吳立華，吳鐘江

(?？谑械谌嗣襻t(yī)院，1.心內(nèi)科；2.神經(jīng)內(nèi)科，海南 海口 571100)

冠心病(coronary heart disease，CHD)是因冠狀動(dòng)脈壁被膽固醇及其他物質(zhì)沉積形成的斑塊導(dǎo)致管腔變窄，部分或完全阻斷血流而引起的缺血性心臟病，嚴(yán)重時(shí)可誘發(fā)急性心肌梗死或猝死，威脅患者生命安全[1]。CHD不可治愈，易反復(fù)發(fā)作，進(jìn)行性加重病情，但可通過(guò)改變生活方式、藥物、手術(shù)等干預(yù)阻止或延緩病情進(jìn)展[2]。高血脂是引起CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，臨床常使用阿托伐他汀等血脂調(diào)節(jié)藥物防治CHD[3]，但因西藥作用機(jī)制單一，療效受限。中醫(yī)藥的多靶點(diǎn)效應(yīng)則在CHD治療中獨(dú)具優(yōu)勢(shì)[4]。麝香保心丸是由舌象、人參、牛黃等7余味中藥精制而成的中成藥，主治芳香溫通、益氣強(qiáng)心，研究[5]證實(shí)，可有效改善CHD患者的血脂、炎癥和血管內(nèi)皮功能。近年來(lái)，研究[6-7]發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激在CHD的發(fā)生發(fā)展中作用重要；而微小RNA(miRNA)也被發(fā)現(xiàn)與CHD病變關(guān)系密切。本研究旨在探究麝香保心丸聯(lián)合阿托伐他汀對(duì)老年CDH患者心功能、氧化應(yīng)激及miR-133、miR-499表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年3月至2021年3月?？谑械谌嗣襻t(yī)院收治的90例CHD老年患者為研究對(duì)象，根據(jù)治療方法不同分為對(duì)照組和觀察組，每組各45例。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)確診為冠心??；(2)高血脂；(3)年齡60～85歲；(4)生命體征平穩(wěn)；(5)配合度高。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并心肌梗死、心力衰竭者；(2)合并嚴(yán)重腦、肺、腎、肝功能障礙者；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病、精神疾病、惡性腫瘤者；(4)過(guò)敏體質(zhì)者。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 治療方法 對(duì)照組予以阿托伐他汀鈣片(輝瑞制藥)治療，20 mg/次，1次/晚；觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上增加麝香保心丸(22.5 mg，上海和黃藥業(yè)有限公司)治療，50 mg/次，3次/d，療程均為12周。

1.2.2 觀察指標(biāo) (1)臨床療效：參考《臨床冠心病診斷與治療指南》[8]進(jìn)行3級(jí)評(píng)價(jià)。顯效：臨床癥狀完全或顯著改善，3個(gè)月內(nèi)未發(fā)生心絞痛或心絞痛發(fā)作次數(shù)降低>90%；有效：臨床癥狀明顯改善，3個(gè)月內(nèi)心絞痛發(fā)作次數(shù)降低50%～90%；無(wú)效：未達(dá)到以上標(biāo)準(zhǔn)?？傆行?(顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。(2)心功能指標(biāo)：治療前后采用心臟彩色多普勒超聲診斷儀(iE33型，PHILIPS)檢測(cè)患者左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左心室收縮期末內(nèi)徑(LVESD)、左心室舒張期末內(nèi)徑(LVEDD)。(3)氧化應(yīng)激指標(biāo)：治療前后采集采集患者空腹外周靜脈血，離心分離出血清于-20 ℃下保存，采用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(SOD)水平；硫代巴托酸顯色法檢測(cè)丙二醛(MDA)水平；比色法檢測(cè)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)水平。(4)血漿miR-133、miR-499表達(dá)水平：治療前后取分離血漿150 μL，加TRIzol試劑300 μL、氯仿60 μL，室溫靜置，離心15 min(12 000×g，4 ℃)，留取分層水相，加異丙醇150 μL均勻混合，再次離心10 min(12 000×g，4 ℃)，沉淀RNA，棄上清液，加乙醇(750 mL/L)300 μL洗滌，振蕩均勻，離心5 min(7 500×g，4 ℃)，棄上清液，干燥RNA后用DEPC 20 μL溶解，使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA吸光度，使用RT-qPCR，以?xún)刹椒z測(cè)miR-133、miR-499表達(dá)水平，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)總體積25 μL；反應(yīng)條件：95 ℃ 15 min預(yù)變性，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，總共35個(gè)循環(huán)。以2-ΔCt表示miR-133、miR-499的相對(duì)表達(dá)量。ΔCt=CtmiRNA-(Ctcel-miR-133+ Ctcel-miR-499)/2。(5)不良反應(yīng)發(fā)生情況：包括胃腸道不適、皮疹、味覺(jué)障礙、頭暈、頭痛等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較

觀察組患者總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者臨床療效比較[n(%)]

2.2 兩組患者心功能指標(biāo)比較

治療前，兩組患者心功能指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組患者LVEF均提高(P<0.05)，且觀察組高于對(duì)照組(P<0.05)；LVESD、LVEDD均降低(P<0.05)，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者心功能指標(biāo)比較

2.3 兩組患者氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

治療前，兩組患者氧化應(yīng)激指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組患者血清MDA均降低(P<0.05)，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)；SOD、GSH-Px水平均提高(P<0.05)，且觀察組高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 兩組患者氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

2.4 兩組患者miR-133、miR-499表達(dá)水平比較

治療前，兩組患者miR-133、miR-499表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組患者miR-133、miR-499水平均降低(P<0.05)；且觀察組低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 兩組患者miR-133、miR-499表達(dá)水平比較

2.5 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較

治療期間，兩組患者均未發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)導(dǎo)致患者退出研究。觀察組患者發(fā)生胃腸道不適1例，皮疹1例，味覺(jué)障礙2例，不良反應(yīng)總發(fā)生率為8.89%(4/45)；對(duì)照組發(fā)生胃腸道不適1例，頭暈頭痛1例，味覺(jué)障礙1例，不良反應(yīng)總發(fā)生率為6.67%(3/45)。兩組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

CHD是臨床常見(jiàn)心血管疾病，阿托伐他汀鈣片是其治療常用藥物，可通過(guò)阻斷羥甲戊酸轉(zhuǎn)化過(guò)程從而減少包括膽固醇在內(nèi)的固醇前體合成，降低血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量而發(fā)揮降脂作用，降低CHD患者發(fā)生心肌梗死、心力衰竭、心絞痛等風(fēng)險(xiǎn)[9]?？紤]到阿托伐他汀作用機(jī)制單一，中西醫(yī)聯(lián)合治療CHD在近年逐漸受到重視且被證實(shí)具較好的臨床療效和安全性[10]。

中醫(yī)認(rèn)為，CHD屬“心痛”“胸痹”等范疇，以氣虛、血瘀等最為常見(jiàn)，為本虛標(biāo)實(shí)之癥[11]。麝香保心丸是以宋代名方蘇合香丸為基礎(chǔ)，以麝香、蘇合香、人參、肉桂、蟾酥、牛黃、冰片7味中藥用現(xiàn)代技術(shù)精制而成，具溫陽(yáng)逐寒、化濁開(kāi)竅、益氣強(qiáng)心之效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究[12-14]顯示，麝香保心丸具有強(qiáng)心、調(diào)脂、改善心肌氧耗、抑制血管炎性反應(yīng)、增加冠脈血流、修復(fù)血管內(nèi)皮損傷等作用，有益于CHD患者。本研究結(jié)果顯示，相比對(duì)照組，觀察組總有效率提高(P<0.05)，且治療后LVEF、LVESD、LVEDD更優(yōu)(P<0.05)，與既往報(bào)道類(lèi)似[15]，表明在阿托伐他汀基礎(chǔ)上，應(yīng)用麝香保心丸可提高療效，改善心功能。氧化應(yīng)激與CHD的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的活性氧(ROS)將刺激血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一系列細(xì)胞因子誘發(fā)平滑肌細(xì)胞遷移、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡等，導(dǎo)致冠脈粥樣斑塊的形成、破裂，并進(jìn)一步加重心肌損傷[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，觀察組患者治療后血清MDA更低(P<0.05)；SOD、GSH-Px水平更高(P<0.05)，表明增加麝香保心丸治療CHD可有效減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，可能與麝香保心丸的多成分、多靶點(diǎn)作用有關(guān)：(1)麝香可通過(guò)改善細(xì)胞內(nèi)相關(guān)抗氧化酶如SOD、GSH-Px等的活性來(lái)抵抗氧化應(yīng)激損傷[17]；(2)蘇合香揮發(fā)油則可通過(guò)抑制TLR9的過(guò)表達(dá)來(lái)提高SOD活性，減輕氧化應(yīng)激[18]；(3)人參皂苷可通過(guò)參與NF-κB、Wnt/β-Catenin、PI3K/AKT、Keap1-Nrf2-ARE等多個(gè)信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的氧化與抗氧化系統(tǒng)的平衡[19]；(4)肉桂總黃酮也被證實(shí)有抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)的作用[20]。

miRNA是一種單鏈、非編碼RNA，近年來(lái)被證實(shí)在CHD、心律失常、心力衰竭等進(jìn)展中具有重要作用，將其作為心血管疾病潛在標(biāo)志物的研究越來(lái)越多。miR-133和miR-499均具有心肌特異性，二者在心肌發(fā)生急性損傷后進(jìn)入外周血液循環(huán)[21]。miR-133的相對(duì)表達(dá)量與冠狀動(dòng)脈病變的狹窄程度呈正相關(guān)[22]，miR-499也被證實(shí)與CHD伴慢性心衰患者的心功能、心室重構(gòu)程度呈負(fù)相關(guān)[23]。因此，檢測(cè)miR-133和miR-499的相對(duì)表達(dá)量也有助于評(píng)估CHD患者病情。本研究顯示，觀察組患者治療后miR-133、miR-499表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P<0.05)，表明麝香保心丸聯(lián)合阿托伐他汀可降低CHD患者miR-133、miR-499的相對(duì)表達(dá)量，但其作用機(jī)制尚不明晰。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，兩組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明二者聯(lián)用安全性好。

綜上，在使用阿托伐他汀的基礎(chǔ)上，對(duì)老年CHD患者增加麝香保心丸治療，可提高療效，且具良好的安全性，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)、減少miR-133和miR-499的相對(duì)表達(dá)量可能是其發(fā)揮療效的作用機(jī)制。