韓亞楠，趙浩強，王 軍，張 曼，李月勤，霍 軍，宋予震，張利衛(wèi)

(1.開封市畜牧工作站，河南 開封 475000；2.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 動物醫(yī)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046)

益生菌能夠調(diào)節(jié)宿主腸道菌群平衡[1]。畜禽腸道內(nèi)存在大量且種類繁多的菌群，它們相互協(xié)作配合,保持動物機體腸道健康。外源益生菌能平衡動物腸道菌群，保護(hù)動物腸道黏膜并對機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生積極影響[2,3]。Zhang等[4]的研究表明，復(fù)合益生菌顯著提高肉雞血清的IgA和IgM含量。胸腺是機體的重要淋巴器官，與免疫緊密相關(guān)，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場所[5]。本試驗研究復(fù)合益生菌制劑對肉雞胸腺發(fā)育的影響，為利用復(fù)合益生菌制劑改善肉雞的生產(chǎn)性能和免疫功能提供實踐依據(jù)，為肉雞的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 益生菌制劑

牧丁寶Ⅰ、牧丁寶Ⅱ、丁酸梭菌和益芪康，由河南金百合生物科技股份有限公司提供。牧丁寶I的主要菌種為丁酸梭菌和枯草芽孢桿菌。牧丁寶Ⅱ的主要菌種為丁酸梭菌、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌等。丁酸梭菌制劑是富含丁酸梭菌的液態(tài)益生菌。益芪康制劑的主要菌種為丁酸梭菌、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌等，加入了黃芪、甘草和刺五加等中草藥。

1.2 試驗設(shè)計

選取1日齡體重50～55 g雄性AA肉仔雞75只，隨機分為A、B、C、D、E 5個組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)3只雞。A、B、C、D為試驗組，E為對照組。E組飼喂基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧的組成和營養(yǎng)水平如表1所示，A、B、D組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1 g/kg牧丁寶Ⅰ、0.15 g/kg牧丁寶Ⅱ、1 g/kg益芪康，C組將丁酸梭菌溶于水，按照0.2 mL/只·天飲水。試驗期為21天。

表1 基礎(chǔ)日糧的組成及營養(yǎng)水平

1.3 取樣

第21天，肉仔雞空腹稱重，頸部放血處死。取出胸腺，剔除多余脂肪組織后，稱取胸腺重，計算胸腺指數(shù)，胸腺指數(shù)=胸腺重/肉雞體重×100%。將胸腺放于10%甲醛中固定。

1.4 石蠟切片制作、HE染色及觀察

取出固定好的胸腺，制作石蠟切片并進(jìn)行HE染色[6]。經(jīng)酒精(70%、80%、90%、95%、100%)脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等步驟制備5 μm厚石蠟切片。

HE染色步驟為：二甲苯10 min 兩次，酒精(100%Ⅰ，100%Ⅱ、95%、90%、80%、70%)各3 min，蘇木素6 min，1%鹽酸酒精10 s，蒸餾水10 min，酒精(70%、80%、90%)各3 min，伊紅1 min，95%酒精3 min、100%酒精3 min，二甲苯3 min 兩次，中性樹膠封片。用顯微照相系統(tǒng)拍攝組織樣本在4倍和40倍物鏡下的照片，每個片子取5個視野。再用Image J測量4倍物鏡視野內(nèi)胸腺小葉整體面積和髓質(zhì)的面積。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。數(shù)據(jù)表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”，顯著水準(zhǔn)為P<0.05.

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合益生菌制劑對肉仔雞胸腺重的影響

如表2所示，與對照組相比，D組(益芪康)肉仔雞胸腺重增加了32.51%(P<0.05)。與對照組相比，A、B、C組肉仔雞胸腺重差異不顯著(P>0.05)。

表2 21日齡肉仔雞胸腺重 g

2.2 復(fù)合益生菌對肉仔雞胸腺指數(shù)的影響

如表3所示，與對照組相比，D組(益芪康)肉仔雞胸腺指數(shù)增加了20.54%(P<0.05)。與對照組相比，A、B、C組肉仔雞胸腺指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。

表3 21日齡肉仔雞胸腺指數(shù)

2.3 復(fù)合益生菌對肉仔雞胸腺皮質(zhì)與髓質(zhì)比的影響

由表4和圖1可知，與對照組相比，B組和D組肉仔雞胸腺皮質(zhì)與髓質(zhì)比顯著增加(P<0.05)；與對照組相比，A組和C組肉仔雞胸腺皮質(zhì)與髓質(zhì)比差異不顯著(P>0.05)。

表4 21日齡肉雞胸腺皮質(zhì)與髓質(zhì)比

注：A、B、C、D、E組分別為牧丁寶Ⅰ組、牧丁寶Ⅱ組、丁酸梭菌組、益芪康組、對照組；圖中黑色三角形區(qū)域為皮質(zhì)，黑色五角星區(qū)域為髓質(zhì)，圖中標(biāo)尺100 μm。

3 討論

胸腺重量大小在一定程度上反應(yīng)了動物機體免疫機能的強弱。本試驗發(fā)現(xiàn)在飼料中添加益芪康制劑能夠增加肉雞胸腺重。于明等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加復(fù)合益生菌制劑能夠提高肉雞的免疫功能。劉鳳美等[8]研究發(fā)現(xiàn)，益生菌能提高肉雞免疫器官的發(fā)育。本試驗的結(jié)果表明，益芪康顯著提高肉雞的胸腺指數(shù)。張雷等[9]發(fā)現(xiàn)，在白羽肉雞的飲水中加入復(fù)合益生菌顯著提高了白羽肉雞胸腺指數(shù)，這與本試驗的結(jié)果一致。這些試驗結(jié)果說明，復(fù)合益生菌制劑能夠促進(jìn)肉雞胸腺的生長。

胸腺有皮質(zhì)和髓質(zhì)兩部分，皮質(zhì)部的淋巴細(xì)胞多而密集，髓質(zhì)部的淋巴細(xì)胞少而稀疏。胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)比，在一定程度上反映胸腺淋巴細(xì)胞的增殖情況。本試驗中，益芪康組肉雞胸腺皮質(zhì)與髓質(zhì)比顯著大于對照組，表明益芪康能夠顯著促進(jìn)胸腺淋巴細(xì)胞的增殖。