付江波，桂蓓，李坤平，楊超燕，魏玲，梁晉如，馬江，任孟月，陳艷芬

(廣東藥科大學(xué)1.中藥學(xué)院；2.中醫(yī)藥研究院，廣州 510006)

良附丸出自《良方集腋》，主要由高良姜和香附組成，具有溫胃散寒、理氣止痛的功效，臨床主要應(yīng)用于胃脘痛、胃炎、胃潰瘍等，藥理研究表明該方具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)作用[1-2]。功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)是一種常見的無明確器質(zhì)性病因的胃腸疾病，主要臨床表現(xiàn)為餐后飽脹不適、早飽、上腹痛和上腹灼燒感[3]。流行病學(xué)調(diào)查顯示在亞洲人群中 FD 的發(fā)病率5%～30%，在西方國(guó)家發(fā)病率10%～40%[4]。中醫(yī)古籍對(duì)該疾病沒有確切的記載，根據(jù)FD的臨床癥狀，將其歸屬為“胃脘痛”“痞滿”“積滯”等范疇[5]。為了探討良附丸對(duì)FD是否具有潛在治療作用，本研究首先通過小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)考察良附丸的基礎(chǔ)藥效，并通過建立胃寒型FD大鼠模型，探討良附丸治療FD的作用及其機(jī)制，為良附丸的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 SPF級(jí)昆明小鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量18～22g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK-(粵)2017-0125；SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK-(粵)2020-0002，均購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，期間水、飼料自由攝取。

1.2藥品與試劑 高良姜、醋香附購(gòu)于嶺南中藥飲片有限公司，批號(hào)分別為2006001，2005001，經(jīng)廣東藥科大學(xué)程軒軒副教授鑒定為正品；按照高良姜、醋香附各 9 g配比良附丸，加水煎煮2次，收集濾液濃縮至一定濃度備用。吲哚美辛(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：190501)；多潘立酮(西安楊森制藥有限公司，批號(hào)：190107)；莫沙必利分散片(成都康弘藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：0I002)；羧甲基纖維素鈉(carboxymethyl-cellulose sodium，CMC-Na，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：2016092094)；冰醋酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20150505)；甲醛(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20190926)；電鏡固定液(賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)：G1102)；S12包埋劑(SPI公司，批號(hào)：90529-77-4)；磷酸鹽緩沖液(PBS，賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)：G0002)；4%多聚甲醛(賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)：G1101)；組化試劑盒二氨基聯(lián)苯胺顯色劑(賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)：G1211)。

1.3儀器 分析天平(日本島津 SHIMADZU，感量：0.1 mg)；醫(yī)用離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)；YLS-6B智能熱板儀(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司)；包埋機(jī)(武漢俊杰電子有限公司)；病理切片機(jī)(上海徠卡儀器有限公司)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Bio Tek Instruments)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法與檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 取小鼠60只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常對(duì)照組，吲哚美辛組，良附丸大(14.4 g·kg-1)、中(7.2 g·kg-1)、小劑量組(3.6 g·kg-1)，每組12只。各組小鼠灌胃20 mL·kg-1相應(yīng)藥物，連續(xù)3 d，每天1次。正常對(duì)照組小鼠灌胃等劑量0.5% CMC-Na。末次給藥1 h后腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL。觀察并記錄在15 min內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)。扭體次數(shù)抑制率(%)=(正常對(duì)照組扭體數(shù)-給藥組扭體數(shù))/正常對(duì)照組扭體數(shù)×100%[6]。

1.4.2對(duì)甲醛致小鼠舔足反應(yīng)的影響 取小鼠60只，分組與給藥同“1.4.1”項(xiàng)。于每只小鼠皮下注射2.5%甲醛溶液50 μL。給藥后置于透明容器中觀察小鼠足部。每個(gè)時(shí)間段均觀察15 s，并在15 s按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)記錄小鼠的最高疼痛強(qiáng)度評(píng)分。分別記錄各組小鼠1，10，20，30，40 min的疼痛反應(yīng)分值。評(píng)分方法具體為：小鼠出現(xiàn)舔足、咬足、抖足時(shí)，為3分；小鼠出現(xiàn)提高足部時(shí)，為2分；小鼠出現(xiàn)跛行或足部輕觸地面但不負(fù)重時(shí)，為1分；小鼠正常負(fù)重、走動(dòng)自如，為0分[7]。

1.4.3小鼠胃排空與腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn) 取小鼠60只，稱質(zhì)量，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，多潘立酮組，良附丸小(3.6 g·kg-1)、中(7.2 g·kg-1)、大(14.4 g·kg-1)劑量組。各組小鼠灌胃20 mL·kg-1相應(yīng)藥物，末次給藥40 min后，每只小鼠灌胃營(yíng)養(yǎng)半固體糊0.8 mL。灌胃完畢后，立即對(duì)小鼠進(jìn)行逐一計(jì)數(shù)。灌胃20 min后，脫頸椎處死，開腹。結(jié)扎胃賁門，取出全胃。取出后，用濾紙把胃擦干，稱總質(zhì)量(G)。然后沿胃的大曲線切開，清洗胃內(nèi)容物，用濾紙將胃體擦干，稱凈質(zhì)量(M)。胃排空率(%)=[1-(G-M)/所灌半固體營(yíng)養(yǎng)糊的質(zhì)量]×100%[8]。

取出幽門到回盲部的小腸，用尺測(cè)量小腸總長(zhǎng)度(S)及幽門端到炭末端長(zhǎng)度(L)，計(jì)算小腸推進(jìn)率。小腸推進(jìn)率(%)=L/S×100%[8]。

1.4.4胃寒型FD大鼠模型實(shí)驗(yàn) 大鼠72只，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、莫沙必利組(0.016 g·kg-1)和良附丸小、中、大劑量組(1.8，3.6，7.2 g·kg-1)，每組12只。除正常對(duì)照組外其余各組均造模，胃寒型FD模型根據(jù)課題組前期經(jīng)驗(yàn)構(gòu)建，即采用郭氏夾尾刺激法+不規(guī)律飲食+0.9%氯化鈉溶液多因素干預(yù)方法，造模14 d。夾尾刺激法：于每日9：30和15：30用長(zhǎng)柄醫(yī)用紗布包裹3或4層的金屬鉗夾住大鼠尾端1/3處，激怒大鼠，與籠內(nèi)其他大鼠打斗，每次30 min；不規(guī)律飲食：?jiǎn)稳战常p日給予 飼料150 g，正常飲水；0.9%氯化鈉溶液：于每日9：00和15：00用0～4 ℃ 0.9%氯化鈉溶液灌胃大鼠(每只2 mL)。

①大鼠一般情況觀察。詳細(xì)記錄各組大鼠的精神、皮毛、活動(dòng)度、糞便和進(jìn)食量。食物進(jìn)食量的測(cè)定方法如下：每組大鼠單獨(dú)飼養(yǎng)，稱取24 h前后飼料質(zhì)量。

②糖水偏好實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)的第3天、第8天、第14天分別進(jìn)行糖水實(shí)驗(yàn)，在進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)前需對(duì)大鼠進(jìn)行糖水適應(yīng)性練習(xí)，操作方法參考文獻(xiàn)[9]。測(cè)1 h的糖水偏好，到時(shí)間取走各組水壺，測(cè)量水壺剩余質(zhì)量，計(jì)算糖水偏好率[9]。

③曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。建模第14天，用長(zhǎng)寬80 cm、高80 cm的黑色內(nèi)壁紙箱，底部畫出20塊等面積為12 cm×12 cm的白色方塊。將大鼠放于紙箱底部的中央，開始計(jì)時(shí)5 min。水平分?jǐn)?shù)為：兩只前爪交叉在盒子底部其他方格內(nèi)的次數(shù)為1分；垂直分?jǐn)?shù)為：兩只前爪抬起并爬上盒子墻壁的次數(shù)為1分。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，及時(shí)清理箱體底部和內(nèi)壁，避免影響下次檢測(cè)結(jié)果[9]。

④胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)。末次給藥1 h后，處死大鼠，立即打開腹腔，測(cè)量胃排空率和小腸推進(jìn)率，實(shí)驗(yàn)具體步驟及結(jié)果見相關(guān)文獻(xiàn)[10]。

⑤酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定5-羥色胺(5-HT)、胃動(dòng)素(motilin，MTL)、血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)、P物質(zhì)(substance P，SP)的含量。末次給藥1 h后取血，分離血清，分別測(cè)定各組大鼠血清 VIP、MTL、SP 的含量和胃腸組織5-HT水平，測(cè)定步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

⑥透射電鏡觀察胃竇、結(jié)腸組織中嗜鉻細(xì)胞。在新鮮組織中確定取樣部位，組織體積一般不大于1 mm×1 mm×1 mm，用電子顯微鏡固定液 4 ℃快速固定 2～4 h，用含1%鋨酸的0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(PBS，pH值7.4)沖洗3次，每次15 min。沖洗后用乙醇梯度脫水，丙酮透明，包埋烘烤后超薄切片，最后采用鈾鉛雙染色(2%醋酸鈾飽和乙醇，檸檬酸鉛)，置于透射電鏡下觀察并攝片。

⑦免疫組化(immunohistochemistry，ICH) 法觀察胃竇及空腸組織中5-HT的表達(dá)。切開胃竇和空腸組織，用 4%甲醛溶液固定，然后脫水。石蠟切片成厚4 μm切片，免疫組化染色后，置于顯微鏡下觀察并攝片。用ImageJ圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行陽性顯色的平均吸光度(A值)測(cè)定。將圖片調(diào)節(jié)為灰度圖片：Image/Type，將圖片改為8-bit；將8-bit灰度圖片轉(zhuǎn)換為A值：Analyze/Calibrate，選擇Uncalibrate OD；選擇需要測(cè)量的參數(shù)：Analyze/Set Measurements，選擇Integrated Density、Area、 Limit to Threshold；選擇陽性信號(hào)：Image/Adjust/Threshold調(diào)節(jié)閾值，選擇所有陽性信號(hào)；計(jì)算，分析結(jié)果：Analyze/Measure，得到平均A值(平均A值=積分A值/陽性區(qū)域面積)。

2 結(jié)果

2.1對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 結(jié)果見表1。與正常對(duì)照組比較，良附丸各劑量組小鼠的平均扭體次數(shù)均有不同程度減少，呈劑量依賴關(guān)系，表明良附丸能顯著抑制醋酸刺激所致小鼠扭體的次數(shù)[F(4，55)=30.723，P<0.01或P<0.05]。

表1 5組小鼠扭體反應(yīng)比較 Tab.1 Comparison of writhing response among five groups of mice

2.2對(duì)甲醛致小鼠舔足反應(yīng)的影響 結(jié)果見表2。與正常對(duì)照組比較，良附丸各劑量組和吲哚美辛組在1 min內(nèi)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；10 min時(shí)，良附丸各劑量組可略微減輕小鼠疼痛，吲哚美辛組能顯著降低小鼠疼痛；20～40 min時(shí)，良附丸各劑量組能降低甲醛致小鼠的疼痛值，其鎮(zhèn)痛作用隨時(shí)間延長(zhǎng)減弱，吲哚美辛組也能顯著降低小鼠的疼痛值[F(4，55)=46.891，P<0.01或P<0.05]。

表2 5組小鼠舔足反應(yīng)(疼痛評(píng)分)比較 Tab.2 Comparison of foot licking reaction(pain score) among five groups of mice

2.3小鼠胃排空與腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn) 結(jié)果見表3。與正常對(duì)照組比較，良附丸中、大劑量組小鼠胃排空率顯著升高[F(4，55)=9.558，P<0.01]。良附丸各劑量組小鼠小腸推進(jìn)率均有不同程度升高[F(4，55)=74.352，P<0.05或P<0.01])。

表3 5組小鼠胃排空率和腸推進(jìn)率比較 Tab.3 Comparison of gastric emptying rate and intestinal propulsion rate among five groups of mice

2.4胃寒型FD大鼠模型實(shí)驗(yàn)

2.4.1一般情況 各組大鼠第1天精神狀態(tài)良好，皮毛整齊有光澤，敏感活躍，糞便呈棕色、干燥、球形，抗捕性強(qiáng)；造模第6天，正常對(duì)照組大鼠無異常，其余各組大鼠精神尚可，活動(dòng)量如前，均有不同程度的毛發(fā)散亂，體形漸瘦，活動(dòng)減少，抓捕時(shí)掙脫束縛次數(shù)逐漸減少，糞便呈褐色等癥狀；造模第10天，正常對(duì)照組大鼠無異常，其余各組大鼠出現(xiàn)活動(dòng)量大幅減少，逐漸放棄掙扎，精神疲憊，聲音嘶啞，糞便呈黃色軟便等現(xiàn)象；造模第14天時(shí)，正常對(duì)照組大鼠未見異常，其余各組大鼠扎堆靜臥，神態(tài)疲倦，叫聲微弱，糞便呈時(shí)干時(shí)溏。

經(jīng)藥物治療7 d后，藥物組大鼠皮膚毛發(fā)及精神均較前明顯好轉(zhuǎn)，活動(dòng)度明顯增加，抓捕時(shí)開始掙扎反抗，糞便轉(zhuǎn)干。模型對(duì)照組大鼠一般狀態(tài)較造模時(shí)略有好轉(zhuǎn)，但與正常對(duì)照組比較在活動(dòng)和反應(yīng)等情況仍有明顯差異。

2.4.2體質(zhì)量、進(jìn)食量及飲水量 結(jié)果見圖1。14 d造模結(jié)束時(shí)，與正常對(duì)照組大鼠比較，其余各組大鼠體質(zhì)量均明顯下降(P<0.01)。治療7 d后，各給藥組大鼠的體質(zhì)量有所改善，但與正常對(duì)照組比較仍有明顯差異；與模型對(duì)照組大鼠比較，良附丸各劑量組和莫沙必利組的體質(zhì)量明顯增長(zhǎng)[F(5，66)=98.23，P<0.01或P<0.05]。良附丸和莫沙必利對(duì)FD模型大鼠體質(zhì)量、進(jìn)食量及飲水量降低有一定改善作用。

圖1 6組大鼠體質(zhì)量的變化 Fig.1 Body mass changes in six groups of rats

2.4.3對(duì)大鼠糖水消耗百分率的影響 見表4。治療前，給藥組、模型對(duì)照組大鼠的糖水偏好率與正常對(duì)照組相比均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而給藥組與模型對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，與正常對(duì)照組大鼠比較，模型對(duì)照組大鼠的糖水消耗百分率比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，良附丸各劑量組大鼠的糖水偏好百分率均有不同程度上升[F(5，66)=69.914，P<0.05或P<0.01]。

表4 6組大鼠糖水消耗百分率比較 Tab.4 Comparison of sugar water consumption percentage among six groups of rats

2.4.4對(duì)大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)得分的影響 見圖2。治療前，給藥組和模型對(duì)照組大鼠的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)得分與正常對(duì)照組相比均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而藥物組與模型對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組大鼠比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，良附丸各劑量組的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)得分均有不同程度上升[F(5，66)=165.758，114.778，152.498，120.388，P<0.05或P<0.01]，表明良附丸可能具有一定的抗焦慮作用。

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.莫沙必利組；D.良附丸小劑量組；E.良附丸中劑量組；F良附丸大劑量組。①與正常對(duì)照組比較，P<0.05；②與正常對(duì)照組比較，P<0.01；③與模型對(duì)照組比較，P<0.01；④與模型對(duì)照組比較，P<0.05。圖2 6組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)得分 A.normal control group；B.model control group；C.mosapride group；D.Liangfu pill low dose group；E.Liangfu pill middle dose group；F Liangfu pill high dose group.①Compared with normal control group，P<0.05；②Compared with normal control group，P<0.01.③Compared with model control group，P<0.01；④Compared with model control group，P<0.05.Fig.2 Horizontal locomotion and vertical locomotion scores in the open field test in six groups of rats

2.4.5ELISA法測(cè)定5-HT、MTL、VIP、SP水平 結(jié)果見表5。與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠的胃竇組織、空腸組織中5-HT、MTL、SP含量顯著下降，VIP的含量顯著升高。與模型對(duì)照組比較，給藥組大鼠的胃竇組織中、空腸組織中的5-HT含量明顯上升[F(5，66)=55.262，59.378，P<0.05或P<0.01]，MTL、SP的含量均明顯上升[F(5，66)=98.328，112.657，P<0.05或P<0.01]，VIP的含量顯著下降[F(5，66)=68.615，P<0.05或P<0.01]。說明良附丸能不同程度調(diào)節(jié)FD大鼠的胃腸組織中5-HT以及血清腦腸肽水平。

表5 6組大鼠5-HT、SP、MTL、VIP水平比較 Tab.5 Comparison of 5-HT，SP，MTL and VIP levels among six groups of rats

2.4.6透射電鏡觀察胃竇、結(jié)腸組織中嗜鉻細(xì)胞分布 腸嗜鉻細(xì)胞是腸道中的一種特化細(xì)胞，由腸上皮基底干細(xì)胞分化而來，雖然只占腸道上皮細(xì)胞的1%，但產(chǎn)生超過90%的體內(nèi)5-HT。電鏡下發(fā)現(xiàn)，呈圓形或橢圓形的腸嗜鉻細(xì)胞在正常胃黏膜和腸黏膜有較多分布，模型對(duì)照組相對(duì)較少，而與模型對(duì)照組比較，良附丸大劑量組嗜鉻細(xì)胞數(shù)量明顯增多(圖3)，提示其可能通過影響嗜鉻細(xì)胞進(jìn)而調(diào)節(jié)5-HT水平產(chǎn)生胃腸功能調(diào)節(jié)作用。

圖3 3組大鼠胃腸黏膜嗜鉻細(xì)胞分布情況(×2000) Fig.3 Distribution of chromaffin cells in gastrointestinal mucosa of three groups of rats(×2000)

2.4.7IHC法觀察胃竇及腸組織中5-HT的表達(dá) 結(jié)果見圖4，5。與模型對(duì)照組比較，良附丸中、大劑量組和莫沙必利組胃竇及腸組織中5-HT陽性表達(dá)明顯增高[F(5，30)=52.063，46.891，P<0.05或P<0.01]，表明良附丸可能通過調(diào)節(jié)5-HT表達(dá)改善FD模型的胃腸動(dòng)力障礙癥狀。

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.莫沙必利組；D.良附丸小劑量組；E.良附丸中劑量組；F良附丸大劑量組。①與模型對(duì)照組比較，P<0.01；②與模型對(duì)照組比較，P<0.05。圖4 6組大鼠胃竇中5-HT表達(dá)水平比較(×40) A.normal control group；B.model control group；C.mosapride group；D.Liangfu pill low dose group；E.Liangfu pill middle dose group；F Liangfu pill high dose group.①Compared with model control group，P<0.01；②Compared with model control group，P<0.05.Fig.4 Comparison of 5-HT expression levels in gastric antrum among six groups of rats(×40)

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.莫沙必利組；D.良附丸小劑量組；E.良附丸中劑量組；F良附丸大劑量組。①與模型對(duì)照組比較，P<0.01；②與模型對(duì)照組比較，P<0.05。圖5 6組大鼠空腸組織中5-HT表達(dá)水平比較(×40) A.normal control group；B.model control group；C.mosapride group；D.Liangfu pill low dose group；E.Liangfu pill middle dose group；F Liangfu pill high dose group.①Compared with model control group，P<0.01；②Compared with model control group，P<0.05.Fig.5 Comparison of 5-HT expression levels in jejunal tissues of six groups of rats(×40)

3 討論

良附丸具有溫胃散寒、理氣止痛功效，可以治療寒凝氣滯導(dǎo)致的上腹痛、腹脹等病癥。FD是一種常見的臨床綜合征，發(fā)病具有持續(xù)性或反復(fù)性的特點(diǎn)。FD的病理生理機(jī)制認(rèn)為是多種因素綜合而成的，但胃腸動(dòng)力障礙和內(nèi)臟超敏反應(yīng)是目前FD最重要和公認(rèn)的病理生理學(xué)基礎(chǔ)[11]。因此，本研究首先以胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)考察了良附丸的基本藥效。研究結(jié)果表明良附丸可明顯抑制醋酸、甲醛疼痛模型，且能促進(jìn)小鼠胃排空及小腸推進(jìn)，初步確定了其治療功能性消化不良的潛在作用。

目前 FD 較為經(jīng)典的造模方法是夾尾刺激法或加不規(guī)則飲食法[12]，模擬的是不良生活事件形成的心理應(yīng)激和飲食失調(diào)導(dǎo)致出現(xiàn)類似FD 癥狀。本研究胃寒型FD模型采用文獻(xiàn)加自身經(jīng)驗(yàn)的方法構(gòu)建，即采用郭氏夾尾刺激法+不規(guī)律飲食+0.9%氯化鈉溶液多因素干預(yù)方法，符合中醫(yī)實(shí)寒證的理論和表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)藥物治療7 d后，藥物組大鼠一般狀況明顯好轉(zhuǎn)，活動(dòng)度明顯增加，抓捕時(shí)開始掙扎反抗，糞便轉(zhuǎn)干；良附丸對(duì)模型大鼠體質(zhì)量、進(jìn)食量及飲水量降低也有一定的拮抗作用。糖水偏好實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，良附丸具有一定的抗焦慮作用。近年以來，腦腸軸與腦腸肽的異常被認(rèn)為是FD發(fā)病的重要病理生理基礎(chǔ)[13]。在影響胃腸的動(dòng)力因素中，5-HT是調(diào)整胃腸運(yùn)動(dòng)、分泌和感覺的關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)[14]。人體95%的5-HT分布在胃腸道的嗜鉻細(xì)胞和腸神經(jīng)元[15]。外周神經(jīng)系統(tǒng)90%的5-HT由嗜鉻細(xì)胞合成、分泌和再攝取。5-HT一方面可以直接影響胃腸平滑肌，另一方面可以通過調(diào)整其他神經(jīng)纖維影響胃腸運(yùn)動(dòng)，在調(diào)整胃腸動(dòng)力及腸道敏感性方面均起著重要作用。5-HT與受體結(jié)合增加后，腸道初級(jí)傳入神經(jīng)元興奮性增加，加速胃排空、增加內(nèi)臟敏感性。除此之外，腦腸肽MTL、VIP、SP等成分對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)也具有重要的調(diào)節(jié)作用[16-17]。本研究采用透射電鏡觀察胃竇、結(jié)腸組織中嗜鉻細(xì)胞，IHC法觀察檢測(cè)5-HT的表達(dá)，ELISA檢測(cè)5-HT、MTL、VIP、SP的含量。實(shí)驗(yàn)表明良附丸組嗜鉻細(xì)胞數(shù)量增多，胃竇、空腸組織中的5-HT含量相比模型對(duì)照組也有顯著增高，提示良附丸可能通過影響嗜鉻細(xì)胞進(jìn)而調(diào)節(jié)5-HT水平產(chǎn)生胃腸功能調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，本研究通過小鼠鎮(zhèn)痛與胃腸動(dòng)力實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了良附丸對(duì)FD的潛在治療作用；通過FD大鼠實(shí)驗(yàn)觀察到良附丸的抗焦慮作用以及通過調(diào)控5-HT、SP、MTL、VIP等的含量發(fā)揮治療FD的作用，從而為良附丸的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，下一步可針對(duì)其具體作用機(jī)制進(jìn)行深入研究。