◎ 劉 暢，王嬌楊，胡榜文，呂賽楠，李任時，張朝鳳

（1.中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥健康產(chǎn)品研究開發(fā)聯(lián)合實驗室，江蘇 南京 211198；2.鎮(zhèn)坪縣農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，陜西 鎮(zhèn)坪 725600）

黃連花薹是多年生草本植物黃連的干燥花序，每年2 ～3 月開花，花葶1 ～2 條，二歧或多歧聚傘花序有3 ～8 朵花。歷版《中國藥典》規(guī)定根莖為黃連的傳統(tǒng)入藥部位。在黃連種植過程中，為提高根莖產(chǎn)量，在種植的第2 年，會摘除丟棄黃連花薹，只留下少量便于后期育種。現(xiàn)代研究表明黃連花薹含有大量的生物堿、黃酮和酚類等化學(xué)成分，具有降血脂、降血糖、降血壓、抗氧化和保護心肌缺血再灌損傷等藥理作用[1]。

現(xiàn)代研究表明，黃連花薹提取液可顯著調(diào)節(jié)高血糖大鼠腸道菌群和改善腸道微生物結(jié)構(gòu)[2]。其提取物能顯著降低小鼠的空腹血糖值，促進胰島素的釋放，降低醛糖還原酶的活性，從而改善2 型糖尿病[3]。體內(nèi)血糖水平主要來源于淀粉的消化吸收，α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是參與淀粉水解生成葡萄糖的關(guān)鍵酶。α-葡萄糖苷酶抑制劑能減緩碳水化合物分解葡萄糖的速度，可有效降低餐后血糖濃度，是治療2 型糖尿病的關(guān)鍵因素[4]。α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的酶抑制率廣泛用于評估中藥降血糖[5]。本研究擬用茶湯感官評價和兩種糖苷酶總百分抑制率作為考察指標(biāo)，確定了一款復(fù)配茶的配比方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃連花薹為陜西省鎮(zhèn)坪縣種植的中藥黃連干燥花序，標(biāo)本存放于中國藥科大學(xué)中藥資源系本課題組實驗室；紅茶為陜西省鎮(zhèn)坪縣牛頭店鎮(zhèn)陜西小石茶葉有限公司出品；α-葡萄糖苷酶，合肥巴斯夫生物科技有限公司；4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷，南京源葉生物科技有限公司；阿卡波糖和PNP，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；α-淀粉酶，北京奧博星生物有限公司等。

1.2 儀器與設(shè)備

Multiskan MK3 酶標(biāo)儀、移液槍，美國賽默飛公司；電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設(shè)備有限公司；pH 計、十萬分之一電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 α-葡萄糖苷酶抑制率的測定

以0.1 mol·L-1磷酸鈉緩沖液（pH 6.8）為溶劑，分別配制5.0 U·mL-1α-葡萄糖苷酶溶液和7 mmol·L-1底物PNPG 溶液。在EP 管中先加入PBS 緩沖液和 α-葡萄糖苷酶試液，加入樣品，混勻，37 ℃反應(yīng)5 min 后加入PNPG 溶液，混勻，37 ℃反應(yīng)50 min，加入Na2CO3（0.1 mol·L-1）終止反應(yīng)，405 nm 下測定α-葡 萄糖苷酶抑制率，每組3 個復(fù)孔[6]。各組反應(yīng)試劑的用量如表1 所示，α-葡萄糖苷酶抑制率的計算公式為

表1 α-葡萄糖苷酶體外抑制實驗反應(yīng)體系表

式中：Ab為陰性空白吸光度；Ac為陰性對照吸光度；Asb為樣品空白吸光度；Asc為樣品吸光度。

1.3.2 α-淀粉酶抑制率的測定

在各組EP 管中加入PBS 緩沖液和酶（0.5 mg·mL-1）試液后加入樣品溶液，混勻，37 ℃恒溫水浴10 min 后加入淀粉（0.5 mg·mL-1）溶液，混勻，37 ℃水浴反應(yīng)30 min，加入碘液。565 nm 波長下測定各組吸光度值，每組3 個復(fù)孔[7]。各組反應(yīng)試劑的用量如表2 所示，α-淀粉酶抑制率的計算公式為

表2 α-淀粉酶體外抑制實驗反應(yīng)體系表

式中：A為陰性空白吸光度；B為陰性對照吸光度；C為樣品空白吸光度；D為樣品吸光度。

1.3.3 黃連花薹與紅茶配比的確定

取經(jīng)干燥后粉碎后的黃連花薹和紅茶粉末，分別按黃連花薹比紅茶為2 ∶3、1 ∶1、3 ∶2 精確稱取，每包3 g。以茶水比3 ∶100 加沸水浸泡15 min 后，取茶湯。參考《茶葉感官審評方法》（GB/T 23776—2018），隨機邀請50 名受試者，從茶湯湯色、香氣、滋味3 方面對復(fù)配茶進行感官評分，初步確定黃連花薹與紅茶的配比。復(fù)配茶的感官評分標(biāo)準(zhǔn)見表3。

表3 復(fù)配茶的感官評分標(biāo)準(zhǔn)表

1.3.4 復(fù)配茶的制備工藝

試驗以α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率作為評價指標(biāo)，確定過篩目數(shù)，茶水比、沖泡溫度、時間和次數(shù)。①取經(jīng)干燥、粉碎后過20 目篩的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比精密稱取3 g，分別以不同的茶水比3∶100、3∶150、3∶200、3∶250、3∶300的比例加沸水浸泡15 min，確定復(fù)配茶的最佳茶水比。②取經(jīng)干燥、粉碎后的黃連花薹和紅茶粉末，分別過 0 目、10 目、20 目、30 目和60 目的藥篩，按其最佳配比，每包為3 g，按茶水比3 ∶200，沸水浸泡15 min，確定復(fù)配茶的最佳過篩目數(shù)。③取粉碎后過20 目篩的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比，每包為3 g，茶水比3 ∶200，分別在50 ℃、75 ℃、80 ℃、90 ℃和100 ℃水溫下，浸泡15 min 后，確定復(fù)配茶的最佳浸泡水溫度。④取粉碎后過20 目篩的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比，每包為3 g，茶水比3 ∶200，在80 ℃條件下分別沖泡2 min、3 min、5 min、10 min 和15 min，確定復(fù)配茶的最佳沖泡時間。⑤取最佳過篩目數(shù)的黃連花薹和紅茶粉末，按其最佳配比，每包為3 g，茶水比3 ∶200，在80 ℃條件下，分別沖泡1 次、2 次、3 次、4 次和5 次，每次各5 min，確定復(fù)配茶的最佳沖泡次數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃連花薹與紅茶配比的確定

由表4 可知，當(dāng)黃連花薹∶紅茶配比為2 ∶3 時，茶湯感官評分最高，因此確定最佳配比為2 ∶3。

表4 復(fù)配茶感官評價結(jié)果及評分表（n=50）

2.2 制備工藝的確定

由圖1（a）可知，α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率隨茶水比的變化趨勢為先升高后下降，在茶水比為3 ∶200 時，總抑制率最大，故確定最佳茶水比為3 ∶200。由圖1（b）可知，未打粉時，黃連花薹漂浮于水面，沖泡不充分，對兩種酶基本沒有抑制作用；粉碎后，總抑制率升高，且在過篩目數(shù)為20 目 時達到最高，但隨著過篩目數(shù)的繼續(xù)增加，總抑制率下降，且粉末過于細(xì)微會導(dǎo)致茶湯不澄清，因此確定20 目為最佳過篩目數(shù)。由圖1（c）可知，總抑制率隨浸泡水溫度的增加呈現(xiàn)先上升后下降趨勢，80 ℃時總抑制率達到最高，因此確定復(fù)配茶的最佳浸泡水溫度為80 ℃。由圖1（d）可知，隨著沖泡時間的延長，沖泡越來越充分，茶湯對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率也隨之增大。當(dāng)沖泡時間在10 min 時達到最大，為63.7%，但與沖泡第5 min 時的61.4%相差不大?？紤]到飲茶時的沖泡習(xí)慣與茶湯溫度，最終確定復(fù)配茶的最佳沖泡時間為5 min。由圖1（e）可知，隨著沖泡次數(shù)的增加，茶湯對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率顯著下降。當(dāng)沖泡次數(shù)增加到3 次及以上時，其對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均沒有抑制作用，因此沖泡次數(shù)最多不超過2 次。

圖1 復(fù)配茶不同制備工藝對兩種酶總抑制率的影響圖

3 結(jié)論

黃連可用于治療糖尿病，且降血糖效果顯著，其中黃連水煎液和活性成分小檗堿等均能用于治療糖尿病。黃連花薹作為黃連的干燥花序，其中的生物堿、茶多酚與茶多糖等活性物質(zhì)均具有降糖作用，可以用來輔助治療糖尿病及其并發(fā)癥。本文通過單因素試驗，以感官評分和復(fù)配茶對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的總抑制率為評價指標(biāo)，最終確定最佳工藝為黃連花薹和紅茶的配比2 ∶3，過篩目數(shù)20 目，沖泡時間 5 min，茶水比3 ∶200，沖泡溫度80 ℃，沖泡次數(shù)最多不超過2 次。