◎ 楊 穎

（建德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，浙江 杭州 311600）

糕點(diǎn)貯存過(guò)程中極易受到空氣中水、氧氣及微生物等因素的影響而變質(zhì)，為滿足當(dāng)代人的飲食需求，改善其口感、品質(zhì)和延長(zhǎng)貯存時(shí)效，在糕點(diǎn)的生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)加入化學(xué)合成防腐劑[1-2]。國(guó)家對(duì)防腐劑的使用范圍和使用量有著嚴(yán)格的管控。脫氫乙酸對(duì)微生物（細(xì)菌、酵母菌、霉菌）具有超強(qiáng)的抑制作用，糕點(diǎn)類只需添加少量的脫氫乙酸就可起到防腐效果[3]。脫氫乙酸毒性較低，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍和使用量使用安全可靠。根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）[4]規(guī)定，糕點(diǎn)中添加脫氫乙酸的質(zhì)量濃度不得超過(guò)0.5 g·kg-1。但通過(guò)匯總近年來(lái)全國(guó)各地食品安全監(jiān)督抽檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脫氫乙酸及其鈉鹽超限量、超范圍使用的情況屢有發(fā)生。本文結(jié)合建德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心實(shí)際情況，建立兩種色譜柱的氣相色譜法檢測(cè)糕點(diǎn)產(chǎn)品中脫氫乙酸含量的實(shí)驗(yàn)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

10種糕點(diǎn)（綠豆糕、牛奶味吐司、麥香吐司、蛋黃酥、綠豆糕、麻薯、蔓越莓曲奇、空氣蛋糕、皇后吐司和榴蓮酥）均為當(dāng)?shù)厥惺凼称?；脫氫乙酸?biāo)準(zhǔn)品（99.9%，壇墨質(zhì)檢）；乙酸乙酯（HPLC級(jí)，默克公司）；正己烷（HPLC級(jí)，默克公司）；鹽酸（分析純，華東醫(yī)藥股份有限公司）；硫酸鋅（分析純，泰坦）；氫氧化鈉（分析純，西隴化工股份有限公司）；水由Millipore超純水儀制備。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜儀（島津GC-2030，配有FID檢測(cè)器）；十萬(wàn)分之一天平（BT125D，賽多利斯儀器有限公司）；超聲儀（KQ-500型，昆山市超聲儀器有限公司）；旋渦混合器（WH-861，華利達(dá)）；高速臺(tái)式離心機(jī)（TGL-16G，上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取0.01000 g脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10 mL玻璃容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋并定容至刻度，得到質(zhì)量濃度為1.0 mg·mL-1的單標(biāo)儲(chǔ)備液，低溫保存。分別用移液槍移取脫氫乙酸儲(chǔ)備液0.01 mL、0.10 mL、0.50 mL、 1.00 mL和2.00 mL于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋并定容，配制成質(zhì)量濃度為1.00 μg·mL-1、 10.00 μg·mL-1、50.00 μg·mL-1、100.00 μg·mL-1和200.00 μg·mL-1標(biāo)液。

1.3.2 樣品處理

取250 g樣品（含餡料）用高速組織機(jī)攪碎，備用。分別取樣約5 g置于50 mL離心管中，加水15 mL，溶解混勻后加硫酸鋅溶液（120 g·L-1）2.5 mL，沉淀蛋白質(zhì)，用20 g·L-1NaOH溶 液 調(diào)pH至7.5，超 聲15 min， 加水稀釋定容至25 mL，渦旋1 min。5000 r·min-1高速離心6 min，取上清液于干凈離心管中，加正己烷 5 mL，渦旋去除油脂，5000 r·min-1高速離心6 min。取下層水相10 mL，加1 mL 1∶1的鹽酸水溶液酸化后，定量加入5.0 mL乙酸乙酯，渦旋提取1 min，放置分層若有需要可離心，取上層有機(jī)相上機(jī)檢測(cè)[5]。

1.3.3 氣相色譜條件

（1）SH-RTx-5柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）。載 氣：N2；控制模式：壓力；色譜柱流量：1.32 mL·min-1；SPL溫度：230 ℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比10∶1；進(jìn)樣量：1 μL；升溫程序：初溫100 ℃，以10 ℃·min-1升至240 ℃保持2 min；檢測(cè)器溫度：300 ℃；尾吹氣為氮?dú)?，尾吹氣流量?4 mL·min-1；氫氣流量：32 mL·min-1；空氣流量200 mL·min-1；外標(biāo)法定量。

（2）DB-WAX柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）。色譜柱流量：0.96 mL·min-1；SPL溫度：240 ℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比5∶1，進(jìn)樣量1 μL；升溫程序：初溫150 ℃，以20 ℃·min-1升至250 ℃保持 7 min；其他條件與SH-RTx-5柱相同。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種極性色譜柱分析

強(qiáng)極性的DB-WAX色譜柱和弱極性的SH-RTx-5色譜柱都能使組分及目標(biāo)峰較好地分離，且保證峰形良好，色譜圖分別見(jiàn)圖1和圖2。脫氫乙酸的極性較強(qiáng)，在弱極性柱子上出峰較快，在強(qiáng)極性柱子上保留時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，本實(shí)驗(yàn)采用了較高的初始溫度和較快的升溫程序，使脫氫乙酸通過(guò)強(qiáng)極性色譜柱后也在 10 min內(nèi)出峰。氣相色譜法測(cè)定脫氫乙酸最突出的問(wèn)題是脫氫乙酸峰型拖尾，影響定性和定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。其主要原因是極性或活性化合物易被樣品流經(jīng)途徑中的活性位點(diǎn)吸附而呈現(xiàn)出拖尾，這類樣品分析要求系統(tǒng)具有良好的惰性。①需要保持系統(tǒng)（主要是進(jìn)樣口和色譜柱）的潔凈度，使用干凈的襯管和分流平板；對(duì)于嚴(yán)重污染的色譜柱，可將進(jìn)樣口端截去一段，污染嚴(yán)重時(shí)可截去較長(zhǎng)的一段或用溶劑清洗色譜柱（須是交聯(lián)鍵合固定相）。②應(yīng)選用惰性好的耗件，如去活的襯管（不用或慎用玻璃棉）和惰性好的低流失色譜柱。

圖1 DB-WAX色譜柱分離的脫氫乙酸色譜圖

圖2 SH-RTx-5色譜柱分離的脫氫乙酸色譜圖

2.2 樣品分析

10個(gè)樣品中有4個(gè)檢測(cè)出脫氫乙酸，其中綠豆糕檢出濃度為0.16 g·kg-1、蛋黃酥檢出濃度為0.064 g·kg-1、經(jīng)典麥香吐司檢出濃度為0.091 g·kg-1以及牛奶味吐司檢出濃度為0.10 g·kg-1，其含量均未超過(guò)國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)0.5 g·kg-1，其他均未檢出。

2.3 線性關(guān)系及檢出限

使用SH-RTx-5色譜柱和DB-WAX色譜柱，在脫氫乙酸質(zhì)量濃度為1～200 μg·mL-1均具有良好的線性關(guān)系，詳見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系及檢出限表

2.4 加標(biāo)回收率與精密度

在皇后吐司試樣（本底值0 μg·mL-1）中，添加低 （2 μg·mL-1）、中（6 μg·mL-1）、高（20 μg·mL-1） 3個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)置6個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定。由表2可知，SH-RTx-5色譜柱方法的加標(biāo)回收率為80.0%～90.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～3.9%； DB-WAX色譜柱方法的加標(biāo)回收率為78.5%～84.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.8%～8.3%。兩種檢測(cè)方法樣品回收率高、精密度好，均滿足檢測(cè)要求。

表2 加標(biāo)回收率與精密度結(jié)果表

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了氣相色譜法基于兩種不同極性色譜柱檢測(cè)脫氫乙酸的檢測(cè)方案。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種色譜柱測(cè)定糕點(diǎn)中脫氫乙酸含量的準(zhǔn)確度、精確度均能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求。弱極性SH-RTx-5柱在峰型和回收率上都比強(qiáng)極性DB-WAX柱表現(xiàn)更優(yōu)秀，但不容易排除假陽(yáng)性。因此，同時(shí)掌握兩種檢測(cè)方式有助于實(shí)驗(yàn)中干擾的排除以及數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的驗(yàn)證。