王 軍，李月勤，張利衛(wèi)，李雯青，謝曉程

(河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

甘草屬于豆科植物，主要含有甘草甜素和甘草次酸[1]，其主要功效是清熱解毒、補(bǔ)脾益氣、止咳、止痛、調(diào)和藥性，有抗炎和提高機(jī)體免疫力的作用[2]。2020年，馮鏡來(lái)等[3]給腹瀉模型組小鼠灌注甘草水提物極顯著降低小鼠的腹瀉率；2018年，柳香香等[4]報(bào)道甘草體外試驗(yàn)對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌作用；2007年，唐光華等[5]研究表明，甘草能使小鼠肺炎模型組肺組織中的IFN-γ、TNF-ɑ、IL-6和IL-10顯著降低，表明甘草可以調(diào)節(jié)炎性因子的分泌從而起到抗炎和提高機(jī)體免疫力的作用。臨床上，甘草常與瓜蔞配合可以治療雞的肺熱咳嗽、痰液黏稠和白痢等疾病[6，7]。甘草對(duì)于胃腸道運(yùn)動(dòng)影響的研究較少。本實(shí)驗(yàn)對(duì)比甘草乙醇提取液對(duì)獺兔的小腸運(yùn)動(dòng)影響，旨在探明甘草乙醇提取液對(duì)小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的作用，為甘草在臨床上的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康獺兔10只，雌雄各半，體重(2±0.5) kg，由河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，F(xiàn)T-100生物張力傳感器，HW-400E型恒溫平滑肌槽(均為成都泰盟軟件有限公司生產(chǎn))，電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)，10-1000 μL移液槍，臺(tái)式液，乙醇，1∶100000氯化乙酰膽堿，硫酸阿托品，1∶1000腎上腺素。

1.3 甘草乙醇提取液

稱取甘草20 g放入圓底燒瓶，加入70 %的乙醇150 mL，浸泡1小時(shí)，在溫度為80 ℃的水浴鍋中加熱回流1小時(shí)，過(guò)濾；在濾渣中加入70%的乙醇150 mL，加熱回流1小時(shí)，過(guò)濾。合并兩次濾液，放置在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中80 ℃濃縮，定容至20 mL，最后進(jìn)行高溫高壓滅菌，得到1 g/mL的甘草藥液。

1.4 獺兔離體小腸標(biāo)本的制備

將獺兔處死，迅速打開(kāi)腹腔將腸道沿腸壁分離腸系膜，用臺(tái)氏液將腸內(nèi)容物沖洗干凈，置于臺(tái)氏液中備用，用時(shí)將腸管剪成1-2 cm的小段。打開(kāi)BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，調(diào)零，定標(biāo)。將張力換能器與輸入口連接，設(shè)置參數(shù)。分別將制作好的標(biāo)本兩端穿線系緊，一端系于通氣鉤上，另一端系于換能器上，輕輕放入盛有臺(tái)氏液的恒溫麥?zhǔn)显〔壑?，溫度控制?7±0.5 ℃，緩慢通入氧氣(95%氧氣與5%二氧化碳混合氣體)，通入氣泡的速度應(yīng)保持不沖動(dòng)標(biāo)本。懸掛的標(biāo)本要保證不與加藥管的內(nèi)壁接觸，處于完全懸空狀態(tài)，平衡十分鐘，待曲線穩(wěn)定后開(kāi)始試驗(yàn)[8-10]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體腸管運(yùn)動(dòng)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1和表1所示。甘草乙醇提取液具有明顯的抑制十二指腸張力的作用。加入100μL甘草乙醇提取液時(shí)，獺兔離體十二指腸的振幅有明顯的減小，與正常腸管的運(yùn)動(dòng)相比較，差異極顯著(P<0.01)。與用藥前相比，加入甘草乙醇提取液，可使獺兔離體空腸和回腸的平滑肌自發(fā)性收縮運(yùn)動(dòng)減弱，表現(xiàn)為獺兔離體空腸和回腸的張力極顯著降低(P<0.01)、收縮幅度極顯著減小(P<0.01)，十二指腸和空腸的收縮頻率減慢，但無(wú)明顯差異(P>0.05)，回腸的收縮頻率極顯著降低(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)后灌流離體腸管，腸管可逐漸恢復(fù)至加藥前的運(yùn)動(dòng)波形。

圖1 甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體十二指腸張力的影響

表1 甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體腸管運(yùn)動(dòng)的影響

2.2 乙酰膽堿作用下甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體腸管運(yùn)動(dòng)的影響

結(jié)果如圖2和圖3所示。加入100 μL乙酰膽堿后可以引起獺兔離體十二指腸、空腸和回腸的收縮張力增強(qiáng)；在此基礎(chǔ)上，加入100 μL甘草乙醇提取液后，與加樣前比較，獺兔離體十二指腸和空腸收縮張力極顯著降低(P<0.01)，收縮振幅極顯著減小(P<0.01)，再次加入同等劑量的乙酰膽堿后，與加入甘草乙醇提取液相比較，獺兔離體十二指腸和空腸收縮張力極顯著提高(P<0.01)，收縮振幅極顯著增大(P<0.01)，但是，回腸的收縮張力和收縮幅度變化均不明顯(P>0.05)。

圖2 乙酰膽堿作用下甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體腸管收縮張力的影響

圖3 乙酰膽堿作用下甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體腸管收縮振幅的影響

3 討論

小腸是動(dòng)物體內(nèi)消化和吸收的主要場(chǎng)所，消化和吸收與小腸的運(yùn)動(dòng)存在密切的聯(lián)系，而小腸的運(yùn)動(dòng)是由平滑肌的收縮引起的。平滑肌在消化道壁內(nèi)神經(jīng)叢的作用下，靜息電位達(dá)到閾電位進(jìn)而觸發(fā)動(dòng)作電位，從而引起小腸平滑肌的收縮活動(dòng)，這就是消化道平滑肌的自律性。這種運(yùn)動(dòng)受到機(jī)械、藥物和溫度等因素的影響。離體腸段在模擬體內(nèi)的條件下可繼續(xù)維持收縮的生理特性[11，12]。

甘草作為中醫(yī)補(bǔ)氣藥，主要用于補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、緩急止痛、調(diào)和藥性，獸醫(yī)臨床上常用于治療動(dòng)物脾胃虛弱之便秘或腹瀉等。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體十二指腸、空腸和回腸平滑肌的收縮張力和振幅具有明顯的抑制作用。

乙酰膽堿是典型的膽堿能神經(jīng)介質(zhì)，乙酰膽堿作用于毒蕈堿型(M)受體，可產(chǎn)生M樣作用，表現(xiàn)為消化道平滑肌運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)、消化腺分泌增強(qiáng)等。臨床上消化道平滑肌運(yùn)動(dòng)過(guò)強(qiáng)往往會(huì)導(dǎo)致腹痛、惡心、腹瀉等癥狀。乙酰膽堿的作用機(jī)制是小腸平滑肌上的M受體與乙酰膽堿結(jié)合，最終導(dǎo)致Ca2+通道開(kāi)放，使Ca2+內(nèi)流增多，產(chǎn)生動(dòng)作電位增多，引起腸道運(yùn)動(dòng)加快[13]。乙酰膽堿會(huì)提高腸道慢波電位的頻率和幅度，從而引起動(dòng)作電位的頻率增加，同時(shí)可以觀察到小腸平滑肌的收縮活動(dòng)增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，甘草乙醇提取液對(duì)乙酰膽堿引起的獺兔離體腸道收縮有顯著的解痙作用，但未能對(duì)后續(xù)加入的乙酰膽堿產(chǎn)生持續(xù)作用，提示甘草乙醇提取液對(duì)獺兔離體腸道的作用機(jī)制可能不是通過(guò)M受體實(shí)現(xiàn)。甘草乙醇提取液對(duì)獺兔小腸的作用是否直接作用于平滑肌，以及其對(duì)獺兔消化功能的影響如何，有待進(jìn)一步的研究。