陸宇清 王 玲 徐 靜 李樂超 蔡 鑫▲
1.江蘇省海安市人民醫(yī)院眼科,江蘇海安 226600;2.江蘇省無錫市人民醫(yī)院眼科,江蘇無錫 214023;3.江蘇省蘇州市第九人醫(yī)院眼科,江蘇蘇州 215000;4.江蘇省徐州市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,江蘇徐州 221000
原發(fā)性開角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)是一種常見的眼科疾病,臨床主要表現(xiàn)為眼壓高、特征性視神經(jīng)萎縮及視野缺損,可導(dǎo)致患者視力喪失[1-3]。由于POAG 缺乏典型的臨床癥狀,患者初期容易被誤診,常失去最佳治療時期[4-5]。研究發(fā)現(xiàn),POAG 可能與遺傳、高血壓等多種復(fù)雜因素有關(guān),患者視盤面積/垂直杯盤比值的改變早于視野的改變,并且具有一定的遺傳度[6-7]。數(shù)據(jù)調(diào)查顯示,POAG 在家族人群中的發(fā)病率是一般人群的6 倍[8]。有研究報道,CAV1、CAV2、TMCO1、CDKN2B 等多種基因或位點可能與POAG 發(fā)病有關(guān)[9],其中,CDKN2B 是細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B,可通過轉(zhuǎn)化生長因子β 信號通路調(diào)節(jié)細胞增殖、分化及凋亡[10]。rs1063192位于CDKN2B 基因3’非翻譯區(qū)域,而3’非翻譯區(qū)域具有微RNA 或干擾小RNA 的結(jié)合靶點,對蛋白表達具有調(diào)控作用[11]。然而,CDKN2B 基因rs1063192 多態(tài)性與漢族人群POAG 的關(guān)聯(lián)性尚不清楚,故本研究比較漢族人群中不同病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 分布情況其多態(tài)性與本病的關(guān)聯(lián)性。
選取2019 年5 月至2021 年5 年江蘇省海安市人民醫(yī)院(以下簡稱“我院”)收治的98 例漢族人群POAG 患者,記為研究組,另選取同期我院體檢健康者92 名作為對照組。本研究獲得我院倫理委員會批準(HKL201928)。納入標準:①符合《眼科臨床指南》[12]中POAG 診斷標準;②漢族人群;③年齡18~75 歲;④資料完整。排除標準:①繼發(fā)性青光眼;②患者間有血緣關(guān)系;③合并角膜炎、結(jié)膜炎等其他眼部疾?。虎芫窦膊。虎輴盒阅[瘤;⑥心肝腎嚴重功能障礙。
采集所有研究對象外周靜脈血3 ml,采用全血DNA 提取試劑盒提取DNA(按照DNA 試劑盒說明書進行,試劑盒購自蘇州曠遠生物分子技術(shù)有限公司,貨號:00719052311)。采用PCR-RFLP 技術(shù)檢測CDKN2B基因rs1063192 位點多態(tài)性,引物由上海生物工程有限公司合成(正向引物:5’-GCCACTATGGACAATGCGAA-3’;反向引物:5’-TGGACCGCTAAGCACAGCCT-3’),將試劑加入PCR 管中,反應(yīng)體系采用KODplus,按照如下PCR 反應(yīng)條件進行擴增:95℃10 min,95℃10 s,60℃30 s,74℃30 s,連續(xù)進行40 次循環(huán)。采用373A DNA 測序儀(美國PE 公司)對PCR 產(chǎn)物進行測序,采用SDS 軟件進行基因分型。
①對研究組和對照組進行Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗。②比較不同臨床病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型分布情況。③比較研究組和對照組CDKN2B 基因rs1063192 位點的基因型及等位基因的分布情況。④分析CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型及等位基因與漢族人群POAG 的關(guān)系。
采用SPSS 22.0 對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用例數(shù)/次數(shù)和百分率表示,比較采用χ2檢驗。采用logistic 回歸分析影響因素。以P <0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
研究組和對照組基因型分布均符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗,CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型實際頻數(shù)與理論頻數(shù)比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P >0.05),可用于后續(xù)研究。見表1。
表1 研究組和對照組CDKN2B 基因rs1063192 位點分布基因型的Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(例)
不同年齡、青光眼家族史情況、合并高血壓情況的POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型分布比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05)。見表2。
表2 不同臨床病理特征POAG 患者CDKN2B基因rs1063192 位點基因型分布[例(%)]
研究組CDKN2B 基因rs1063192 位點GG、AG 基因型頻率高于對照組,G 等位基因型頻率高于對照組(P <0.05)。見表3。
表3 研究組和對照組CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型及等位基因分布比較
以CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型(AA=0,AG=1,GG=2)、等位基因(A=0,G=1)為自變量,以漢族人群POAG 發(fā)病情況(是=0,否=1)為因變量,進行多因素分析,結(jié)果顯示,攜帶GG 基因型漢族人群POAG 發(fā)病風險是攜帶AA 漢族人群的3.177 倍;G等位基因攜帶漢族人群POAG 發(fā)病風險是攜帶A 等位基因漢族人群的2.751 倍(P <0.05)。見表4。
表4 CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型及等位基因分布與漢族人群POAG 的關(guān)系
POAG 是一種典型的雙側(cè)慢性進行性視神經(jīng)病變,是導(dǎo)致不可逆失明的第二大原因[13-16]。POAG 患者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞進行性喪失,視神經(jīng)乳頭凹陷,并伴有典型的視野缺損,嚴重影響患者正常生活[17-18]。POAG發(fā)病具有家族性聚集性,尤其是一級親屬發(fā)病率較高,可能與部分基因表達有關(guān)[19]。近年來,全基因組關(guān)聯(lián)研究確定了100 種以上與POAG 相關(guān)的變異基因及與內(nèi)表型相關(guān)多個位點[20-21]。分析影響POAG 發(fā)病的基因型特點對于探究其發(fā)病機制及尋求臨床治療新靶點具有重要意義。
本研究中,研究組CDKN2B 基因rs1063192 位點GG 基因型頻率高于對照組,G 等位基因頻率高于對照組,提示GG 基因型及G 等位基因在漢族人群POAG 發(fā)病中具有重要影響。有研究報道,視盤結(jié)構(gòu)相關(guān)基因和多態(tài)位點與歐羅巴人種和亞洲人群POAG易感性有關(guān)[22]。視盤結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)參數(shù)包括視盤面積/垂直杯盤比值,而CDKN2B 基因rs1063192 位點是與視盤面積相關(guān)的一個基因位點[23]。此外,有研究發(fā)現(xiàn),位于CDKN2B(rs1063192)反義鏈RNA1 上的rs497759(CDKN2B-AS1)與rs1063192 接近,且與視盤結(jié)構(gòu)相關(guān),能夠調(diào)節(jié)CDKN2B 和CDKN2A 基因表達[24]。本研究中,不同年齡、青光眼家族史情況、合并高血壓情況的POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位點基因型分布不同,提示此類人群與GG 基因型有關(guān)。臨床研究表明,>60 歲、青光眼家族史、合并高血壓均是POAG 患者發(fā)病的獨立危險因素,此類人群攜帶GG 基因型比例較高,進一步提示GG 基因型與POAG 發(fā)病有關(guān)[25-26]。本研究結(jié)果顯示,CDKN2B 基因rs1063192 位點GG基因型和G 等位基因均為漢族人群POAG 發(fā)病的影響因素。CDKN2B 基因rs1063192 位點G 等位基因可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路,調(diào)節(jié)眼中部分組織表達,進而誘發(fā)病理生理學(xué)改變,使POAG 發(fā)病風險增加[27-28]。
綜上,CDKN2B 基因rs1063192 位點GG 基因型和G 等位基因可能與漢族人群POAG 發(fā)病有關(guān),其多態(tài)性可增加漢族人群POAG 發(fā)病風險。