侯維維,郭良敏,王春彬

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)多是因寒冷刺激、暴飲暴食、激動(dòng)、過勞引起的持續(xù)性冠狀動(dòng)脈缺血缺氧，是我國常見急重癥，由于病情兇險(xiǎn)、預(yù)后差，導(dǎo)致病死率一直居高不下，對此需盡早發(fā)現(xiàn)、診斷、治療[1]。ST段抬高型心肌梗死是心電圖表現(xiàn)為ST段弓背向上抬高曲線的AMI類型，可伴病理性Q波，誤診、漏診率仍較高，導(dǎo)致治療時(shí)機(jī)被延誤，故需尋找特異性好、靈敏度高的診斷標(biāo)志物[2]。近年來隨著基因?qū)W及相關(guān)臨床研究備受關(guān)注，學(xué)者發(fā)現(xiàn)非編碼RNA常在惡性病變中發(fā)揮重要作用[3]。尿路上皮癌抗原1(urothelial cancer antigen 1，UCA1)是一種發(fā)現(xiàn)于膀胱移行的長鏈非編碼RNA，參與了癌胚基因發(fā)生、發(fā)展過程，目前已有研究證實(shí)其在尿路上皮癌中存在異常表達(dá)[4]。但目前關(guān)于UCA1與AMI關(guān)系研究較少，處于探索階段?；谝酝芯拷Y(jié)果，本文分析了AMI患者中UCA1表達(dá)情況，并探索了UCA1表達(dá)與miR-1及心肌損傷指標(biāo)的相關(guān)性，以此探究ST段抬高型心肌梗死的發(fā)生機(jī)制，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年3月—2021年3月成都市第三人民醫(yī)院心內(nèi)科收治的STEMI 患者124例為研究對象(STEMI組)，其中男75例，女49例，年齡54～61(59.35±4.22)歲，體質(zhì)量58～64(61.12±3.26)kg，體質(zhì)量指數(shù)22.90～24.52(23.51±2.01)kg/m2。同期醫(yī)院健康體檢者116例為健康對照組，其中男66例，女50例，年齡55～63(59.41±4.57)歲，體質(zhì)量59～66(62.33±3.45)kg，體質(zhì)量指數(shù)23.01～24.27(23.51±2.01)kg/m2。2組性別、年齡、體質(zhì)量等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究通過醫(yī)院倫理評審委員會(huì)審核，全部受試者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①STEMI診斷符合“急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南(2019)”[5]中關(guān)于急性AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)；②經(jīng)心電圖檢查，發(fā)現(xiàn)病理性Q波；經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查，冠狀動(dòng)脈內(nèi)存在血栓。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有心室擴(kuò)大、心肌病、心力衰竭、房顫者；②合并血液系統(tǒng)、自身免疫性疾病者；③合并急性腦血管疾病者。

1.3 檢測指標(biāo)與方法 STEMI組患者入組后第2天、健康對照組于體檢當(dāng)日晨起抽取受檢者空腹外周肘靜脈血10 ml，分裝2管，其中1管5 ml，1 500 r/min離心10 min，取血清存放于冰箱(-20℃)待檢。使用全自動(dòng)生化檢測儀(日本希森公司Sysmexbx-5000型)檢測心肌損傷標(biāo)志物包括肌鈣蛋白I(troponin I，cTnI)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme，CK-MB)。另1管5ml加抗凝后取血漿，使用定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測miR-1、UCA1表達(dá)水平。提取總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，按照試劑盒要求提取血漿中總RNA，UCA1和miR-1引物序列由上海吉?jiǎng)P基因公司提供，miR-1上游引物序列：5′-GGGGTGGAATGTAAAGAA-3′，下游引物序列：5′-TGCGTGTCGTGGAGTC-3′；UCA1上游引物序列：5′-ACGCTAACTGGCACCTTGTT-3′，下游引物序列：5′-TGGGGATTACTGGGGTAGGG-3′，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(ABI公司PRISM 7900型)，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。建立PCR反應(yīng)體系20 μl:PCR Master Mix 10 μl，目的引物1 μl，通用引物1 μl，無DNA酶水7 μl，模板CDAN 1 μl，擴(kuò)增條件：3 min 95℃，40個(gè)循環(huán)，77℃ 20 s，72℃ 20 s，60℃ 20 s，95℃ 15 s。miR-1、UCA1相對表達(dá)水平采用2-△△Ct表示。

2 結(jié) 果

2.1 2組受試者UCA1、miR-1表達(dá)及cTnI、CK-MB水平比較 STEMI組血漿UCA1表達(dá)低于健康對照組，而miR-1表達(dá)及cTnI、CK-MB水平高于健康對照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

表1 2組UCA1、miR-1表達(dá)及cTnI、CK-MB水平比較Tab.1 Comparision of UCA1,miR-1 expression and cTnI,CK-MB levels between 2 groups

2.2 相關(guān)性分析 Pearson分析結(jié)果表明，血漿UCA1表達(dá)與miR-1表達(dá)及cTnI、CK-MB均呈顯著負(fù)相關(guān)(r/P=-0.755、-0.581、-0.646，P<0.001)。

2.2 各項(xiàng)指標(biāo)預(yù)測STEMI的ROC曲線分析 經(jīng)ROC曲線分析，血漿UCA1、miR-1表達(dá)水平及cTnI、CK-MB水平預(yù)測STEMI的AUC分別為0.992、0.995、0.982、0.972，見表2、圖1。

3 討 論

急性心肌梗死是臨床常見疾病，其發(fā)病率和病死率均較高，給人民生命健康帶來巨大的威脅，造成沉重的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。其發(fā)病主要是因冠狀動(dòng)脈血流減少、急性梗阻引起的心肌缺血缺氧，早期可出現(xiàn)持續(xù)性劇烈胸骨后疼痛，隨著病情惡化，可并發(fā)心力衰竭、休克、心律失常。ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者具有典型的缺血性胸痛，一般持續(xù)時(shí)間超過20 min，在心電圖檢查中可見典型ST段抬高表征，威脅患者生存質(zhì)量和健康，需盡早診治[6-7]。目前多項(xiàng)研究表明，采用冠狀動(dòng)脈介入、藥物治療能夠解除AMI患者動(dòng)脈血流受限，改善心肌供血和預(yù)后。但常規(guī)介入和藥物治療的整體療效受治療時(shí)機(jī)影響，無法有效保證整體預(yù)后。因此，早期準(zhǔn)確診斷顯得尤為重要。隨著臨床對AMI病理機(jī)制研究不斷深入，學(xué)者發(fā)現(xiàn)非編碼RNA在多種疾病發(fā)生發(fā)展中存在重要意義，蔡華榮等[8]研究發(fā)現(xiàn)長鏈非編碼RNA UCA1在非小細(xì)胞肺癌中存在異常表達(dá)失調(diào)，且有學(xué)者通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)長鏈RNA作為核受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的共激活因子，可引起心室肌收縮功能障礙，故學(xué)者推測長鏈非編碼RNA在AMI診斷中可能存在一定價(jià)值[9]。

表2 血漿UCA1、miR-1表達(dá)及cTnI、CK-MB水平預(yù)測STEMI的效能Tab.2 Efficiency of plasma UCA1,miR-1 expression and cTnI,CK-MB levels in predicting STEMI

圖1 血漿UCA1、miR-1及血清cTnI、CK-MB預(yù)測STEMI的ROC曲線Fig.1 ROC curve of plasma UCA1,miR-1 and serum cTnI,CK-MB in predicting STEMI

本研究結(jié)果表明，STEMI組相較于健康對照人群，cTnI、CK-MB水平明顯升高，UCA1表達(dá)顯著降低，說明cTnI、CK-MB、UCA1在AMI人群中存在異常表達(dá)，可作為預(yù)測心肌損傷的重要生物指標(biāo)。UCA1是一種存在于血漿中的長鏈非編碼RNA，最早在膀胱移行細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)，可在膀胱癌中出現(xiàn)異常表達(dá)，但無編碼蛋白質(zhì)的功能，故常作為診斷膀胱癌的潛在標(biāo)志物[10]。近年來隨著學(xué)者研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)UCA1在心肌損傷中也有一定異常表現(xiàn)。推測原因是，在高糖刺激下，心肌細(xì)胞UCA1可逐漸減少，導(dǎo)致機(jī)體熱休克蛋白被抑制，加速心肌細(xì)胞凋亡，同時(shí)還可促使細(xì)胞色素C釋放、線粒體功能下降，減少心肌葡萄糖攝取，降低葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4水平，從而影響心肌能量代謝，加重心力衰竭[11-12]。本研究經(jīng)Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，UCA1表達(dá)與cTnI、CK-MB水平呈負(fù)相關(guān)，考慮是由于UCA1表達(dá)在心功能保護(hù)中發(fā)揮一定作用，與劉崇韜等[13]研究結(jié)果相符。

miR-1是心臟中表達(dá)豐度較高的miRNA，且特異表達(dá)于心肌細(xì)胞。miR-1在抑制轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)中具有一定作用，可介導(dǎo)細(xì)胞分化、增殖，促進(jìn)靶向mRNA降解過程中負(fù)向調(diào)節(jié)功能，在心肌細(xì)胞中存在特異性表達(dá)，且對心血管病變發(fā)生、發(fā)展有著重要作用[14]。本結(jié)果顯示，STEMI組miR-1表達(dá)高于健康對照組，分析原因，系機(jī)體發(fā)生AMI后，可通過受損破裂的心肌細(xì)胞滲入至體循環(huán)，加入微囊泡主動(dòng)分泌，使得miR-1表達(dá)水平升高[15]。而經(jīng)相關(guān)性分析，miR-1與UCA1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，是因?yàn)閙iR-1可通過介導(dǎo)氧化，下調(diào)UCA1表達(dá)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生AMI后，miR-1表達(dá)升高，從而間接或直接影響UCA1結(jié)合，抑制UCA1表達(dá)，隨之miR-1降低，UCA1可從受損心肌釋放至血液中，使得體內(nèi)UCA1水平逐漸上升。此外，通過線性回歸分析，miR-1會(huì)對血漿UCA1表達(dá)產(chǎn)生顯著的負(fù)向影響關(guān)系，但cTnI、CK-MB并不會(huì)對血漿UCA1表達(dá)產(chǎn)生直接關(guān)系，說明AMI體內(nèi)UCA1表達(dá)含量變化與miR-1更具有直接關(guān)系，可能是因miR-1、UCA1有著相同特點(diǎn)，均直接參與調(diào)控心肌重塑過程，是心血管病變重要的靶向分子和生物標(biāo)志物[16]。

綜上所述，STEMI患者存在UCA1表達(dá)降低，且與miR-1 cTnI、CK-MB均呈顯著負(fù)相關(guān)，可為今后STEMI疾病診斷、病情評估、預(yù)后預(yù)測提供科學(xué)依據(jù)。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

侯維維：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過程，論文撰寫；郭良敏：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核；王春杉：課題設(shè)計(jì)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，論文撰寫