文安敏

（貴州省遵義市播州區(qū)疾病預防控制中心，貴州遵義 563100）

現(xiàn)階段，飲用水最迫切的安全問題是微生物污染問題，這也是世界范圍的難題。消除安全問題最有效的方法為生活飲用水微生物檢查。符合國家規(guī)定的飲用水都是經(jīng)由相關處理，水中微生物達到一定標準，且人們能夠安全飲用的水[1]。世界衛(wèi)生組織調查發(fā)現(xiàn)，水污染導致世界上約12億人發(fā)生了腸道傳染性疾病，其中大約有400萬人因為水污染疾病死亡，所以生活飲用水質量把控工作十分重要[2]。近幾年，我國加強了生活飲用水質量監(jiān)測工作，以確保生活飲用水中所含有的微生物含量符合國家標準；但是在輸送等過程中也可能出現(xiàn)二次污染的問題，導致水中微生物含量超標，因此微生物檢驗是檢驗生活飲用水質量的重要方式，能夠保證飲用水質量安全[3-4]。 濾膜法是一種行之有效的微生物檢測方式，該方法操作極為便利，在檢測前會對水質當中的雜質進行判別，但是檢測結果的準確性較差[5]。為此，本次研究主要采用濾膜法與多管發(fā)酵法兩種微生物檢測技術對生活飲用水中微生物進行檢測，并觀察結果。

1 材料與方法

1.1 材料

研究抽取180份生活飲用水（枯水期90份，豐水期90份），時間段為2020年4月到2021年4月，樣本檢測遵循《生活飲用水標準檢驗方法水樣收集和保存》[6]中記載的流程實施采集及保存，兩組基線資料差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。將枯水期與豐水期的飲用水標本分別進行濾膜法實驗（即對照組）與多管發(fā)酵法（即觀察組）。

1.2 試劑與儀器

生物顯微鏡，型號XSP-12CA，上海光學儀器一廠；生物安全柜，型號BSC-1500IIB2-X，濟南鑫貝西生物技術有限公司；高壓蒸汽滅菌消毒器，型號BKQ-B50II，濟南泰醫(yī)生物技術有限公司；電熱鼓風干燥箱，型號DHG-9240A，武漢若瑞德科技有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號DHP-9012，上海燈晟儀器制造有限公司；紫外光燈，型號BOT-IIA，北京士博瑞科技有限公司。

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（PB95789-250 g）、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基（PA95908-250 g）、EC-MUG培養(yǎng)基（PC 95790-250 g）、革蘭氏染色液（PB231292-100 mL×4）， 均為廣東翁江化學試劑有限公司生產(chǎn)。

1.3 實驗方法

1.3.1 濾膜法實驗

在燒杯中放入濾膜，加入蒸餾水，將其煮至沸騰，循環(huán)沸騰3次之后，將其實施15 min的常規(guī)殺菌措施，再對燒杯實施清潔，保證無殘留物后再次煮沸。將濾膜粗糙面向上，使用無菌鑷子取出，再放在無菌濾床上。取出水樣100 mL。開啟閥門實施抽濾，過濾完成后實施5 s抽氣，再關閉濾器閥門，使用滅菌鑷子除去濾膜，放入品紅硫酸鈉培養(yǎng)基上，確保有細菌殘留面朝上，在使用電熱恒溫培養(yǎng)箱進行 培養(yǎng)。

1.3.2 多管發(fā)酵法

把10 mL水樣接種到10 mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1 mL水樣接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另取1 mL水樣加入到9 mL滅菌生理鹽水中稀釋10倍，即0.1 mL水樣與10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液混合，每一稀釋度接種5管。從自來水廠出來的水，應當時常檢測，或每天檢測1次，可以與5份容積為10 mL水樣品雙料培養(yǎng)基相混合，每份與10 mL水樣品相混。若檢測水源發(fā)現(xiàn)嚴重污染，則要擴大稀釋度，可以與1 mL、0.1 mL、0.01 mL，甚至0.1 mL、0.01 mL、0.001 mL相混，每稀釋度對接5管，每種水樣品共對接15管。與低于1 mL水樣品對接時，稀釋時，必須遵守逐步增加的原則，可進行10倍遞增的稀釋，再與1 mL對接，每上升 1次，更換1次1 mL滅菌刻度吸管。完成接種之后，將接種管置恒溫培養(yǎng)箱，36 ℃培養(yǎng)24 h。在培養(yǎng)后，觀察試管中是否有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，如所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性，若是陽性則將產(chǎn)酸產(chǎn)氣管轉種紅美蘭瓊脂平板中，再使用培養(yǎng)箱36 ℃培養(yǎng)18～24 h，在完成培養(yǎng)后，密切觀察菌落形態(tài)，如果發(fā)現(xiàn)紫黑色且有金屬光澤、淡紫色且無金屬光澤的菌落，則必須染色后鏡檢，在染色工作完成之后，鏡檢結果凸顯革蘭氏陰性無芽孢桿菌，同時接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液進行證實試驗，置恒溫培養(yǎng)箱36 ℃培養(yǎng)24 h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實有總大腸菌群存在。再進行耐熱大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測。

1.3.3 統(tǒng)計學方法

使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料用（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 枯水期檢出率比較

枯水期一般為每年12月至次年4月全年流水量最少的時期，此時間段的降雨量較為稀少、地表水流枯竭，主要依靠地下水補給水源。相對而言，水中菌群的活躍度降低、水中微生物不易繁殖。如表1所示，采用濾膜法與多管發(fā)酵法在檢測枯水期飲用水樣本時發(fā)現(xiàn)，兩種方法對大腸菌群、雜菌的檢出數(shù)量之間的差異較?。≒＞0.05），與濾膜法（對照組）相比，多管發(fā)酵法（觀察組）在大腸埃希菌、耐熱大腸菌群的檢出率偏高（P＜0.05）。

表1 枯水期檢出率比較

2.2 豐水期檢出率比較

豐水期一般為5月—9月，此時間段氣溫持續(xù)升高且多為雨水充沛或高山溶雪補給的時期，因此水中菌群異?；钴S、導致微生物的大量繁殖，若未能徹底消毒，在飲用后可引起感染。如表2所示，在豐水期分別采用濾膜法與多管發(fā)酵法檢測后，兩種方法在大腸菌群、雜菌的檢出數(shù)量之間無顯著性差異 （P＞0.05），與濾膜法（對照組）相比，多管發(fā)酵法（觀察組）在大腸埃希菌、耐熱大腸菌群的檢出數(shù)量較高（P＜0.05）。

表2 豐水期檢出率比較

3 結論與討論

水是一切生命活動的起源，是人類及動植物生命過程中不可缺少的一項重要資源，也是生物體重要的組成部分。社會的可持續(xù)發(fā)展離不開工業(yè)、農(nóng)業(yè)及城市建設，就目前的情況來看，工業(yè)生產(chǎn)時排放未處理的廢水、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中大量使用農(nóng)藥和肥料，及城市垃圾、廢氣與污水等是造成水污染的主要原因，水質污染的情況也越發(fā)嚴重。水污染直接影響到飲用水源的水質，同時飲用水源中的微生物總含量超標也對人們的健康造成嚴重影響，水污染已成為威脅人類生命安全的重要問題。因此，有關部門還需加強對水源的保護，切實提高對飲用水質的檢測技術，已保障生活飲用水的水質質量。

微生物檢測是評價水源、生活飲用水水質情況的一項重要指標，加強對水質的監(jiān)測、提高檢測合格率，是保障居民用水安全，預防水源性疾病的重要手 段[7-8]。在日常飲水的微生物檢測方法中，多管發(fā)酵法是研究水樣大腸菌類的一種使用率較高的方法，能夠有效檢測水中的總大腸菌群?？偞竽c菌群的主要種類是革蘭氏陰性菌，它是無芽孢桿菌，在36 ℃培養(yǎng)24 h的條件下，此類菌種會產(chǎn)生發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，而其自身具有需氧、厭氧的屬性，可利用培養(yǎng)基以及其他試劑實施培養(yǎng)及檢測[9]。本實驗中采用濾膜法及多管發(fā)酵法均能檢出水源中大腸菌群和雜菌，且兩種方法檢出的數(shù)量之間存在顯著差異性，但對于大腸埃希菌和耐熱大腸菌群而言，多管發(fā)酵法檢出的數(shù)量更高（P＜0.05）。

綜上所述，在對飲用水質量進行控制的過程中采用合理的措施，可以促進飲用水的質量得到提升，保證人們的身體健康，使人們可以飲用質量合格的生活飲用水。