馬洪悅，楊敏莉，張 峰,*，楊丙成，章飛芳,*

（1.華東理工大學(xué)藥學(xué)院，制藥工程與過(guò)程化學(xué)教育部工程研究中心，上海 200237；2.中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（食品質(zhì)量與安全），北京 100176）

莠滅凈和莠去津?qū)儆谌侯惓輨?，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如表1所示，在農(nóng)作物種植過(guò)程中應(yīng)用較為廣泛。然而三嗪類除草劑具有高毒性，人體長(zhǎng)期接觸可能會(huì)造成接觸性皮炎，如果其殘留通過(guò)食品、地表徑流和地下水的污染進(jìn)入人體，會(huì)造成人體畸變或誘導(dǎo)致癌，因此開發(fā)出能夠有效檢測(cè)食品中三嗪類農(nóng)藥殘留的方法具有重要意義。

表1 莠滅凈和莠去津的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Table 1 Chemical structures of ametryn and atrazine

目前，三嗪類除草劑等農(nóng)藥殘留的檢測(cè)主要借助氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜等方法。但這些檢測(cè)方法均離不開樣品前處理步驟，才能將復(fù)雜基質(zhì)中的痕量目標(biāo)物有效提取，固相萃取是常用的前處理方法，例如Bichon等利用固相萃取與加壓液體萃取相結(jié)合，在凍干牡蠣中提取了5 種三嗪類農(nóng)藥；Wang Shanshan等利用雙模板分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymer，MIP）在玉米、小麥和棉籽樣品中富集了17 種三嗪類農(nóng)藥。但這些檢測(cè)方法在應(yīng)用過(guò)程中都具有明顯的缺點(diǎn)，即需要較長(zhǎng)時(shí)間的色譜分離和復(fù)雜的樣品前處理。同時(shí)，液相色譜主要是依靠色譜柱對(duì)不同物質(zhì)之間的保留時(shí)間不同而達(dá)到分離目標(biāo)物的效果，色譜柱正確選擇、流動(dòng)相的比例調(diào)整、洗脫梯度的合理設(shè)置均對(duì)色譜分離至關(guān)重要，這些因素使氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在快速檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用具有一定的局限性。

近20年間，敞開式質(zhì)譜技術(shù)因其不需要色譜分離的優(yōu)勢(shì)而迅速發(fā)展，一定程度上彌補(bǔ)了氣相色譜和液相色譜技術(shù)的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了僅需少量或無(wú)需前處理直接在原位檢測(cè)痕量目標(biāo)物。敞開式質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展得益于敞開式離子源的開發(fā)，目前已報(bào)道的有40多種，例如，解吸電噴霧電離，直接實(shí)時(shí)分析，常壓固體分析探針，介質(zhì)阻擋放電電離，紙噴霧電離，快速蒸發(fā)電離等。為了進(jìn)一步提高敞開式質(zhì)譜離子源的選擇性，有研究人員將一系列的納米吸附材料與敞開式離子源結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)物更快更精準(zhǔn)的檢測(cè)。

本研究將分子印跡技術(shù)與敞開式質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合，開發(fā)一種快速檢測(cè)食品中莠滅凈和莠去津的方法。以鐵片為固體基板，氰草津?yàn)樘摂M模板，使用苯胺和甲基丙烯酸在水溶液中合成了集選擇性富集和快速檢測(cè)為一體的敞開式離子源，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該方法操作簡(jiǎn)單、高效省時(shí)、靈敏度高，可實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中μg/kg級(jí)莠滅凈和莠去津的快速檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

莠滅凈（純度98.0%）、莠去津（純度99.1%）、氰草津（純度97.4%）、磺胺對(duì)甲氧嘧啶（純度99.3%）德國(guó)Dr. Ehrenstorfer. GmbH公司；甲基丙烯酸（純度99%） 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；過(guò)硫酸銨（純度＞99%），乙腈、丙酮、甲醇、乙醇（均為分析純）賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；正硅酸四乙酯（以SiO計(jì)≥28.4%）、苯胺（純度98.0%）、氨水（25.0%～28.0%） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷（3-(trimethoxysily)propyl methacrylate，MPS）（純度＞98.0%） 東京化成工業(yè)株式會(huì)社；苯胺（純度98.0%），甲酸、乙酸（純度＞99.7%） 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；硫酸（98.08%） 韓國(guó)德山公司；實(shí)驗(yàn)用水由Milli-Q超純水系統(tǒng)制備；鐵片購(gòu)自北京市某五金店。

1.2 儀器與設(shè)備

QTRAP 5500質(zhì)譜儀 美國(guó)AB Sciex公司；G560E渦旋振蕩器 美國(guó)Scientific Industries公司；DW-P103-1ACE0高壓電源 天津東文高壓電源有限公司；KQ-500DE超聲清洗機(jī) 昆山市超聲儀器有限公司；MFV-24氮吹儀 廣州得泰儀器科技有限公司；BV1010多管振蕩儀 美國(guó)Benchman公司；超純水機(jī) 美國(guó)Millipore公司；PHS-25型號(hào)pH計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 分子印跡聚合物修飾鐵片（molecularly imprinted polymer modified iron sheet，MIPIS）及非分子印跡聚合物修飾鐵片（non molecularly imprinted polymer modified iron sheet，NIPIS）的制備

MIPIS的制備過(guò)程主要包括鐵片的表面改性及MIP涂覆兩個(gè)步驟。

1.3.1.1 鐵片的表面改性

鐵片表面改性處理參考文獻(xiàn)[24]的方法：包括表面酸處理和雙鍵化修飾2 個(gè)過(guò)程。對(duì)鐵片進(jìn)行酸處理是為了有效去除鐵片表面的鍍鋅層，暴露出內(nèi)部的四氧化三鐵，有利于后續(xù)對(duì)鐵片進(jìn)行修飾。鐵片表面硅氧化修飾后，接枝雙鍵能夠?yàn)橹驧IP的聚合過(guò)程提供反應(yīng)位點(diǎn)。

首先，將厚度為0.3 mm的鐵片剪裁為1 cm×2 cm（底、高）的等腰三角形，以2 mol/L硫酸超聲處理鐵片約1 h，直至鐵片邊緣呈現(xiàn)微鋸齒形，超聲結(jié)束后，用超純水反復(fù)洗滌鐵片至表面呈中性，再以適量丙酮沖洗，用氮?dú)獯蹈伞Ｖ?，將處理后的鐵片放入盛有4 mL超純水、50 mL乙醇的錐形瓶中，緩慢滴加5 mL濃氨水和2 mL正硅酸四乙酯，將其置于搖床上，以180 r/min室溫反應(yīng)12 h，反應(yīng)結(jié)束后分別使用超純水和乙醇沖洗并吹干，得到表面修飾硅氧鍵的IS@SiO。將所得的IS@SiO浸入60 mL甲醇溶液中，逐滴加入2 mL MPS，置于搖床上，以相同的速度室溫反應(yīng)24 h，反應(yīng)結(jié)束后用乙醇反復(fù)沖洗產(chǎn)物3～5 次，用氮?dú)獯蹈?，最終得到表面修飾雙鍵的IS@SiO@MPS。

1.3.1.2 IS涂覆MIP

將30 mg氰草津和90 μL甲基丙烯酸溶于50 mL水中，放入1 片IS@SiO@MPS，置于搖床上，以180 r/min反應(yīng)30 min。隨后加入100 mg苯胺、66 mg過(guò)硫酸銨和1 mL 1.0 mol/L HCl溶液，在常溫條件下以相同的速率反應(yīng)24 h。合成的產(chǎn)物用超純水洗滌數(shù)次，用甲醇沖洗，并用氮?dú)獯蹈?。以甲?乙酸（95∶5，/））為洗脫劑，在索氏抽提器中去除聚合物中的模板分子，得到MIPIS。NIPIS的制備除不加模板分子外，其他步驟與MIPIS的制備過(guò)程相同。

1.3.2 樣品制備

首先，稱取2 mg豆奶粉樣品，加入15 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，超聲3 min，4 ℃、8 000 r/min離心10 min，收集上清液，用氮?dú)獯抵两桑?5 mL甲醇溶液復(fù)溶，所得溶液作為待測(cè)液。實(shí)驗(yàn)中其他樣品的前處理流程與之相同。

1.3.3 MIPIS萃取樣品

取10 mL待測(cè)液于樣品瓶中，加入1 片MIPIS，置于搖床上，180 r/min振搖20 min。MIPIS取出晾干后利用銅夾將其固定在搭建好的3D移動(dòng)平臺(tái)上，調(diào)整MIPIS角度，使其尖端距離質(zhì)譜進(jìn)樣口約1 cm。在MIPIS表面滴加10 μL 0.2% 氨水-甲醇溶液，接入3.3 kV的高壓電源后，直接進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)。

1.3.4 質(zhì)譜檢測(cè)

質(zhì)譜檢測(cè)采用正離子條件下的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，使用Analyst軟件對(duì)莠滅凈和莠去津定量離子產(chǎn)生的峰面積進(jìn)行定量，相關(guān)質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 莠滅凈和莠去津的母離子、子離子、去簇電壓和碰撞能Table 2 Parent ions, product ions, de-clustering potential and collision energy for ametryn and atrazine

1.3.5 方法學(xué)考察

實(shí)驗(yàn)分別配制了質(zhì)量濃度范圍為0.2～200 μg/L的基質(zhì)待測(cè)溶液和溶劑待測(cè)溶液，利用MIPIS對(duì)其進(jìn)行富集并檢測(cè)，并繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線用于判定方法的基質(zhì)效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)是影響外標(biāo)法準(zhǔn)確定量的重要因素，按下式計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)（）：

式中：和分別為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。

2 結(jié)果與分析

2.1 掃描電鏡表征

材料的表面形貌一般可通過(guò)掃描電鏡進(jìn)行表征。為了觀察MIPIS和NIPIS的表面形貌，對(duì)各個(gè)反應(yīng)階段的產(chǎn)物進(jìn)行了掃描電鏡表征。如圖1所示，原始鐵片（圖1A）表面較為光滑，經(jīng)過(guò)酸化反應(yīng)以及硅氧化修飾后，得到圖1B，可以看出鍍鋅層基本都被腐蝕，鐵片表面呈現(xiàn)凹凸不平的形態(tài)，且表面接枝較多的球狀基團(tuán)，為后續(xù)的MIP的修飾提供了反應(yīng)位點(diǎn)。由圖1C、D可以看出，材料表面呈現(xiàn)蜂窩狀，有較多的孔穴，為吸附待測(cè)物提供了條件。

圖1 掃描電鏡表征Fig. 1 SEM images

2.2 提取條件和質(zhì)譜條件優(yōu)化

不同提取條件會(huì)對(duì)目標(biāo)物的提取效果產(chǎn)生影響，本研究在加標(biāo)量為50 μg/kg的豆奶粉樣品混合溶液中對(duì)提取溶劑，提取時(shí)間以及提取液pH值進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果如圖2所示。

選擇合適的提取溶劑是萃取過(guò)程的關(guān)鍵因素，實(shí)驗(yàn)選取丙酮、乙酸乙酯和乙腈3 種常用的提取溶劑對(duì)樣品中的莠去津和莠滅凈進(jìn)行提取，并對(duì)MIPIS富集的目標(biāo)物進(jìn)行檢測(cè)。由圖2A可知，相比于丙酮和乙酸乙酯，乙腈作為提取溶劑時(shí)MIPIS富集到的目標(biāo)物更多，檢測(cè)得到的峰面積更高，所以乙腈對(duì)莠滅凈和莠去津的提取效果更好。由于莠滅凈和莠去津?qū)儆谥械葮O性的農(nóng)藥，而乙酸乙酯更適合提取一些極性較大的物質(zhì)，因此乙酸乙酯對(duì)莠滅凈和莠去津的提取能力稍弱。同時(shí)，乙腈具有沉淀蛋白質(zhì)的作用，有利于降低樣品中的基質(zhì)干擾，從而提高提取效率；并且乙腈具有極易揮發(fā)的特性，這更有利于提取液的吹干和復(fù)溶過(guò)程。因此，實(shí)驗(yàn)選擇乙腈作為提取溶劑。

MIPIS對(duì)目標(biāo)物的富集是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，因此實(shí)驗(yàn)分別對(duì)提取時(shí)間為5、10、20、25 min和30 min條件下MIPIS富集的目標(biāo)物含量進(jìn)行了考察，如圖2B所示，莠滅凈的定量離子形成的峰面積在前20 min呈現(xiàn)不斷增加的趨勢(shì)，在20 min達(dá)到最大值，在20～30 min內(nèi)，樣品基質(zhì)內(nèi)的大分子對(duì)于吸附位點(diǎn)的干擾，造成峰面積值有輕微下降，基本達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。莠去津在提取時(shí)間為25 min時(shí)測(cè)得的峰面積值最大，但僅比提取時(shí)間為20 min時(shí)所測(cè)得的峰面積高2.7%。因?yàn)樘崛?shí)驗(yàn)是在2 種目標(biāo)物的混合溶液中進(jìn)行，為了統(tǒng)一提取時(shí)間，實(shí)驗(yàn)選擇20 min作為MIPIS對(duì)目標(biāo)物的提取時(shí)間。

提取溶液pH值是影響目標(biāo)物與MIPIS有效結(jié)合的重要因素，因?yàn)樵诓煌琾H值條件下，目標(biāo)物會(huì)呈現(xiàn)不同的離子狀態(tài)，影響其與MIPIS上的吸附位點(diǎn)的氫鍵形成。實(shí)驗(yàn)分別對(duì)提取液pH值為3、5、7、9、10條件下的MIPIS對(duì)莠滅凈和莠去津的富集量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果如圖2C所示。在pH值為7的條件下，MIPIS對(duì)莠滅凈和莠去津的富集效果最佳，在pH值為3或10的條件下，MIPIS對(duì)莠滅凈和莠去津的富集效果較差，這可能是由于莠滅凈和莠去津在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿的條件下不穩(wěn)定，會(huì)發(fā)生分解反應(yīng)。根據(jù)莠滅凈和莠去津的結(jié)構(gòu)，氨基的氫原子和三嗪環(huán)的氮原子會(huì)作為結(jié)合位點(diǎn)，構(gòu)建所需的關(guān)鍵相互作用，而甲基丙烯酸中的羧基既是氫鍵受體又是供體，因此莠滅凈和莠去津分別會(huì)與甲基丙烯酸形成雙氫鍵。在pH值較低時(shí)，由于甲基丙烯酸中的酸性基團(tuán)和目標(biāo)物處于質(zhì)子化形式，這可能使得目標(biāo)物分子或甲基丙烯酸中的氫鍵位點(diǎn)直接與水合氫離子相互作用，而不是目標(biāo)物與MIPIS之間有相互作用。在較高的pH值下，更多的目標(biāo)物和甲基丙烯酸的酸性基團(tuán)也呈現(xiàn)離子形式，減少了氫鍵形成能力。因此，較高或較低的pH值都會(huì)導(dǎo)致MIPIS對(duì)莠滅凈和莠去津的提取效率降低。因此pH值為7被選為提取溶液的最佳pH值。

實(shí)驗(yàn)分別對(duì)噴霧電壓和噴霧溶劑2 個(gè)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。如圖2D所示，分別檢測(cè)噴霧電壓為2.8、3.0、3.3、3.5、3.8 kV和4.0 kV條件下莠滅凈和莠去津的定量離子的信號(hào)強(qiáng)度。當(dāng)噴霧電壓小于2.8 kV時(shí)，由于噴霧溶劑的表面張力較大，不能形成有效噴霧，所以檢測(cè)不到目標(biāo)物的信號(hào)；當(dāng)噴霧電壓大于2.8 kV時(shí)，信號(hào)強(qiáng)度隨著噴霧電壓的增加而不斷增加，在噴霧電壓達(dá)到3.3 kV時(shí)，信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到了最大值。而當(dāng)噴霧電壓大于3.3 kV時(shí)，信號(hào)強(qiáng)度逐漸下降，這是由于噴霧電壓過(guò)高時(shí)，包裹目標(biāo)物的噴霧溶劑聚集在MIPIS尖端形成大液滴，被快速擊散成小液滴噴落在質(zhì)譜進(jìn)樣口周圍，只有少量小液滴形成有效的噴霧進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)樣口，造成目標(biāo)物的信號(hào)強(qiáng)度較低。因此，選擇3.3 kV作為噴霧電壓。

如圖2E所示，分別考察甲醇、0.2%甲酸-甲醇和0.2%氨水-甲醇作為噴霧溶劑，對(duì)MIPIS上莠滅凈和莠去津的洗脫能力。根據(jù)各定量離子的峰面積可知，噴霧溶劑為含0.2%氨水-甲醇所洗脫出的莠滅凈和莠去津的量最多，其值是噴霧溶劑為甲醇時(shí)解吸量的1.19 倍和1.13 倍，是噴霧溶劑為0.2%甲酸-甲醇的1.45 倍和1.39 倍。這是由于堿性條件下，氫鍵更容易發(fā)生斷裂，使目標(biāo)物與MIPIS上的選擇性位點(diǎn)更易分離，從而洗脫出更多的目標(biāo)物。因此選擇0.2%氨水-甲醇作為實(shí)驗(yàn)的噴霧溶劑。

圖2 不同條件下提取莠滅凈和莠去津的優(yōu)化結(jié)果Fig. 2 Optimization of the extraction conditions for ametryn and atrazine

2.3 MIPIS材料評(píng)價(jià)

2.3.1 特異性評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)選擇磺胺對(duì)甲氧嘧啶作為競(jìng)爭(zhēng)性目標(biāo)物，通過(guò)比較MIPIS和NIPIS對(duì)莠滅凈、莠去津和磺胺對(duì)甲氧嘧啶的吸附能力來(lái)評(píng)價(jià)MIPIS的特異性。在含量為50 μg/kg的加標(biāo)豆奶粉樣品待測(cè)液中將一片MIPIS和一片NIPIS分別置于上述溶液中，按1.3.3節(jié)平行測(cè)定3 次。MIPIS和NIPIS對(duì)莠滅凈、莠去津和磺胺對(duì)甲氧嘧啶的吸附結(jié)果如圖3所示。結(jié)果表明，MIPIS吸附的莠滅凈和莠去津?qū)?yīng)峰面積是NIPIS的1.6 倍和2.6 倍，這是由于MIPIS具有特異性吸附位點(diǎn)，對(duì)目標(biāo)物吸附容量大，而NIPIS受到樣品中其他大分子物質(zhì)的干擾，因此對(duì)目標(biāo)物的吸附量會(huì)降低。圖中還可以看出MIPIS和NIPIS由于對(duì)磺胺對(duì)甲氧嘧啶沒有特異性的吸附孔穴，吸附量較小。

圖3 MIPIS和NIPIS對(duì)莠滅凈、莠去津和磺胺對(duì)甲氧嘧啶的提取量的比較Fig. 3 Comparison of efficiencies of MIPIS and NIPIS for extraction of ametryn, atrazine and sulfameter

2.3.2 富集效率評(píng)價(jià)

富集因子是評(píng)價(jià)固體基板材料富集效率的重要指標(biāo)，富集因子定義為MIPIS和空白鐵片對(duì)樣品基質(zhì)中同一濃度目標(biāo)物的萃取量的比值。在空白豆奶粉樣品的待測(cè)液中加入莠滅凈和莠去津的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配成50 μg/kg的混合溶液，分別加入一片MIPIS和一片空白鐵片，按照1.3.3節(jié)平行測(cè)定3 次。結(jié)果顯示MIPIS對(duì)莠滅凈和莠去津的富集因子分別為22.24±2.30、28.14±3.75，莠滅凈的富集因子值稍低于莠去津。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，是由于莠滅凈的三嗪環(huán)上的取代基團(tuán)位阻更大，因此在與莠去津競(jìng)爭(zhēng)MIPIS上的特異性吸附位點(diǎn)時(shí)，顯示出更弱的競(jìng)爭(zhēng)力，因此，莠去津的富集值更高一些。

2.4 MIPIS結(jié)合電噴霧電離質(zhì)譜方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.4.1 基質(zhì)效應(yīng)的考察

基質(zhì)效應(yīng)有基質(zhì)抑制和基質(zhì)促進(jìn)作用，其評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為：當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)大于20%時(shí)，表現(xiàn)為明顯的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)小于－20%時(shí)，表現(xiàn)為明顯的抑制作用；當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)在－20%～20%之間時(shí)，則基質(zhì)效應(yīng)不明顯。當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)明顯時(shí)，需要采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確定量從而消除基質(zhì)效應(yīng)。通過(guò)計(jì)算，莠滅凈和莠去津的基質(zhì)效應(yīng)分別為－23.9%和－8.7%，結(jié)果說(shuō)明樣品基質(zhì)對(duì)莠滅凈具有基質(zhì)抑制作用，莠去津的基質(zhì)效應(yīng)不明顯，即對(duì)莠滅凈來(lái)說(shuō)，MIPIS對(duì)豆奶粉樣品中的基質(zhì)干擾抵抗能力較弱。因此，為了獲得更準(zhǔn)確的定量結(jié)果，采用莠滅凈和莠去津的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線作為定量標(biāo)準(zhǔn)。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、LOD與LOQ結(jié)果

表3 莠滅凈和莠去津在甲醇和豆奶粉中的線性關(guān)系、LODs、LOQs、日內(nèi)精密度和日間精密度Table 3 Linear relationships, LODs, LOQs, intraday and interday precision for the determination of ametryn and atrazine in methanol and soy milk powder

在豆奶粉待測(cè)液和甲醇中加入莠滅凈和莠去津的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成質(zhì)量濃度為0.2～200 μg/L的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，并用MIPIS進(jìn)行提取，按照1.3.3節(jié)方法進(jìn)行檢測(cè)，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果如表3所示。莠滅凈和莠去津在0.2～200 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好（＞0.998 2）。另外，還測(cè)定莠滅凈和莠去津檢出限（limits of detection，LOD）和定量限（limits of quantification，LOQ），結(jié)果如表3所示，LOD范圍在0.2～0.5 μg/kg之間，LOQ在0.6～1.5 μg/kg之間，說(shuō)明MIPIS結(jié)合電噴霧電離質(zhì)譜方法可實(shí)現(xiàn)豆奶粉中痕量莠滅凈和莠去津殘留的靈敏檢測(cè)。

2.4.3 重復(fù)性和再現(xiàn)性結(jié)果

通過(guò)測(cè)定日內(nèi)精密度和日間精密度用以評(píng)價(jià)重復(fù)性和再現(xiàn)性。通過(guò)在1 d內(nèi)對(duì)豆奶粉加標(biāo)樣品連續(xù)分析6 次并測(cè)定3 d，評(píng)價(jià)MIPIS結(jié)合電噴霧電離質(zhì)譜方法的重復(fù)性和再現(xiàn)性。在空白豆奶粉樣品待測(cè)液中加入的莠滅凈和莠去津混合標(biāo)準(zhǔn)品配制成含量為50 μg/kg的混合溶液，并測(cè)定莠滅凈和莠去津的RSD。如表3所示，結(jié)果表明日內(nèi)精密度為12.10%和10.63%，日間精密度為8.79%和13.04%，表明MIPIS結(jié)合電噴霧電離質(zhì)譜方法對(duì)豆奶粉中莠滅凈和莠去津的檢測(cè)具有良好的重復(fù)性和重現(xiàn)性。

2.5 材料重復(fù)使用性考察

以吸附-洗脫為一個(gè)循環(huán)，考察MIPIS的重復(fù)使用性。在空白豆奶粉的待測(cè)液中加入莠滅凈和莠去津的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配成50 μg/kg的混合溶液，加入一片MIPIS，按照1.3.3節(jié)進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算其回收率。之后用甲醇-乙酸（95∶5，/）浸泡清洗MIPIS，再進(jìn)行下一次吸附-洗脫，循環(huán)了5 次。結(jié)果如圖4所示，隨著使用次數(shù)的增加，MIPIS的回收率逐漸下降，這可能是由于每一次的洗脫都會(huì)對(duì)MIPIS上的吸附位點(diǎn)造成一定量的破壞，并且吸附位點(diǎn)會(huì)在有機(jī)溶劑中發(fā)生溶脹使得有效的吸附位點(diǎn)減少。在這5 次吸附-洗脫循環(huán)中，莠滅凈和莠去津的回收率分別在79.90%～95.06%之間和82.43%～106.45%之間，證明MIPIS至少可重復(fù)使用5 次。

圖4 5 個(gè)吸附-洗脫循環(huán)期間莠滅凈和莠去津的回收率Fig. 4 Recoveries of ametryn and atrazine during five adsorption-elution cycles

2.6 實(shí)際樣品測(cè)定及準(zhǔn)確度考察

最后，利用所開發(fā)的MIPIS結(jié)合電噴霧電離質(zhì)譜方法對(duì)購(gòu)于北京當(dāng)?shù)爻械亩鼓谭?，小麥和牛奶樣品中的莠滅凈和莠去津進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果表明，在這些樣品中未檢測(cè)到莠滅凈和莠去津，或是樣品中莠滅凈和莠去津的含量低于本方法的定量限。之后，在這些樣品中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成10、50μg/kg和100 μg/kg 3 種不同含量的莠滅凈和莠去津的混合樣品溶液，利用所開發(fā)的MIPIS-ESI-MS方法檢測(cè)莠滅凈和莠去津并計(jì)算了每類樣品中的2 種除草劑的回收率。如表4所示，莠滅凈和莠去津的回收率在81.05%～109.66%范圍內(nèi)，RSD在4.03%～15.89%之間，說(shuō)明準(zhǔn)確度良好。

表4 實(shí)際樣品中莠滅凈和莠去津的含量以及不同添加水平的回收率結(jié)果Table 4 Contents and recoveries of ametryn and atrazine in real samples with different spiked levels

3 結(jié) 論

以氰草津?yàn)樘摂M模板，利用甲基丙烯酸和苯胺在鐵片上合成了一種選擇性離子源，結(jié)合電噴霧電離質(zhì)譜，建立了一種快速檢測(cè)食品基質(zhì)中痕量莠滅凈和莠去津的方法，對(duì)豆奶粉，小麥，牛奶三類樣品分別以10、50、100 μg/kg 3 個(gè)含量進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，平均回收率在81.05%～109.66%之間，RSD為4.03%～15.89%，能夠?yàn)槿侯愞r(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)提供一定的參考。