◎ 黃 成，羅汝鋒,2，羅 進,2，藍澤基，周靜儀，馬永富

（1.廣東一方制藥有限公司，廣東 佛山 528200；2.廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點實驗室，廣東 佛山 528200）

隨著時代的發(fā)展，生活節(jié)奏的加快，電子產品的普及，用眼過度、視力疲勞等眼睛健康問題在人們日常生活中越發(fā)凸顯。根據近期教育部發(fā)布的兒童青少年視力健康情況的相關數(shù)據可以發(fā)現(xiàn)，2020 年全國兒童青少年總體近視率為52.7%，且近視低齡化的趨勢越發(fā)突出，全國6 歲兒童平均近視率超過9%，局部地區(qū)高達19.1%[1]。因此，在日常生活中，健康用眼，科學護眼，顯得尤為重要。

枸杞子益精明目，富含胡蘿卜素、葉黃素、枸杞多糖、生物黃酮等生物活性成分，具有抗氧化性，對近視、視網膜損傷有一定的預防作用[2-3]。菊花平肝明目，含有豐富的黃酮類化合物、類胡蘿卜素、菊花多糖等活性成分，具有抗氧化、降血糖、保護眼部新生血管、保護視網膜光損傷等作用[4-5]。決明子清熱明目，其有效成分為橙黃決明素、大黃酚、決明內酯、大黃素蒽酮和決明子多糖等，具有保護視神經、抗炎、降血壓、降血脂等功效[6-7]。桑葉清肝明目，富含黃酮類化合物，具有清熱、涼血、明目的功效[8]。藍莓果實含有大量花色苷、原花青素等多酚類化合物，具有抗氧化、保護視力、預防心血管疾病、抗癌等作用[9-11]。

本試驗以枸杞子、菊花、決明子、桑葉為主要原料，根據中醫(yī)理論，配合茯苓、金銀花、桑椹等原料，輔以藍莓汁等物料，開發(fā)一種具有緩解視覺疲勞保健功能、酸甜可口的復合飲料，符合國內市場的需要，具有廣闊的市場前景。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

枸杞子、菊花、決明子、茯苓、桑葉、金銀花和桑椹，廣東省藥材公司中藥飲片有限公司；藍莓汁（Brix 40%±3%），福建綠泉食品有限公司；三氯蔗糖（食品級），鹽城捷康三氯蔗糖制造有限公司；無水檸檬酸（食品級），日照金禾博源生化有限公司。

1.1.2 試劑

蘆 丁 標 準 品（ 純 度91.7%，批 號100080-201811），中國食品藥品檢定研究院；氯仿（分析純），廣東廣試試劑科技有限公司；氫氧化鈉（分析純），國藥集團化學試劑有限公司；無水乙醇（分析純），天津市永大化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

液體真空濃縮煎藥機（YZN-50）：北京東華原醫(yī)療設備有限責任公司；數(shù)顯糖度計（CNT-95）：杭州陸恒生物科技有限公司；臺式低速離心機（TDL-4000C）：上海安亭科學儀器廠；管式超高溫殺菌機（HP-UHT-20）：上海浩朋機電科技有限公司；紫外可見分光光度計（UV-2450）：蘇州島津儀器有限公司；十萬分之一天平（XS105DU），梅特勒-托利多。

1.3 方法

1.3.1 藍莓枸杞菊花復合飲料工藝流程

枸杞子、菊花、決明子、茯苓、桑葉、金銀花和桑椹7 味藥材→藥材前處理→加水提取→過濾→濾液→合并濾液→濃縮→澄清→調配（加入藍莓汁、三氯蔗糖、檸檬酸、純凈水）→均質→滅菌→罐裝→成品。

1.3.2 操作要點

（1）原料要求。挑選優(yōu)質的枸杞子、菊花、決明子、茯苓、桑葉、金銀花和桑椹等藥食同源原料，無發(fā)霉、變質、長蟲，無肉眼可見外來異物，符合《中國藥典》一部相關藥材項下質量要求。

（2）藥材前處理。枸杞子、菊花、茯苓、桑葉、金銀花和桑椹揀選除去雜質；決明子，揀選除去雜質，用文火加熱炒至微鼓起、偶有開裂，有香氣，取出，放涼。

（3）澄清。藥材濃縮液過250 目篩網，冷卻至室溫后放置4 ℃冰箱中靜置沉降3 ～4 h，置離心機中，3 000 r·min-1離心20 min，再取上層澄清液，作為藥材提取原液。

（4）均質。將調配好的飲料，用均質機進行均質處理，均質壓力為25 MPa。

（5）滅菌。均質后的飲料，用管式超高溫殺菌機進行滅菌處理，滅菌溫度140 ℃，滅菌時間15 s。

1.3.3 評分標準

（1）藥材提取出膏率測定及評分標準。精密吸取藥材提取原液10.0 mL 至已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干得干浸膏，稱重W，按照干燥失重法（《中國藥典》2020 年版四部 通則0831）105 ℃干燥至恒重，計算出膏率及出膏率得分，公式如下：

式中：A為出膏率，即每100 g 藥材中含有的干浸膏質量，g/100 g；W為10 mL 藥材提取原液中干浸膏質量，g；V為藥材提取原液總體積，mL；Wt為投料藥材重量，g。

（2）藥材提取總黃酮含量測定及評分標準。①對照品溶液制備。精密吸取濃度為150 μg·mL-1的蘆丁標準溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL 和4.0 mL，分別移入10 mL 比色管中，加入30%乙醇溶液至5 mL，各加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，振搖后放置5min，加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻后放置1 h，加入 1.0 mol·L-1氫氧化鈉溶液2 mL，用30%乙醇溶液定容至刻度，以零管為空白，搖勻后用1 cm 的比色皿，在510 nm 處測定吸光度，繪制蘆丁含量（μg）與吸光度的標準曲線，得線性回歸方程Y=1.459 5X-0.034 872 8，R2=0.999 55，說明蘆丁濃度在0.007 5 ～0.060 0 mg·mL-1具有較好的線性關系。②樣品溶液制備。精密吸取樣品溶液3 mL，定容至50 mL，用氯仿萃取脫脂，收集下層水溶液定容至50 mL，取2 mL，用裝有聚酰胺樹脂粉末的柱子吸附，然后用70%的乙醇溶液洗脫，收集10 mL 溶液，然后用70%乙醇定容至25 mL，其他步驟同上，計算總黃酮含量、總黃酮提取率及總黃酮提取率得分，公式如下：

式中：X為樣品總黃酮含量，g/100 g（mL）；m1為依據標準曲線計算出被測液中黃酮質量，μg；m為試樣的質量或體積，g 或mL；V1為待測液分取的體積，mL；V2為待測液的總體積，mL。

（3）藥材提取原液感官評價標準如表1，提取感官得分計算公式如下：

表1 藥材提取原液感官評分表

（4）藥材提取正交試驗綜合評分標準。綜合評分=出膏率得分+提取感官得分+總黃酮提取率得分。

1.4 藥材提取條件確定

1.4.1 藥材提取單因素試驗

固定提取溫度100 ℃，提取時間1.5 h，料水比分別選擇1 ∶4、1 ∶6、1 ∶8、1 ∶10 和1 ∶12（g ∶mL），考察料水比對出膏率和總黃酮提取率的影響；固定提取溫度100 ℃，料水比1 ∶10（g ∶mL），提取時間分別選擇0.5 h，1.0 h、1.5 h、2.0 h 和2.5 h，考察提取時間對出膏率和總黃酮提取率的影響；固定提取時間1.5 h，料水比1 ∶10（g ∶mL），提取溫度分別選擇60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃和100 ℃，考察提取溫度對出膏率和總黃酮提取率的影響。

1.4.2 藥材提取條件正交試驗

在單因素試驗的基礎上，選用料水比、提取時間、提取溫度3個因素，3種不同水平，進行L9(34)正交試驗，藥材提取工藝條件正交試驗因素水平見表2。

表2 藥材提取正交試驗設計表

1.5 復合植物飲料的配制

取上述藥材提取原液，輔助藍莓濃縮汁、三氯蔗糖、檸檬酸等原輔料，復合調配飲料。

2 結果與分析

2.1 藥材提取單因素試驗結果與分析

2.1.1 料水比對出膏率和總黃酮提取率的影響

如圖1、圖2 結果所示，隨著料水比的不斷增加，藥材提取的出膏率和總黃酮提取率也明顯增加，當料水比達到1 ∶12（g ∶mL）后，藥材提取的出膏率和總黃酮提取率增加幅度趨于平緩，其原因可能是隨著料水比的增加，使內外滲透壓趨近穩(wěn)定，可溶性成分的傳質擴散趨于穩(wěn)定狀態(tài)，隨著提取溶劑的增加，可溶性成分溶出量較少。因此，結合成本考慮，料水比選擇1 ∶10 ～1 ∶14（g ∶mL）進行下一步工藝優(yōu)化。

圖1 料水比對出膏率的影響圖

2.1.2 提取時間對出膏率和總黃酮提取率的影響

如圖3、圖4 結果所示，提取時間在0.5 ～2.0 h 時，隨著提取時間的增加，藥材提取出膏率和總黃酮提取率均快速增加，當提取時間大于2.0 h 后，藥材提取出膏率的增加幅度趨于平緩，總黃酮提取率則有所下降，原因可能是隨著提取時間的增加，溶劑中的可溶性成分溶出已達相對平衡狀態(tài)，而提取時間過長，部分熱敏性的黃酮類化合物水解，從而降低了總黃酮提取率。因此，提取時間選擇1.5 ～2.5 h 進行下一步工藝優(yōu)化。

2.1.3 提取溫度對出膏率和總黃酮提取率的影響

如圖5、圖6 結果所示，隨著溫度的提高，藥材提取的出膏率和總黃酮的提取率均快速增加，說明提取溫度的升高，有利于藥材提取出膏率和總黃酮提取率的提升。

圖6 提取溫度對總黃酮提取率的影響圖

但是王蔚新等[12]研究表明，桑葉及金銀花等藥材在較高的溫度下，容易產生苦味成分，影響產品的感官質量。因此，選擇提取溫度80 ～100 ℃進行下一步優(yōu)化實驗。

2.2 藥材提取正交試驗結果與分析

由表3 可知，影響藥材提取綜合評分的各因素主次順序為A＞B＞C，最優(yōu)提取組合為A3B2C3，即料水比為1 ∶14（g ∶mL），提取時間為2.0 h，提取溫度100 ℃。由表4 方差分析結果可知，料水比對藥材提取綜合得分有極顯著的影響（P＜0.01），提取溫度和提取時間對藥材提取綜合得分則無顯著的影響。

表3 藥材提取正交試驗結果表

表4 藥材提取正交試驗結果方差分析表

2.3 提取正交試驗結果驗證

按正交試驗篩選的工藝條件進行3 次確認試驗，即料水比1 ∶14（g ∶mL），提取時間2.0 h，提取溫度100 ℃。在該提取條件下，藥材提取綜合得分為98.75±0.31 分，與原正交試驗結果相比相差不大，說明該工藝穩(wěn)定、重復性較好。

2.4 復合植物飲品結果與分析

通過對藥材提取原液、藍莓濃縮汁、三氯蔗糖、檸檬酸和純凈水等原輔料進行復配調試，篩選出口感較佳的配比為藥材提取原液添加量13.3%，藍莓濃縮汁添加量為0.50%，三氯蔗糖添加量為0.013%，檸檬酸添加量為0.05%，純凈水添加量86.137%，按照此工藝和配方做出來的復合飲料呈淺橘紅色，澄清透亮，具有藍莓和菊花的香味，酸甜可口。

3 結論

通過對枸杞子、菊花、決明子、茯苓、桑葉、金銀花和桑椹7 味藥材進行提取單因素試驗和正交試驗，對藥材提取原液的提取出膏率、感官評分以及總黃酮的提取率進行綜合評分，得到最佳工藝的藥材提取工藝為料水比1 ∶14（g ∶mL）、提取時間2.0 h、 提取溫度100 ℃。通過對藥材提取原液、藍莓濃縮汁、三氯蔗糖、檸檬酸和純凈水等原輔料進行復配調試，篩選出口感較佳的配比為藥材提取原液添加量13.3%，藍莓濃縮汁添加量0.50%，三氯蔗糖添加量0.013%，檸檬酸添加量0.05%，純凈水添加量86.137%，按照此工藝和配方做出來的復合飲料呈淺橘紅色，澄清透亮，具有藍莓和菊花的香味，酸甜可口。