邢美嬋，歐經(jīng)思，陳成，粟暉，劉柳，姚志湘,3*

(1.廣西科技大學(xué) 生物與化學(xué)工程學(xué)院 廣西糖資源綠色加工重點實驗室，廣西 柳州 545006；2.崇左半糖健康糖業(yè)有限公司，廣西 崇左 532203；3.廣西蔗糖產(chǎn)業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，南寧 530004)

近紅外光譜技術(shù)具有測定速度快、樣品制備簡單、不耗費化學(xué)試劑、操作簡便、成本低、無污染等優(yōu)點。但近紅外光譜用于體系糖含量分析，多是利用偏最小二乘法以及不同光譜處理和數(shù)學(xué)處理相結(jié)合，構(gòu)建葡萄糖、果糖和蔗糖含量的近紅外光譜分析模型，用外部驗證樣品集進(jìn)行驗證，然后利用所建模型對待測樣品進(jìn)行含量預(yù)測。該方法建模樣本量大、建模成本高、模型預(yù)測準(zhǔn)確度由建模樣本的分布情況決定。目前快速、準(zhǔn)確、不損耗樣本、不破壞環(huán)境、可以實時對原汁紅糖進(jìn)行在線分析的檢測方法較少。

姚志湘等[9]發(fā)現(xiàn)在分析多元體系問題時將光譜信號視為向量并引入空間角可使多維體系分析概念和表達(dá)更明確和簡單；根據(jù)這一原理提出了向量空間角轉(zhuǎn)換消除乘性干擾的方法[10]，有效提高了拉曼光譜定量分析的準(zhǔn)確度，進(jìn)一步提出結(jié)合角度轉(zhuǎn)換的近似線性定量方法，實現(xiàn)了紅外光譜結(jié)合向量夾角快速定量分析三氯蔗糖合成過程的中間產(chǎn)品[11]，并將此方法應(yīng)用于蔗糖水解過程組分含量跟蹤及動力學(xué)的研究[12]。該方法有效克服了乘性干擾，且不依賴光譜特征響應(yīng)，光譜信息完整，具有簡便、效率高、穩(wěn)定性好、無需大數(shù)據(jù)建模的優(yōu)點，提供了快速定量分析的參考方法。本文采用近紅外光譜結(jié)合角度轉(zhuǎn)換的方法，建立原汁紅糖中蔗糖、果糖、葡萄糖含量的快速分析方法。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器與試劑

Frontier近紅外光譜儀 珀金埃爾默儀器有限公司；CP214型電子分析天平 奧豪斯儀器(常州)有限公司。

葡萄糖(AR)、果糖(99%)、蔗糖(AR)、原汁紅糖(市售)。

1.2 原汁紅糖的角度轉(zhuǎn)換結(jié)合近紅外光譜分析模型建立

1.2.1 建模樣本的配制

取多塊市售紅糖，混合均勻為基樣，采用高效液相色譜法測定紅糖中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量分別為86.9%、2.52%、3.84%。

取市售紅糖基樣，分別添加一定量的蔗糖、果糖和葡萄糖，混合均勻，配制得到總量約為2 g的系列樣本，其中蔗糖含量為79.80%～94.77%，果糖含量為2.31%～7.62%，葡萄糖含量為1.52%～6.53%；將蔗糖的系列樣本命名為Z1～Z12，果糖的系列樣本命名為G1～G10，葡萄糖的系列樣本命名為P1～P10，分析純的果糖、葡萄糖、蔗糖命名為GT、PT、ZT，紅糖基樣命名為HT。

忙了一整天，她要乘晚上的東鐵再回到深圳去。香港是個不夜城，她坐在巴士上經(jīng)過了層層的絢爛燈火，思念起了故鄉(xiāng)的小鎮(zhèn)。小鎮(zhèn)現(xiàn)在應(yīng)該凍土剛化，田野里生出各種野生的嫩芽。小麥掀開了厚厚的雪棉被，應(yīng)該有20厘米高了，綠油油的，定是十分喜人。今年會有個好收成吧。

1.2.2 樣本近紅外光譜采集

采用積分球附件，將上述各樣本分別置于測量皿中，采集近紅外光譜數(shù)據(jù)。采集參數(shù)為積分時間60 s、分辨率2 cm-1、數(shù)據(jù)間隔1 nm、波長范圍1000～2500 nm。

1.2.3 近紅外光譜結(jié)合角度轉(zhuǎn)換的快速分析模型建立

以蔗糖含量的分析關(guān)聯(lián)模型建立為例：

(1)等濃度梯度選擇蔗糖系列樣本中5～6個，建模樣本需包括系列樣本的最大濃度與最小濃度；

(2)分析樣本光譜與參比光譜(分析純蔗糖光譜)，選擇建模波長范圍；

(3)對樣本光譜與參比光譜進(jìn)行求導(dǎo)降噪處理；

(4)設(shè)定移動窗口，采用自編算法計算得到樣本光譜與參比光譜的系列夾角的方差值EE；

(5)建立EE值與樣本中蔗糖濃度的線性方程；調(diào)整求導(dǎo)階數(shù)，移動窗口寬度直至相關(guān)系數(shù)r>0.99，模型建立完成。

同理分別建立果糖、葡萄糖的分析模型。

1.3 方法驗證和精密度實驗

將果糖、葡萄糖、蔗糖系列驗證樣本光譜數(shù)據(jù)分別導(dǎo)入MATLAB計算平臺，依照各自建模參數(shù)，求取驗證樣本光譜與參比光譜的系列夾角的方差值EE，將所得EE值分別代入對應(yīng)建立的關(guān)聯(lián)方程，通過誤差分析驗證所建模型的可靠性。

分別稱取紅糖基樣3份，命名為H1、H2、H3，平行采集其近紅外光譜數(shù)據(jù)5次，采用角度轉(zhuǎn)換算法計算樣本中果糖、葡萄糖、蔗糖含量，并檢驗方法的精密度。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣本近紅外光譜分析

蔗糖、果糖、葡萄糖及紅糖樣本的近紅外光譜見圖1。各樣本譜圖基線漂移，果糖、葡萄糖、蔗糖與紅糖樣本的出峰存在重疊和覆蓋，各待測組分響應(yīng)缺乏良好的選擇性，影響紅糖混合物中被測組分直接測量的準(zhǔn)確性，不適合直接通過峰的強度和含量高低之間的關(guān)系進(jìn)行定量分析。

圖1 果糖、葡萄糖、蔗糖與紅糖樣本近紅外光譜圖

2.2 果糖、葡萄糖、蔗糖含量的分析關(guān)聯(lián)方程建立

以蔗糖含量的分析關(guān)聯(lián)方程建立為例：

以蔗糖對照品ZT為參比，選擇Z1、Z2、Z4、Z5、Z8、Z10為建模樣本。對建模樣本分別進(jìn)行一階、二階濾波求導(dǎo)降噪和零階導(dǎo)、移動窗口寬度取波段波數(shù)的1/30與1/60，窗口從最小波數(shù)點向波數(shù)點增大方向移動，計算樣本與參比之間的余弦夾角EE值。以蔗糖含量為橫坐標(biāo)、夾角余弦值(EE)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合，建立關(guān)聯(lián)方程，見圖2。對比各方程的相關(guān)系數(shù)，確定最優(yōu)關(guān)聯(lián)方程。

圖2 蔗糖含量與角度值的關(guān)聯(lián)方程

由圖2中e，f使用二階濾波求導(dǎo)的譜圖計算可知，相較采用零階或一階濾波求導(dǎo)的a，c，d離散程度大，說明譜圖選取合適的階級濾波求導(dǎo)降噪可提高EE與蔗糖含量的線性關(guān)系。通過圖2中c，d比較一階濾波求導(dǎo)降噪，窗口寬度在選擇1/30時較1/60時蔗糖的吸光度量值在被轉(zhuǎn)換成角度的度量值時信息量更為豐富全面，能更有效地截取分析特征波段。圖2中a零階濾波求導(dǎo)所建模型關(guān)聯(lián)方程相關(guān)系數(shù)符合要求，但綜合考慮濾波求導(dǎo)降噪及窗口寬度的選擇，經(jīng)過一階濾波求導(dǎo)降噪得到的圖2中d其相關(guān)系數(shù)最優(yōu)，為0.997，并且驗證樣本的相對誤差最小。選擇圖2中d建立蔗糖的快速分析模型，蔗糖含量在79.80%～94.77%范圍內(nèi)與對應(yīng)的EE值線性關(guān)系良好。

果糖、葡萄糖快速分析模型的建立方法參照蔗糖分析關(guān)聯(lián)方程的建立過程，其中果糖含量分析關(guān)聯(lián)方程的建立以果糖對照品GT為參比，選擇G1、G2、G4、G6、G9、G10為建模樣本；葡萄糖含量分析關(guān)聯(lián)方程的建立以葡萄糖對照品PT為參比，選擇P1、P3、P6、P8、P10為建模樣本，確定了最優(yōu)關(guān)聯(lián)方程參數(shù)。

蔗糖、果糖、葡萄糖的最優(yōu)關(guān)聯(lián)方程及相關(guān)系數(shù)見表1。

表1 蔗糖、果糖、葡萄糖模型的線性方程及r值

2.3 方法驗證

取各驗證樣本，依照建模所得參數(shù)將蔗糖、果糖、葡萄糖光譜數(shù)據(jù)分別導(dǎo)入MATLAB中計算得到EE值，將所得EE值分別代入對應(yīng)建立的關(guān)聯(lián)方程，蔗糖、果糖、葡萄糖驗證樣本預(yù)測值與誤差分析結(jié)果見表2～表4。

表2 蔗糖驗證樣本的EE值與誤差分析結(jié)果

表3 果糖驗證樣本的EE值與誤差分析結(jié)果

表4 葡萄糖驗證樣本的EE值與誤差分析結(jié)果

由表2～表4可知，蔗糖、果糖、葡萄糖快速分析模型的絕對誤差分別在-2.95%～0.69%,-0.56%～0.11%,-0.23%～0.23%之間，相對誤差分別在-3.53%～0.76%,-8.61%～2.43%,-4.58%～3.89%之間。結(jié)果表明，模型精密度較高，對驗證樣本中蔗糖、果糖、葡萄糖含量的預(yù)測較為準(zhǔn)確。

2.4 原汁紅糖中蔗糖、果糖、葡萄糖含量分析

分別以ZT、GT、PT為參比，計算原汁紅糖樣本H1～H3與參比ZT、GT、PT的夾角的方差值EE，代入2.2中建立的關(guān)聯(lián)方程中，計算H1～H3中的蔗糖、果糖、葡萄糖含量，比較近紅外光譜法預(yù)測得蔗糖、果糖、葡萄糖含量和測得真實含量之間的誤差，結(jié)果見表5。

表5 原汁紅糖樣本的EE值與誤差分析結(jié)果

由表5可知，蔗糖、果糖、葡萄糖分析模型在預(yù)測原汁紅糖中的糖含量時，以平行測定5次預(yù)測含量的平均值與真實含量作對比，相對誤差分別在0.89%～0.90%,7.92%～8.02%,-5.40%～-4.44%之間，其中果糖預(yù)測含量與真實含量的相對誤差較大，造成這種現(xiàn)象的原因在于向紅糖基樣中添加的果糖純度為99%，以其作為參比會產(chǎn)生一定誤差。樣本的最大相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.32%，最小相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01%，說明建立的近紅外光譜結(jié)合角度轉(zhuǎn)換快速分析果糖、葡萄糖和蔗糖含量的方法精密度較高，準(zhǔn)確性好，適用于快速分析原汁紅糖中的蔗糖、果糖、葡萄糖含量。

3 結(jié)論

本文采用近紅外光譜采集樣品信息，以角度轉(zhuǎn)換的化學(xué)計量學(xué)方法消除乘性干擾，建立了原汁紅糖的近紅外光譜快速分析方法。蔗糖、果糖、葡萄糖含量分析模型的線性方程的相關(guān)系數(shù)分別可達(dá)0.997，0.998，0.999，準(zhǔn)確度較高。近紅外光譜測量結(jié)果中預(yù)測值與真實值的相對誤差均在10%以下，預(yù)測結(jié)果較好。此方法無需繁瑣的預(yù)處理，樣本檢測過程無損耗且檢測時間短，具有操作簡單、節(jié)約時間、環(huán)保等優(yōu)點，可以推廣到其他紅糖產(chǎn)品糖含量的快速分析測定中，可用于實際生產(chǎn)過程中多批次紅糖含量的快速測定，具有實際應(yīng)用價值。