李子鍵 謝蘇杰 張佳怡 胡守一 仵敏娟

（海軍軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，1 六大隊(duì)16隊(duì)，2 三大隊(duì)8隊(duì)，3 三大隊(duì)7隊(duì)，4 組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室，上海 200433）

隨著人們生活水平的提高以及老齡化進(jìn)程的加快，我國糖尿病的發(fā)病率逐年上升。由于糖尿病患者創(chuàng)面愈合能力嚴(yán)重受損，皮膚創(chuàng)面的損傷可進(jìn)一步發(fā)展為糖尿病潰瘍，導(dǎo)致住院率、截肢率、致死率增加，這給國家、社會(huì)的健康發(fā)展帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)負(fù)擔(dān)。近年來，人們對(duì)miRNAs在胚胎發(fā)育、創(chuàng)面修復(fù)、腫瘤發(fā)生和疾病調(diào)節(jié)中的重要作用有了新的發(fā)現(xiàn)，一些特定miRNAs的靶點(diǎn)以及作用機(jī)制可能成為糖尿病創(chuàng)面治療與愈合的關(guān)鍵因素，為糖尿病患者皮膚創(chuàng)面的預(yù)后提出新的方案。

1 miRNA在皮膚發(fā)育中的作用

皮膚的形態(tài)發(fā)生是一個(gè)漫長且機(jī)制復(fù)雜的過程，受到多種不同信號(hào)通路及特定轉(zhuǎn)錄因子、生長因子的調(diào)節(jié)?，F(xiàn)有研究已經(jīng)證實(shí)，miRNA調(diào)控在這一過程中發(fā)揮了重要作用，miRNA異常會(huì)對(duì)正常的皮膚形態(tài)發(fā)生產(chǎn)生影響[1-3]。

早期研究miRNA在皮膚發(fā)育中的作用是通過特殊手段靶向降低或阻止miRNA生物合成所需要的關(guān)鍵酶，并對(duì)比前后皮膚發(fā)育的不同程度來推測(cè)某種miRNA的調(diào)節(jié)作用。組織學(xué)檢查顯示，胚胎發(fā)育晚期條件性敲除Dicer的小鼠（該種小鼠可以更好地研究miRNA功能[4]）皮膚毛囊發(fā)育不全及錯(cuò)位，細(xì)胞凋亡明顯，發(fā)育過程中毛囊非內(nèi)陷性生長，反而向表皮外翻、退化，表皮層特化形成囊狀結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致小鼠表皮屏障功能減弱或喪失，小鼠脫水以及早期死亡。角蛋白15和CD34屬于干細(xì)胞的標(biāo)志物，實(shí)驗(yàn)過程中它們的缺失，提示Dicer的小鼠毛囊發(fā)育缺陷極大可能是毛囊干細(xì)胞的早期缺失所致。該實(shí)驗(yàn)一定程度上證實(shí)部分miRNAs僅作用于毛囊干細(xì)胞，而不是表皮細(xì)胞，因?yàn)镈icer的小鼠表皮未受到明顯影響[4]。毛囊是表皮細(xì)胞下陷形成的袋樣結(jié)構(gòu)，位于真皮和皮下組織中，可分為毛囊漏斗部、毛囊峽部和毛囊下部3部分。通過miRNA的表達(dá)譜研究可以證實(shí)調(diào)控表皮和毛囊發(fā)育的miRNA是不同的，miRNA在特定時(shí)期、特定組織中才會(huì)表達(dá)。在表皮發(fā)育早期表達(dá)的miRNA有miR-200家族（miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429）和miR-19/miR-20家 族（miR-19b、miR-20、miR-17-5p、miR-93），而miR-199家族成員只在毛囊發(fā)生過程中表達(dá)[5]。毛囊細(xì)胞中miRNA的缺失會(huì)減緩細(xì)胞增殖，并促進(jìn)凋亡。相比之下，表皮細(xì)胞中miRNAs的生成缺失并不會(huì)對(duì)其增殖和凋亡有顯著影響。這些都證實(shí)了miRNAs在皮膚形態(tài)發(fā)生、毛囊干細(xì)胞的穩(wěn)定、表皮細(xì)胞增殖和凋亡中具有重要的作用。

2 miRNA控制表皮內(nèi)穩(wěn)態(tài)

表皮的結(jié)構(gòu)從內(nèi)到外依次為基底層、棘層、顆粒層、透明層和角化層。顆粒層、棘層與基底層又合稱為生發(fā)層。生理情況下，基底層細(xì)胞不斷分裂增殖，角化層細(xì)胞不斷更新脫落，兩者的生長與更新保持著動(dòng)態(tài)平衡，其中miRNA可通過調(diào)控表皮角化層細(xì)胞的分化階段從而打破這種平衡。miR-203是一條與皮膚生長發(fā)育有關(guān)的miRNA， 它在角化細(xì)胞中大量表達(dá)[6-9]。miR-203能夠直接在表皮分化和分層的調(diào)控中靶向作用于p63轉(zhuǎn)錄因子，通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在強(qiáng)增殖能力的基底層細(xì)胞中高表達(dá)[10]。miR-203可以靶向作用于Delta Np63[6， 8， 11]，抑制p63蛋白的轉(zhuǎn)錄翻譯， 導(dǎo)致基底層細(xì)胞喪失增生能力， 轉(zhuǎn)換為末端分化狀態(tài)。因此，可以認(rèn)為部分miRNAs是一種作用于p63的分子開關(guān)，能夠通過抑制p63的促增殖能力和細(xì)胞周期來調(diào)節(jié)基底層細(xì)胞的增殖和棘層細(xì)胞的分化狀態(tài)[8， 9]。不僅如此，p63還可以直接調(diào)控miR-34家族基因的表達(dá)。靶向敲除p63后，角化細(xì)胞中miR-34a和miR-34c的表達(dá)水平顯著上調(diào)，該家族基因抑制細(xì)胞周期調(diào)控因子-細(xì)胞周期蛋白D1和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4的活性，隨之引起細(xì)胞G1期停滯[12]。同時(shí)一些miRNAs還維持著表皮穩(wěn)態(tài)和影響著黑素細(xì)胞的色素沉著，此類效應(yīng)可由miRNAs影響不同的信號(hào)通路和調(diào)控因子來實(shí)現(xiàn)。正常小鼠的表皮細(xì)胞和毛囊上皮細(xì)胞中表達(dá)miR-21。Ahmed研究顯示并證實(shí)在HaCaT細(xì)胞中，miR-21能夠阻斷骨形態(tài)發(fā)生蛋白4（bone morphogenetic protein 4，BMP4）對(duì)細(xì)胞增殖和遷移的抑制作用[13]。綜上所述，miRNA通過上調(diào)或阻遏特定靶基因的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，并調(diào)節(jié)相關(guān)調(diào)控因子的活性來維持表皮的穩(wěn)態(tài)，其中多種miRNAs與細(xì)胞內(nèi)多種不同的轉(zhuǎn)錄因子、調(diào)節(jié)因子構(gòu)成了復(fù)雜且精密的功能網(wǎng)絡(luò)，使得表皮發(fā)生中的各個(gè)階段能夠有條不紊且精確實(shí)現(xiàn)。

3 miRNA與皮膚創(chuàng)面愈合

由于外力因素等損傷因子造成皮膚的缺失損傷后，局部組織能夠通過清理壞死細(xì)胞、凋亡損傷細(xì)胞，炎性物質(zhì)的定向趨化作用以及纖維組織的增生等一系列病理生理過程對(duì)損傷組織進(jìn)行修復(fù)，炎性階段、增殖階段與重塑階段中miRNA的表達(dá)各不相同，影響與作用機(jī)制也相差甚遠(yuǎn)，miRNA的異常表達(dá)還可能引起創(chuàng)面畸形愈合[14]。

3.1 創(chuàng)面炎性階段miRNA的作用

創(chuàng)面愈合釋放的炎性介質(zhì)能夠誘導(dǎo)特異性的miRNA表達(dá)，而miRNA又能夠沉默大量促炎因子，兩者存在著一個(gè)互相調(diào)控的機(jī)制。創(chuàng)面炎癥及免疫應(yīng)答中miR-146、miR-155[15]、miR-21[16]及miR-125b[17]發(fā)揮了不同的作用，這些miRNAs又能被促炎因子如Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs）和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α），誘導(dǎo)其表達(dá)量增加。miR-21是一種可受炎癥誘導(dǎo)的miRNA，經(jīng)轉(zhuǎn)錄后能夠抑制多個(gè)靶基因。炎癥期間TLR-4的表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)miR-125b表達(dá)水平，miR-125b又通過直接結(jié)合TNF-α的3'UTR區(qū)，導(dǎo)致TNF-α表達(dá)沉默。在糖尿病小鼠傷口病變實(shí)驗(yàn)中[18]，顯示糖尿病小鼠真皮傷口中的miRNA-497表達(dá)顯著降低，同時(shí)在糖尿病小鼠的全層真皮傷口周圍皮內(nèi)注射miRNA-497能夠有效地加速傷口閉合。此外，miRNA-497體外實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中被證明可以降低促炎因子白細(xì)胞介素IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)。

3.2 創(chuàng)面增殖階段miRNA的作用

內(nèi)皮細(xì)胞在增殖階段的增生與遷移以及毛細(xì)血管形成是血管化的早期表現(xiàn)，組織再生的關(guān)鍵是創(chuàng)面中有新生的毛細(xì)血管形成，如果創(chuàng)面血管生成被抑制，將會(huì)嚴(yán)重影響創(chuàng)面愈合。研究顯示內(nèi)皮細(xì)胞毛細(xì)血管發(fā)芽、遷移和血管生成的抑制與Dicer、Drosha的敲除相關(guān)，這間接提示了miRNA參與血管生成[19]。創(chuàng)面增殖階段miR-17-92的表達(dá)水平往往顯著上調(diào)，其靶基因血小板反應(yīng)蛋白1（thrombospondin-1，TSP-1）及結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）能夠調(diào)控并抑制血管的生成，而miR-17-92通過抑制TSP-1及CTGF，從而干擾其抑制血管生成的過程，促進(jìn)血管再生[20]。部分研究表明[21]，miR-126的調(diào)控作用能一定程度上改變血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）的敏感性，例如敲除miR-126后的斑馬魚細(xì)胞胚胎發(fā)育過程中血管內(nèi)皮管壁完整性減弱，導(dǎo)致出血發(fā)生。

表皮細(xì)胞再生在增殖階段中可表現(xiàn)為創(chuàng)面邊緣角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移和增殖[22]。miR-205通過抑制SH2結(jié)構(gòu)域的Ⅱ型5'肌醇磷酸酶2（SH2 domain containing 5'-inosi-tol phosphatase-2，SHIP 2）的轉(zhuǎn)錄從而促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移，增強(qiáng)蛋白激酶B（AKT）信號(hào)，從而有利于上皮細(xì)胞的穩(wěn)定及創(chuàng)面的愈合；抑制miR-205后，由于創(chuàng)面的肌動(dòng)蛋白減少，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附力增加，使得創(chuàng)面愈合速度減緩[23]。

3.3 創(chuàng)面重塑階段miRNA的作用

重塑階段的纖維組織再生是一個(gè)重要特征。部分miRNAs在纖維增生性瘢痕疙瘩形成中發(fā)揮了重要作用。哺乳動(dòng)物妊娠早期階段胎兒皮膚屬于無痕愈合[24]，而在后期改變?yōu)轳：塾媳硇?，通過對(duì)比顯示在兩者之間miRNA的表達(dá)存在明顯差異，尤其是在妊娠后期miR-29b、miR-29c和 miR-192的表達(dá)水平顯著升高，間接提示其參與了瘢痕愈合[25]。研究表明miR-29b、miR-29c通過抑制無痕愈合信號(hào)通路的相關(guān)蛋白質(zhì)導(dǎo)致皮膚瘢痕修復(fù)。另有研究證實(shí)[26]，正常成纖維細(xì)胞與瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的 miRNA 表達(dá)譜中，對(duì)比顯示一些表達(dá)水平異常的miRNA，特別是瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中miR-196a下調(diào)最明顯，miR-196a的表達(dá)量與Ⅰ、Ⅲ型膠原水平呈負(fù)相關(guān)[27]。傷口愈合研究中表明[28]，miR-31在傷口邊緣處的角質(zhì)形成細(xì)胞中上調(diào)，已經(jīng)顯示轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和TGF-β2在傷口中均被上調(diào)，并促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞遷移（圖1）。TGF-β1和TGF-β2與其相應(yīng)受體的結(jié)合導(dǎo)致下游SMAD蛋白的激活，進(jìn)而誘導(dǎo)TGF-β靶基因的表達(dá)。上皮膜蛋白1（ epithelial membrane protein 1，EMP-1）一定程度上抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和遷移。TGF-β2調(diào)控miR-31表達(dá)，EMP-1直接靶向miR-31。EMP-1的表達(dá)沉默導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞中miR-31的表達(dá)水平降低，這表明炎癥過程中高水平的EMP-1可能觸發(fā)miR-31高表達(dá)。

圖1 EMP-1作為miR-31的治療性傷口愈合靶標(biāo)過程

創(chuàng)面愈合的調(diào)控過程涉及多個(gè) miRNAs，本文中包含的或未能詳述的 miRNA 及其靶基因或靶細(xì)胞見表 1。

表1 相關(guān)miRNAs在創(chuàng)面愈合中的作用靶點(diǎn)

3.4 miRNAs促進(jìn)或抑制創(chuàng)面愈合的新進(jìn)展

Saleh等[29]的研究表明，miR-223的上調(diào)顯示巨噬細(xì)胞極化趨向于抗炎表型（M2），這可能有助于加速傷口愈合，并以此為依據(jù)開發(fā)了含有miR-223-5p模擬物（miR-223*）透明質(zhì)酸納米顆粒的粘合水凝膠，從而控制傷口愈合過程中組織巨噬細(xì)胞的極化，并進(jìn)一步使傷口部位皮膚的血管均勻化，加速傷口愈合。另有研究顯示[30]，微囊泡（microvesicle，MV）最近已成為將遺傳物質(zhì)輸送到靶細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞通訊功能的重要介質(zhì)，表達(dá)miR-21模擬物HEKa-MV的直接遞送顯著促進(jìn)了糖尿病大鼠皮膚傷口的愈合。MV miR-21促進(jìn)成纖維細(xì)胞遷移，分化，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞促血管生成的過程并介導(dǎo)促炎反應(yīng)。同時(shí)，MV miR-21可能靶向成纖維細(xì)胞中發(fā)揮特定基本效應(yīng)的mRNA，例如基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）家族的MMP-1和MMP-3，組織金屬蛋白酶抑制因子（tissue inhibitors of metalloproteinase）家族的TIMP3和TIMP4，可增加MMPs的表達(dá)和酶活性。此外，MV miR-21調(diào)節(jié)ɑ-平滑肌肌動(dòng)蛋白（ɑ-smooth muscle actin，ɑ-SMA）和N-鈣黏蛋白（N-cadherin）表達(dá)誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并上調(diào)了IL-6和IL-8表達(dá)及分泌，從而增強(qiáng)免疫反應(yīng)；MV miR-21在蛋白水平下調(diào)磷脂酶和張力蛋白同源物 （phosphate and tension homology deleted on chromsome ten）和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制基因（reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motif，RECK），并激活絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK） /細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）信號(hào)級(jí)聯(lián)，從而促進(jìn)成纖維細(xì)胞功能的發(fā)揮。

4 miRNAs在糖尿病創(chuàng)面愈合中的作用

4.1 糖尿病創(chuàng)面的發(fā)生及愈合機(jī)制

糖尿病患者的創(chuàng)面與正常人的創(chuàng)面相比，糖尿病患者創(chuàng)面通常伴發(fā)周圍神經(jīng)及血管病變和感染。長期控制不良的高血糖患者還會(huì)引起神經(jīng)纖維損傷，導(dǎo)致不同程度的感覺減退。糖尿病創(chuàng)面本身的愈合時(shí)間較長，再加上患者不同程度感覺減退，導(dǎo)致皮膚受損概率增加，這延長了糖尿病患者創(chuàng)面愈合的時(shí)間。同時(shí)，持續(xù)的高血糖狀態(tài)還會(huì)導(dǎo)致患者血管異常收縮、平滑肌異常、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙以及血漿高凝狀態(tài)，極大程度提高了閉塞性動(dòng)脈疾病的發(fā)生率，導(dǎo)致糖尿病潰瘍形成，局部組織缺血缺氧又進(jìn)一步加重潰瘍。

4.2 促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面愈合的miRNAs

在糖尿病創(chuàng)面愈合中，部分miRNAs通過調(diào)控某些基因表達(dá)，激活或抑制特定的信號(hào)通路來發(fā)揮作用。部分研究證明調(diào)控止血期的miRNAs可能與血栓形成的幾個(gè)miRNAs有關(guān)[31]。例如miR-96可與囊泡相關(guān)膜蛋白8（vesicle-associated membrane proteins 8，VAMP8）的3'UTR 區(qū)結(jié)合，發(fā)揮對(duì)血小板反應(yīng)性的調(diào)節(jié)作用；miR-223與人嘌呤能（P2Y12）受體miRNA的3'UTR結(jié)合，調(diào)節(jié)血小板生成[32]。炎癥期，Li等[33]的研究顯示miR-21可能通過程序性死亡因子4（programmed cell death factor4， PCDF 4）調(diào)節(jié)核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）的表達(dá)，在糖尿病潰瘍治療中起抗炎作用。Xu等[34]的研究顯示，miR-146a在糖尿病小鼠傷口中的表達(dá)明顯下調(diào)，其表達(dá)降低可能一定程度上促進(jìn)了與炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，導(dǎo)致糖尿病小鼠傷口難以愈合。Shanmugam等[35]研究證實(shí)miR-16能抑制環(huán)氧合酶-2的表達(dá)，顯示出全身抗炎作用。Li等[36]研究表明miR-132在炎癥期表達(dá)上調(diào)，在增殖期達(dá)到高峰，通過增加信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3（signal transducer and activator of transcription3，STAT3）和ERK通路的活性，促進(jìn)了角質(zhì)形成細(xì)胞的生長。在糖尿病創(chuàng)面中，miR-26a表達(dá)水平顯著提高，miR-26a通過局部提高表達(dá)水平從而誘導(dǎo)糖尿病小鼠的血管生成，促進(jìn)創(chuàng)面愈合，參與血管再生反應(yīng)及早期內(nèi)皮功能障礙的修復(fù)[37]。

4.3 抑制糖尿病創(chuàng)面愈合的miRNAs

糖尿病患者的部分miRNAs通過引起血管內(nèi)皮功能障礙、維持炎癥狀態(tài)以及抑制角質(zhì)形成細(xì)胞遷移和再上皮化，抑制了愈合，造成創(chuàng)面愈合困難。糖尿病使得機(jī)體處于慢性低度炎癥狀態(tài)，并延長炎癥反應(yīng)，這對(duì)傷口閉合是不利的。Ramirez等[38]的研究顯示糖尿病潰瘍炎癥期中的金黃色葡萄球菌具有抑制傷口閉合和誘導(dǎo)miR-15b-5p上調(diào)的特點(diǎn)，進(jìn)而抑制下游靶基因IκB激酶β（inhibitor kappa B kinase β，IκBKβ），導(dǎo)致miR-15b-5p在創(chuàng)面處持續(xù)表達(dá)，炎癥狀態(tài)得以持續(xù)。Dangwal等[39]研究顯示，Ⅱ型糖尿病患者創(chuàng)面中，miR-191與C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）和促炎癥細(xì)胞因子增加有關(guān)，會(huì)延緩創(chuàng)面組織修復(fù)。糖尿病傷口中成纖維細(xì)胞增殖減少，細(xì)胞凋亡情況明顯，纖維細(xì)胞遷移能力下降，角質(zhì)形成細(xì)胞增殖明顯但分化程度降低。Pizzino等[40]將 抗miRNAs、抗miR-15b、抗miR-200b或 抗miR-15b/200b，應(yīng)用于糖尿病小鼠皮膚傷口邊緣，顯示抑制miR-15b和 miR-200b可改善糖尿病傷口愈合。Lucas等[41]的研究表明糖尿病創(chuàng)面與急性創(chuàng)面比較，在慢性傷口中miR-92a的表達(dá)水平有明顯的上調(diào)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)抑制miR-92a的表達(dá)水平能夠促進(jìn)糖尿病小鼠血管生成和創(chuàng)面愈合。綜上所述，導(dǎo)致糖尿病創(chuàng)面愈合延緩與miRNAs表達(dá)水平失調(diào)有密切關(guān)系。

4.4 miRNAs在糖尿病足中的治療前景

糖尿病足是糖尿病患者的一種神經(jīng)病變，因末稍神經(jīng)感覺障礙及植物神經(jīng)的損害，導(dǎo)致下肢血管病變的一種疾病。糖尿病患者常因周圍小動(dòng)脈閉塞或細(xì)菌感染導(dǎo)致足部疼痛、潰瘍、壞疽。相關(guān)研究表明，一些miRNAs的調(diào)節(jié)失控，參與了糖尿病不同病理生理階段的傷口愈合，如圖2[42]所示。例如，糖尿病患者中miR-27b[43]過表達(dá)使細(xì)胞增殖增加，通過直接靶向調(diào)控TSP1、TSP2、導(dǎo)向蛋白6A（semaphorin 6A）和p66shc改善傷口愈合。miR-99[44]在傷口中表達(dá)量減少，信號(hào)通路PI3K/AKT受到抑制，角質(zhì)細(xì)胞的形成、遷移和增殖減少。糖尿病小鼠的實(shí)驗(yàn)顯示miR-155[45]是一種功能性調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的RNA，其表達(dá)的降低能夠減少炎癥反應(yīng)，促進(jìn)傷口愈合。此外，miRNA-26a[46]的表達(dá)受到抑制時(shí)，通過調(diào)控相關(guān)因子的表達(dá)水平來誘導(dǎo)血管生成與肉芽組織增生，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。

圖2 miRNAs對(duì)糖尿病足創(chuàng)面愈合的調(diào)控

5 miRNAs遞送系統(tǒng)的發(fā)展及促進(jìn)皮膚再生及愈合的可行性

目前，已經(jīng)有了多種基因傳遞系統(tǒng)。病毒理論上是最有效的載體，然而病毒載體通常具有突變、毒性、遞送量有限的不足。因而發(fā)明安全高效的miRNA遞送系統(tǒng)具有重要意義，非病毒性miRNA遞送系統(tǒng)逐漸成為研究新焦點(diǎn)，其毒性和免疫原性較低，細(xì)胞攝取量大，水溶性強(qiáng)。一般而言，理想的miRNA載體應(yīng)當(dāng)充分考慮到miRNA分子本身帶有負(fù)電荷，并能在血液循環(huán)中保持穩(wěn)定，能夠攜帶miRNA到達(dá)靶點(diǎn)，促進(jìn)細(xì)胞攝取，避免溶酶體降解。非病毒性miRNA的傳遞方式可分為復(fù)合、結(jié)合和封裝[42]。Wu等[47]通過使用陽離子脂質(zhì)復(fù)合物系統(tǒng)傳遞miRNA，獲得了更高的轉(zhuǎn)染效率。金納米粒子作為一種低毒的納米材料成為目前備受關(guān)注的新型miRNA載體，多次實(shí)驗(yàn)證明金納米粒子是非細(xì)胞毒性和無免疫原性的物質(zhì)[48]。金納米粒子在遞送系統(tǒng)中首先通過絡(luò)合作用將miRNA包被，結(jié)果表明其能使細(xì)胞通過高效的內(nèi)吞作用釋放復(fù)合物從而使miRNA在靶位點(diǎn)及時(shí)表達(dá)[49]。miRNAs在皮膚發(fā)育及愈合中的作用日益凸顯，了解其作用機(jī)制并通過目前研究的miRNAs遞送系統(tǒng)高效、精確地到達(dá)靶細(xì)胞，對(duì)進(jìn)行治療具有重要的臨床意義。另外，外泌體是細(xì)胞自分泌和旁分泌信息的重要載體。外泌體能夠與靶細(xì)胞融合，并將封裝的物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或RNA）運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞，以介導(dǎo)細(xì)胞之間的信息交換，并調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的生理和病理功能。有研究表明[50]，miRNA-221-3p是內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cell，EPC）衍生的外泌體中高表達(dá)的miRNA之一，其增加了血管生成相關(guān)因子VEGF，CD31和細(xì)胞增殖標(biāo)記Ki67的蛋白表達(dá)水平，生物信息學(xué)分析表明miRNA-221-3p可能與糖尿病并發(fā)癥、細(xì)胞周期和p53信號(hào)通路中的AGE-RAGE信號(hào)通路有關(guān)。

6 展望

研究表明，一些特定miRNAs的靶點(diǎn)以及作用機(jī)制成為糖尿病創(chuàng)面治療與愈合的關(guān)鍵因素。通過RT-PCR等簡便易行并具有高度靈敏性的方法可以檢測(cè)miRNAs的表達(dá)，從而監(jiān)測(cè)糖尿病創(chuàng)面進(jìn)展及評(píng)判療效。未來可以將miRNAs作為切入點(diǎn)對(duì)糖尿病患者的潰瘍創(chuàng)面治療提供一條新思路。當(dāng)然，糖尿病潰瘍愈合中與miRNAs調(diào)控有關(guān)的研究目前仍然存在著局限性，目前得出的大部分理論成果主要來自小鼠模型，但是小鼠和人的傷口愈合方式并不相同，小鼠皮膚通過加強(qiáng)收縮加快愈合，人的傷口則通過肉芽組織的形成來愈合。并且人與小鼠參與創(chuàng)面愈合的miRNAs極大可能是不同的[51]。誠然，miRNAs對(duì)于創(chuàng)面愈合的機(jī)制尚未清楚，但相信隨著研究的深入，未來將會(huì)有更多的治療方法應(yīng)用于臨床，使糖尿病創(chuàng)面愈合得以解決。