán)境下抽取乳白色腹水,離心,收集沉淀細(xì)胞;用無菌生理鹽水稀釋成濃度為1×107個/mL的細(xì)胞懸液,于每只小鼠右腋下皮下接種瘤液0.2 mL。

2.3 分組與給藥

接種瘤液后次日,將33只小鼠隨機(jī)分為3組,分別為正常組、模型組和給藥組,每組11只。給藥組按體質(zhì)量0.2 mL/10 g,1次/d,勒馬回水煎液灌胃;模型組等劑量生理鹽水灌胃。

2.4 觀察指標(biāo)

實驗開始后,每天記錄各組小鼠的體質(zhì)量變化情況。待小鼠皮下長出可觸摸到的瘤塊時,用游標(biāo)卡尺測量瘤的長徑a和短徑b,計算瘤體積V。模型組小鼠腋下瘤體積平均直徑大于20 mm 時終止實驗。過量麻醉處死小鼠,取瘤塊、肝臟、胸腺和脾臟,并記錄瘤質(zhì)量和臟器質(zhì)量,計算腫瘤抑制率R和胸腺指數(shù)Kth、脾臟指數(shù)Ksp[11]。

式中,m1為模型組平均瘤質(zhì)量,m2為給藥組平均瘤質(zhì)量,mth為胸腺質(zhì)量,msp為脾臟質(zhì)量,M為體質(zhì)量。

2.5 勒馬回對荷瘤小鼠血流變的影響

實驗結(jié)束,各小鼠摘眼球取血1.0 mL,置于預(yù)先制備的EDTA-2Na抗凝管中,輕輕混勻。上機(jī)檢測血流變各項指標(biāo):全血黏度(高切、中切、低切)、血漿黏度。

2.6 碳粒廓清實驗

實驗結(jié)束,小鼠經(jīng)尾靜脈注射印度墨汁(1∶4生理鹽水稀釋),每只小鼠注射劑量為0.1 mL/10 g體質(zhì)量。注射后立即計時,分別于注射后1 min、10 min經(jīng)眼眶采取20μL 血,立刻加入2 mL 0.1%(v/v)NaHCO3混勻,離心。在650 nm 波長處測定吸光度A,計算廓清指數(shù)Kex和吞噬系數(shù)α[12]。

式中,A1、A2分別為取血時間t1、t2時的吸光度,mli為肝臟質(zhì)量。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法

2.8 勒馬回有效成分的搜集與篩選

以“勒馬回”和“水蔓菁”為關(guān)鍵詞,查閱文獻(xiàn)得到有效成分23種,主要包括黃酮類、酚類和揮發(fā)油類。在化源網(wǎng)(https://www.chemsrc.com/)中查詢其CAS號,并保存。采用上海有機(jī)所中藥與化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(http://www.organchem.csdb.cn.)對勒馬回(水蔓菁)有效成分進(jìn)行檢索,得到有效成分,保留其CAS號。利用CAS號,在TCMSP(http://tcmspw.com/tcmsp.php)中根據(jù)口服生物利用度(oral bioavailability,OB)≥20%、類藥性(druglikeness,DL)≥0.1進(jìn)行篩選[13],利用PubChem 數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)下載有效成分的SMILES號。

2.9 有效成分的靶點預(yù)測

利用篩選得到的有效成分的SMILES 號在Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫(http://www.swisstargetprediction.ch/)中得到有效成分的預(yù)測靶點,通過UniProt數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/),將預(yù)測靶點的蛋白名轉(zhuǎn)換為基因名。

2.10 癌癥治療靶點的篩選與成分—靶點網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(https://www.genecards.org/)中,以“cancer”和“l(fā)iver cancer”為關(guān)鍵詞篩選出有關(guān)癌癥的治療靶點,以“immunity”為關(guān)鍵詞篩選出與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)靶點。通過OmicShare Tools(http://www.omicshare.com/tools)內(nèi)的在線維恩圖分別得到有效成分的潛在靶點與癌癥治療靶點和免疫調(diào)節(jié)靶點的交集,以提高靶點篩選的可靠性,增大預(yù)測結(jié)果的可信度[14]。通過Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建“成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖,利用該軟件中的“Network Analyzer”對網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行相關(guān)拓?fù)鋵W(xué)分析,根據(jù)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果篩選出勒馬回發(fā)揮抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵成分。

2.11 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與核心靶點的篩選

將2.10得到的交集靶點文件上傳至STRING數(shù)據(jù)庫構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)文件,設(shè)置蛋白物種為人源,隱去游離點,得到PPI網(wǎng)絡(luò)文件;將該文件導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖,利用該軟件中的“Network Analyzer”功能和“Cyto NCA”插件對PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?根據(jù)節(jié)點度值(degree)篩選出核心靶點。

2.12 富集分析和成分—靶點—通路網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

將2.10 得到的交集靶點導(dǎo)入DAVID 數(shù)據(jù)庫(https://david.ncifcrf.gov/)中,選擇物種為人源,進(jìn)行GO 功能注釋分析和KEGG 通路富集分析,以P＜0.05為篩選條件,得到勒馬回發(fā)揮抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)作用的有關(guān)通路和生物過程。再通過Omicshare在線對富集分析結(jié)果進(jìn)行可視化處理,根據(jù)富集分析結(jié)果做出氣泡圖。利用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建有效成分—核心靶點—信號通路網(wǎng)絡(luò)圖。

3 結(jié)果

3.1 勒馬回的抗腫瘤作用

小鼠腋下接種H22肝癌細(xì)胞后,于第5天長出可觸摸到的瘤塊,之后模型組小鼠腫瘤快速增長。與模型組比較,給藥組小鼠瘤體積V增加緩慢(P＜0.01),見圖1。腫瘤抑制率R=34.82%,見表1。

圖1 小鼠腫瘤體積變化情況

表1 勒馬回對H22肝癌小鼠的腫瘤抑制作用

3.2 對小鼠血流變、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響

與正常組相比,模型組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著降低(P＜0.01),與模型組相比,給藥組小鼠的脾臟指數(shù)Ksp和胸腺指數(shù)Kth顯著升高(P＜0.01),見圖2、圖3。且給藥組小鼠的全血黏度(低切、中切、高切)和血漿黏度均低于模型組(P＜0.01),見圖4、圖5。

圖2 勒馬回對小鼠脾臟指數(shù)的影響

圖3 勒馬回對小鼠胸腺指數(shù)的影響

圖4 勒馬回對小鼠全血黏度的影響

圖5 勒馬回對小鼠血漿黏度的影響

3.3 碳粒廓清實驗

與正常組比較,模型組小鼠取血時間t1=1 min和t2=10 min時的吸光度A均增加(P＜0.01),廓清指數(shù)Kex(P＜0.05)和吞噬系數(shù)α(P＜0.01)均降低;與模型組比較,給藥組小鼠在10 min時的吸光度A降低(P＜0.01),廓清指數(shù)Kex和吞噬系數(shù)α均有所升高(P＜0.01),見表2、圖6、圖7。

表2 給藥組與非給藥組吸光度、廓清指數(shù)Kex和吞噬系數(shù)α 比較

圖6 勒馬回對小鼠廓清指數(shù)的影響

圖7 勒馬回對小鼠吞噬系數(shù)的影響

3.4 勒馬回有效成分的搜集與篩選

根據(jù)文獻(xiàn)報道、上海有機(jī)所化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果,結(jié)合TCMSP 數(shù)據(jù)庫篩選出10 種有效成分,見表3。分別是β-谷甾醇(beta-Sitosterol)、6-羥基木樨草素(6-Hydroxyluteolin)、芹黃素(Alizarin)、芹菜素(Apigenin)、兒茶酚(Caulophyllogenin)、蟲草酸(cordycepic acid)、大黃素(Emodin)、亞油酸(Linolenic acid)、木樨草素(Luteolin)、地黃素D(rehmaglutin D)。

表3 勒馬回有效成分

3.5 有效成分的靶點預(yù)測

在Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫中根據(jù)從PubChem 數(shù)據(jù)庫篩選出的有效成分的SMILES號,得到有效成分的預(yù)測靶點共646個,刪除重復(fù)值后,得到人類相關(guān)基因靶點蛋白共318個,在Uni-Prot數(shù)據(jù)庫,將預(yù)測靶點的蛋白名轉(zhuǎn)換為基因名。

3.6 癌癥治療靶點的篩選與成分—靶點網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

在GeneCards數(shù)據(jù)庫中,以“cancer”和“l(fā)iver cancer”為關(guān)鍵詞搜索得到共25 460個相關(guān)靶點,根據(jù)“Relevance score”值(score≥7.34)共篩選得到3 178癌癥相關(guān)靶點。同樣,以“immunity”為關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索篩選,得到3 800個免疫調(diào)節(jié)相關(guān)靶點。利用OmicShare Tools內(nèi)的在線維恩圖功能將勒馬回有效成分對應(yīng)的317個預(yù)測靶點分別與3 177個癌癥相關(guān)靶點和3 800個免疫調(diào)節(jié)相關(guān)靶點取交集,共得到勒馬回作用于癌癥的潛在靶點共206個,作用于免疫調(diào)節(jié)的潛在靶點共195個。利用Cytoscape 3.8.0軟件分別構(gòu)建勒馬回發(fā)揮抗腫瘤作用與免疫調(diào)節(jié)作用的“成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖,“勒馬回抗腫瘤成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)中共有節(jié)點215個(有效成分節(jié)點9個,靶點蛋白基因節(jié)點206個),邊464條,見圖8。其中橙色代表勒馬回的有效成分,紅色代表潛在勒馬回的抗腫瘤作用靶點;“勒馬回免疫調(diào)節(jié)成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)中共有節(jié)點204個(有效成分節(jié)點9個,靶點蛋白基因節(jié)點195個),邊429條。其中紅色代表勒馬回的有效成分,綠色代表了勒馬回的潛在免疫調(diào)節(jié)靶點,見圖9。

圖8 勒馬回抗腫瘤作用成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

圖9 勒馬回免疫調(diào)節(jié)成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

對上述兩個網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析發(fā)現(xiàn),二者度值排名前三位的化合物節(jié)點相同,分別是木樨草素(Luteolin)、芹菜素(Apigenin)和6-羥基木樨草素(6-Hydroxyluteolin)。推測這些化合物可能是勒馬回發(fā)揮抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵化合物。

3.7 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與核心靶點的篩選

將3.6得到的交集靶點導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫得到蛋白相互作用文件,保存為CSV 格式,再將該文件上傳至Cytoscape 3.8.0軟件中分別構(gòu)建勒馬回抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)潛在靶點PPI網(wǎng)絡(luò),對兩個PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析,取degree值排名前5%的靶點為核心靶點,各得到10個核心靶點,見表4,表5。其中degree 值較高的TP53、MAPK1、AKT1、EGFR、SRC、PIK3R1,既是勒馬回發(fā)揮抗腫瘤作用的核心靶點也是發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的核心靶點,推測這些靶點可能是勒馬回發(fā)揮抗癌作用的重要藥效靶點。

表4 勒馬回抗腫瘤作用核心靶點蛋白

表5 勒馬回免疫調(diào)節(jié)核心靶點蛋白

3.8 富集分析和成分—靶點—通路網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

利用DAVID 數(shù)據(jù)庫對206個抗腫瘤作用交集靶點進(jìn)行GO 功能富集分析和KEGG 信號通路富集分析,以P＜0.05、count＞9為篩選條件,結(jié)果顯示,勒馬回的206 個潛在抗腫瘤靶點共涉及81 個GO 生物過程和91條KEGG 信號通路。所富集到的GO 生物過程主要包括“RNA 聚合酶II啟動子對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控”“細(xì)胞的增殖與凋亡”“信號轉(zhuǎn)導(dǎo)”“炎癥反應(yīng)”“蛋白質(zhì)磷酸化”等。KEGG 信號通路主要涉及“癌癥的通路”“PI3K-Akt信號通路”“癌癥蛋白多糖”“缺氧誘導(dǎo)因子-1 信號通路”“腫瘤壞死因子信號通路”“FOXO 信號通路”“RAS信號通路”等。由此可初步推測,勒馬回可能是通過以上的信號通路發(fā)揮抗腫瘤作用。同樣,對勒馬回發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的195個潛在靶點進(jìn)行GO 和KEGG 分析,結(jié)果顯示,勒馬回的195個潛在免疫調(diào)節(jié)靶點共涉及77個GO 生物過程和86條KEGG 信號通路,且這些生物過程和信號通路與抗腫瘤潛在靶點所涉及的主要生物過程和信號通路基本一致。通過Omicshare在線分析軟件對前20個GO 生物過程和KEGG 信號通路進(jìn)行可視化分析,做出氣泡圖,見圖10、圖11。利用Cytoscape 3.8.0 軟件做出有效成分—核心靶點—通路”的網(wǎng)絡(luò)圖,見圖12。圖中包括119個節(jié)點和409條邊,顯示了勒馬回的有效成分與核心靶點以及相關(guān)通路間的聯(lián)系。其中橙色代表勒馬回的有效成分、紅色代表核心靶點、紫色代表信號通路。

圖10 勒馬回抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)GO 注釋分析

圖11 勒馬回抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)KEGG通路分析

圖12 勒馬回有效成分—靶點蛋白-信號通路網(wǎng)絡(luò)圖

4 討論

本實驗采用小鼠H22肝癌模型,評價勒馬回對腫瘤生長的影響。結(jié)果顯示,與模型組相比,給藥組小鼠腫瘤生長緩慢,腫瘤抑制率達(dá)34.82%,達(dá)到藥效學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。臨床數(shù)據(jù)表明,血液流變學(xué)與惡性腫瘤之間有密切的關(guān)系[15],腫瘤細(xì)胞可以通過產(chǎn)生組織因子和癌促凝素,使惡性腫瘤的患者血液呈現(xiàn)高黏度、高凝血的狀態(tài),而在高凝狀態(tài)下,血液的流速較慢,有利于癌栓組織的形成和血小板對腫瘤細(xì)胞的遮蓋,造成免疫逃逸,使得腫瘤細(xì)胞易于在較高黏度的血液中轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散[16]。中醫(yī)藥理論認(rèn)為,肝癌以氣滯血瘀、濕熱蘊(yùn)結(jié)為主[17]。臨床上采用的中藥多具有清熱解毒、理氣活血的功效的中藥[18]。《中國藥典》記載,勒馬回味苦,性微寒,具有清熱解毒的功效。在本實驗中,與正常組相比,模型組小鼠的全血黏度和血漿黏度均高于正常組,而勒馬回能明顯降低模型組小鼠的全血黏度和血漿黏度,表明勒馬回可能通過降低患癌小鼠的血液黏度來減少腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散。

常規(guī)的癌癥治療手段如化療、放療,常會干擾機(jī)體免疫系統(tǒng)的正常運(yùn)行,造成機(jī)體免疫力下降,導(dǎo)致抗腫瘤治療失敗。在腫瘤細(xì)胞與機(jī)體的免疫系統(tǒng)相互作用過程中,腫瘤細(xì)胞可以通過某種機(jī)制實現(xiàn)免疫逃逸,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移[19]。因此,機(jī)體免疫能力的提高有助于阻止腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。脾和胸腺是機(jī)體主要的免疫器官(含有B 細(xì)胞、T 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞),脾指數(shù)和胸腺指數(shù)升高說明免疫器官內(nèi)B 細(xì)胞、T 細(xì)胞的活化,免疫能力得到提高[20]。小鼠尾靜脈注射惰性碳(印度墨汁)后,可經(jīng)巨噬細(xì)胞發(fā)揮吞噬作用后從血液中被廓清。因此,廓清指數(shù)和吞噬系數(shù)可以反映單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)清除異物的能力,進(jìn)一步反映出機(jī)體的免疫能力。本研究結(jié)果顯示,與模型組小鼠相比,給藥組小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、碳粒廓清指數(shù)和吞噬系數(shù)均升高,表明勒馬回可以通過提高小鼠的免疫能力,減少免疫逃逸,發(fā)揮抗腫瘤作用。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的整體性、系統(tǒng)性與中藥的多成分、多靶點、多途徑相吻合,為傳統(tǒng)中藥的研究和開發(fā)搭建了良好的平臺[21]。采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué),篩選出勒馬回9種活性成分,206個潛在抗腫瘤作用靶點和195個免疫調(diào)節(jié)相關(guān)靶點。通過PPI靶點蛋白相互作用關(guān)系篩選出勒馬回14 個核心靶點,分別是MAPK1、PIK3R1、TP53、AKT1、SRC、HSP90AA1、IL6、EGF、MYC、VEGFA、JUN、JAK2、RELA、EGFR。經(jīng)KEGG 和GOBP 富集分析,這些靶點主要通過參與“RNA 聚合酶II啟動子對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控”“細(xì)胞的增殖與凋亡”“信號轉(zhuǎn)導(dǎo)”“炎癥反應(yīng)”“蛋白質(zhì)磷酸化”等生物過程和“癌癥的通路”“PI3K-Akt信號通路”“癌癥蛋白多糖”“缺氧誘導(dǎo)因子-1 信號通路”“腫瘤壞死因子信號通路”“FOXO 信號通路”“RAS信號通路”等信號通路發(fā)揮抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路作為細(xì)胞內(nèi)的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在細(xì)胞增殖和凋亡中發(fā)揮著重要作用,其過度活化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)?；罨腁kt可以直接將叉頭轉(zhuǎn)錄因子(FoxO)家族磷酸化,促進(jìn)其與抗凋亡結(jié)合蛋白結(jié)合,從而抑制細(xì)胞凋亡。此外該信號通路還可以通過上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-2m RNA 的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移,通過促進(jìn)腫瘤壞死因子(TNF)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移來調(diào)節(jié)腫瘤組織血管的生成等[22]。因此,抑制該信號通路的表達(dá)有利于阻止腫瘤細(xì)胞的增殖和擴(kuò)散,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)是一種核轉(zhuǎn)錄因子[23],包括HIF-1α和HIF-1β兩個亞單位[24],可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境。該因子的表達(dá)水平也與細(xì)胞的增殖與凋亡、血管生成、腫瘤擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移等過程相關(guān)[25]。

根據(jù)實驗結(jié)果和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析,初步證實勒馬回可通過多成分、多靶點、多通路來提高機(jī)體的免疫能力,發(fā)揮抗腫瘤作用。作為一種廉價易得的中藥材,勒馬回值得在腫瘤的預(yù)防和治療方面進(jìn)行深入研究。