周 穎 文笑游 柳 磊 陳茜蕓 曾慧蓮 董維維

象山縣中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)療健康集團 浙江 象山 315700

高尿酸血癥作為常見的慢性疾病，可誘發(fā)痛風性關節(jié)炎、心血管疾病、慢性腎臟病、代謝綜合征與高血壓等疾病[1]。研究顯示，高尿酸血癥患者體內(nèi)尿酸鈉（MSU）晶體能通過刺激T細胞、血小板、滑膜細胞、單核細胞和巨噬細胞等相關細胞釋放炎癥介質(zhì)，使體內(nèi)白細胞計數(shù)和白細胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白細胞介素-18（Interleukin-18，IL-18）、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎癥因子水平增高，參與高尿酸血癥的發(fā)生及發(fā)展過程[2，3]。因此，臨床認為開展抗炎治療，通過控制高尿酸血癥患者體內(nèi)炎癥因子水平，能有效緩解癥狀，減緩病情進展[4]?；诖?，本研究采用清濕熱通絡方治療高尿酸血癥，分析清濕熱通絡方對高尿酸血癥小鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表達的影響，以期為臨床治療提供參考。報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與藥物：準備40只SPF級的雄性昆明種小鼠開展實驗，體質(zhì)量28～36g，平均體質(zhì)量為（32.39±4.28）g，由杭州子源實驗動物科技有限公司提供，許可證號SCXK（浙）2019-0004；屏障環(huán)境內(nèi)相對溫度為20～25℃，相對濕度為40%～70%；本研究嚴格依據(jù)動物倫理原則開展。清濕熱通絡方藥物組成：柴胡、黃芩、白芍、桃仁、紅花、忍冬藤、牛膝各10g，薏苡仁、土茯苓各30g，蒼術15g，黃柏6g。加水煎煮2遍后混勻，旋蒸濃縮、干燥、粉碎后制成干粉。立加利仙（生產(chǎn)企業(yè)：昆山龍燈瑞迪制藥有限公司，國藥準字H20010790）。炎癥因子試劑盒（生產(chǎn)批號：20210814）購自中國深圳華大基因股份有限公司。

1.2 造模及分組給藥方法：將40只SPF級的雄性昆明種小鼠進行3d適應性飼養(yǎng)后，根據(jù)隨機數(shù)字表法分成空白組、對照組、苯溴馬隆組、中藥組4組，每組10只。對照組和苯溴馬隆組、中藥組小鼠均腹腔注射氧嗪酸鉀混懸液300mg/（kg·d），并于1h后給予酵母膏灌胃，酵母膏用量為30000mg/（kg·d），均為每日1次，持續(xù)14d，以完成高尿酸血癥造模。完成造模后隔天，給予空白組與對照組小鼠0.9%NaCl 10mL/(kg·d)灌胃處理，苯溴馬隆組小鼠用苯溴馬隆溶液20mg/（kg·d）灌胃，而中藥組小鼠用清濕熱通絡方10mg/（kg·d）灌胃，均為1次/d，持續(xù)14d。試驗期間對各組小鼠的飲食、活動狀態(tài)、尿液和毛發(fā)等情況進行觀察。在第28d灌胃給藥1h后，取各組小鼠的眼球血，放入4℃冰箱內(nèi)保存，待測。同時，完成采血后將各組小鼠脫頸處死，并對腹部進行消毒備皮，將腹壁剖開，使腹腔內(nèi)臟器暴露，找到腎臟，對腎周筋膜組織、脂肪組織實施游離處理，將雙側(cè)腎臟快速取下，并將血跡洗去，再將腎臟切開，取腎組織2塊，用4%多聚甲醛實施固定，后開展組織修剪及脫水處理、透明處理、包埋處理，將腎臟組織切成4mm厚的切片，并將切片烘干，實施脫蠟和梯度酒精水化、HE染色處理，用鹽酸乙醇實施分化處理，經(jīng)蒸餾水洗滌，返藍10min，再開展伊紅復染及封片、鏡檢處理，觀察各組小鼠的腎臟組織形態(tài)表現(xiàn)。

1.3 血清學指標：觀察并對比4組小鼠的血清尿酸、肌酐、炎癥因子（IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α）表達水平。從冰箱取出各組小鼠的血液標本，靜置2h，開展4000r/min低溫離心處理10min，留取血清。通過全自動生化分析儀對各組小鼠的血清尿酸、肌酐水平進行檢測，并經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗對各組小鼠的血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平實施檢測，嚴格按試劑盒說明書執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計學分析：選擇SPSS 24.0軟件工具包校對數(shù)據(jù)，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）描述，采用t檢驗；計數(shù)數(shù)據(jù)采用n（%）描述，采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 4組小鼠的血清尿酸和肌酐水平比較：對照組、苯溴馬隆組、中藥組小鼠的血清尿酸、肌酐水平均高于空白組（P＜0.05）；苯溴馬隆組、中藥組小鼠的尿酸、肌酐水平均低于對照組，且中藥組低于苯溴馬隆組（P＜0.05）。見表1。

表1 4組小鼠血清尿酸、肌酐水平比較（±s，μmol/L）

表1 4組小鼠血清尿酸、肌酐水平比較（±s，μmol/L）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05；與苯溴馬隆組比較，△P＜0.05。

肌酐43.16±10.47 72.36±13.18*64.82±10.23*#54.79±11.58*#△組別空白組對照組苯溴馬隆組中藥組例數(shù)10 10 10 10尿酸245.73±38.65 598.94±53.89*432.58±43.17*#315.91±41.52*#△

2.2 4組小鼠的血清炎癥因子水平比較：對照組、苯溴馬隆組、中藥組小鼠的血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均高于空白組（P＜0.05）；苯溴馬隆組、中藥組小鼠的IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均低于對照組，且中藥組低于苯溴馬隆組（P＜0.05）。見表2。

表2 4組小鼠血清炎癥因子水平比較（±s，n=10）

表2 4組小鼠血清炎癥因子水平比較（±s，n=10）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05；與苯溴馬隆組比較，△P＜0.05。

TNF-α（ng/mL）152.86±10.43 270.91±14.52*229.73±13.82*#180.58±12.24*#△組別空白組對照組苯溴馬隆組中藥組IL-1β（mg/L）15.70±3.04 42.26±2.85*33.67±2.43*#22.39±3.12*#△IL-6（ng/L）78.58±6.45 151.37±7.94*122.69±7.32*#93.94±6.81*#△IL-18（mg/L）17.48±2.93 51.57±3.08*36.29±3.11*#24.69±3.25*#△

2.3 4組小鼠的腎臟組織形態(tài)表現(xiàn)：空白組小鼠的腎臟組織細胞間呈整齊排列，腎小管和腎小球的結構飽滿且清晰，小管上皮細胞形態(tài)正常且著色均勻；對照組小鼠的腎臟組織內(nèi)能發(fā)現(xiàn)腎小球略萎縮，腎小管呈大量空泡樣改變，并可見小管上皮細胞核分裂，間質(zhì)炎細胞浸潤；苯溴馬隆組小鼠的腎臟病變?nèi)悦黠@，腎小管空泡變性，間質(zhì)可見炎細胞浸潤；中藥組小鼠的腎臟病變明顯好轉(zhuǎn)，能見少數(shù)腎小管空泡變性，其他功能顯著改善。見圖1。

圖1 清濕熱通絡方對高尿酸血癥小鼠腎臟組織形態(tài)的影響（×400）

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥能引起脂肪代謝紊亂、糖代謝紊亂和氨基酸代謝紊亂，破壞血管內(nèi)皮細胞功能，加快動脈平滑肌細胞增殖與遷移，損害血管功能，進而誘發(fā)心血管疾病[5，6]。進一步研究數(shù)據(jù)顯示，高尿酸血癥患者的血尿酸水平上調(diào)時，尿酸鹽結晶大量析出，并沉積于血管壁，破壞血管內(nèi)膜，導致血管內(nèi)膜出現(xiàn)慢性炎癥損傷[7-9]；與此同時，血尿酸水平增高能將單核細胞核因子（NF）-kB激活，大量釋放IL-6、TNF-α等炎癥因子，使血清內(nèi)炎癥因子表達水平增高，產(chǎn)生炎癥反應，破壞血管功能，增加血管內(nèi)膜厚度，誘發(fā)痛風、冠心病等疾病。因此，對高尿酸血癥介導的炎癥反應進行有效抑制，對臨床防治冠心病等疾病存在重要意義[10，11]。

清濕熱通絡方主要由柴胡、黃芩、白芍、桃仁、紅花、忍冬藤、薏苡仁、蒼術、黃柏、牛膝、土茯苓組成[12]。方中柴胡能和解表里、疏肝解郁、升陽，黃芩、忍冬藤、薏苡仁、黃柏具有清熱解毒、通絡除濕等功效，白芍能柔肝止痛、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、平抑肝陽、斂陰止汗，桃仁、紅花、牛膝具有活血祛瘀、止痛等作用，蒼術能祛風散寒、燥濕健脾，土茯苓能清熱利濕，搜剔濕熱之蘊毒[13]。綜觀清濕熱通絡方，全方能夠有效發(fā)揮清熱解毒、除濕和通經(jīng)活絡等作用，在高尿酸血癥對證治療中具有良好的療效。本研究通過分析清濕熱通絡方對高尿酸血癥小鼠血清尿酸、肌酐、炎癥因子表達的影響發(fā)現(xiàn)，對照組、苯溴馬隆組、中藥組小鼠的血清尿酸、肌酐、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均高于空白組，但苯溴馬隆組、中藥組小鼠的尿酸、肌酐、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均低于對照組，且中藥組低于苯溴馬隆組；提示清濕熱通絡方能有效降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸、肌酐和炎癥因子水平，控制病情進展。分析原因主要是由于方中柴胡、黃芩、紅花、忍冬藤、土茯苓等中藥存在顯著的抗炎、清熱作用，能改善微循環(huán)，抗血小板聚集和擴張血管，降低心腦血管疾病發(fā)生風險[14，15]。腎臟病理分析結果顯示，對照組小鼠的腎臟組織內(nèi)能發(fā)現(xiàn)腎小球發(fā)生萎縮，且腎小管出現(xiàn)擴張，呈大量空泡樣改變，說明腎臟出現(xiàn)病變；而中藥組小鼠的腎臟病變明顯好轉(zhuǎn)，能見灶性腎小管空泡變性，其他功能顯著改善；提示清濕熱通絡方對腎損傷存在顯著的保護作用。

綜上所述，清濕熱通絡方能減少高尿酸血癥患者血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表達，降低血清尿酸、肌酐水平，進而有效改善腎臟組織形態(tài)，保護患者腎臟，可為臨床防治和研究分子機制提供參考。