唐 奕

（邵陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南邵陽(yáng) 422000）

食品企業(yè)在產(chǎn)品中添加甜味劑（安賽蜜、糖精鈉）和防腐劑（苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸），以改善食品的口感、延長(zhǎng)保質(zhì)期[1]。《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）對(duì)適用范圍和限量要求都作出了明確規(guī)定[2]。目前這5種食品添加劑使用多個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)測(cè)定的報(bào)道甚少，造成檢驗(yàn)效率低，實(shí)驗(yàn)成本高[3]。本試驗(yàn)在GB 5009.28—2016[4]、GB 5009.121—2016[5]、GB/T 5009.140—2003[6]的基礎(chǔ)上，優(yōu)化試驗(yàn)條件，同時(shí)測(cè)定以上5種食品添加劑，以科學(xué)高效保障食品質(zhì)量安全。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀（二極管陣列檢測(cè)器、配自動(dòng)進(jìn)樣器）；mini UV超純水機(jī)。

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，1000 μg/mL，北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限公司；甲醇，色譜純；乙酸銨、亞鐵氰化 鉀、乙酸鋅、硫酸鋅和氫氧化鈉，分析純。

試驗(yàn)樣品為碳酸飲料、含乳飲料、辣椒醬，市售。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液（7∶93）；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（250 μg/mL）：分別準(zhǔn)確吸取 12.5 mL安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（均為1000 μg/mL）于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL和5.00 mL于10 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度分別為25 μg/mL、50 μg/mL、75 μg/mL、100 μg/mL和125 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.2.3 流動(dòng)相比例

試驗(yàn)選用甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液作為流動(dòng)相，分別采用5∶95、7∶93、10∶90這3種不同的比例進(jìn)行混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定。

1.2.4 樣品預(yù)處理

稱(chēng)取約2 g碳酸飲料于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，超聲20 min，加水定容至刻度，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)[3]。

稱(chēng)取約2 g含乳飲料、辣椒醬于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，超聲20 min，冷卻至室溫，加沉淀劑以沉淀蛋白質(zhì)，混勻，加水定容至刻度，于8000 r/min離心，取適量上清液過(guò)0.22 μm 濾膜，待測(cè)。本次試驗(yàn)選用兩種沉淀劑進(jìn)行比較測(cè)定：沉淀劑1為亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）+乙酸鋅溶液（220 g/L）各2 mL；沉淀劑2為硫酸鋅（120 g/L）+ 氫氧化鈉（20g/L）各2 mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動(dòng)相比例的確定

流動(dòng)相比例的變化直接影響分離效果、出峰時(shí)間和順序，結(jié)果顯示甲醇∶乙酸銨溶液比例為5∶95時(shí)30 min全部分離，分離效果好，具體情況見(jiàn)圖1；比例為7∶93時(shí)25 min全部分離，分離效果好，具體情況見(jiàn)圖2；比例為10∶90時(shí)20 min全部分離，分離效果欠佳，出峰順序略有改變，糖精鈉在山梨酸前面出峰，兩個(gè)峰略有重疊，當(dāng)樣品基質(zhì)復(fù)雜時(shí)，容易出現(xiàn)雜質(zhì)與目標(biāo)物質(zhì)分離不開(kāi)，影響測(cè)定結(jié)果，具體情況見(jiàn)圖3。綜合考慮，本試驗(yàn)選擇甲醇與乙酸銨的比例7∶93進(jìn)行檢測(cè)。

圖1 甲醇∶乙酸銨=5∶95時(shí)色譜圖

圖2 甲醇∶乙酸銨=7∶93時(shí)色譜圖

圖3 甲醇∶乙酸銨=10∶90時(shí)色譜圖

2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性關(guān)系

按1.2.1條件進(jìn)行混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的測(cè)定，以保留時(shí)間和峰面積對(duì)濃度分別進(jìn)行線(xiàn)性回歸，5種添加劑在25～125 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系，安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙 酸相關(guān)系數(shù)分別為0.9999、1.0000、1.0000、0.9999和0.9999。

2.3 加標(biāo)回收率的測(cè)定結(jié)果

按本方法進(jìn)行樣品制備，分別在試樣中加入5.0 mL 安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸 （50 μg/mL）混合標(biāo)液（理論加標(biāo)量為0.25 mg），根據(jù)樣品類(lèi)別分別預(yù)處理后按1.2.1條件進(jìn)行測(cè)定，做2個(gè)平行樣。其中，含乳飲料和辣椒醬采用2種沉淀劑進(jìn)行前處理，然后測(cè)定。同時(shí)做樣品空白。

表1～表3結(jié)果顯示，5種添加劑的平均回收率為82.6%～104.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%～4.6%。表2、表3結(jié)果顯示，2種沉淀劑回收率、精密度均達(dá)到理想效果。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果及精密度（碳酸飲料）

表2 回收率測(cè)定結(jié)果及精密度（含乳飲料）

表3 回收率測(cè)定結(jié)果及精密度（辣椒醬）

3 結(jié)論

本文建立了同時(shí)測(cè)定食品中5種添加劑的高效液相色譜法，該方法簡(jiǎn)單快速，分離效果好，回收率高，精密度好，提高了檢測(cè)效率，降低了檢驗(yàn)成本。選用的2種沉淀劑（亞鐵氰化鉀溶液+乙酸鋅溶液、硫酸鋅+氫氧化鈉）回收效果好，均適用于樣品中蛋白質(zhì)的沉淀處理。