張小紅，李江，張然蓉

華中科技大學(xué)協(xié)和深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518052

乙肝病毒是一種嗜肝病毒，存活在肝細(xì)胞當(dāng)中，如果患者的抵抗力較弱，乙肝病毒就會(huì)攻擊肝臟，導(dǎo)致慢性乙肝、乙肝肝硬化的形成[1]。乙肝肝硬化可分為早中晚期，早期肝硬化只是病理學(xué)上出現(xiàn)了改變，肝臟的形態(tài)學(xué)和功能均正常，當(dāng)病情發(fā)展為中晚期時(shí)，肝功能出現(xiàn)異常發(fā)生癌變形成肝癌[2]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)通過(guò)主動(dòng)調(diào)節(jié)的方式，抑制存在于正常機(jī)體內(nèi)潛在的自身反應(yīng)性T細(xì)胞的活化與增殖，具有控制和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能，在自身免疫疾病和癌癥的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[3]。白細(xì)胞介素10(IL-10)是一種參與炎癥和免疫抑制的細(xì)胞因子，通過(guò)抑制過(guò)度的炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，增強(qiáng)天然免疫，促進(jìn)組織修復(fù)機(jī)制，在感染和炎癥過(guò)程中發(fā)揮維持組織穩(wěn)態(tài)的重要作用[4]。白細(xì)胞介素12(IL-12)主要由樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等合成，它能促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，并促進(jìn)Th1細(xì)胞分泌干擾素γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等細(xì)胞因子，參與人體的免疫應(yīng)答[5]。本研究旨在探討慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者的Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12表達(dá)水平及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019年12月至2020年12月華中科技大學(xué)協(xié)和深圳醫(yī)院收治的180例肝病患者的臨床資料，根據(jù)疾病類(lèi)型將患者分為慢性乙肝65例，肝硬化60例，肝癌55例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①診療依從性良好，能夠配合各項(xiàng)診療者；②精神狀況良好，能夠正常進(jìn)行溝通、交流者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝肺綜合征、消化道出血者；②胰腺炎者；③免疫系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)絮亂者；④合并胃腸道惡性腫瘤者。另選擇同期在上述醫(yī)院體檢的60例健康志愿者作為對(duì)照組。四組受試者的年齡、性別比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)，所有受試者均對(duì)本研究知情并簽署同意書(shū)。

表1 四組受試者的年齡和性別比較

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) (1)慢性乙肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)為血清表面抗原和乙肝病毒DNA檢測(cè)均呈陽(yáng)性。肝功能指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)持續(xù)上升，肝組織學(xué)檢查有肝炎病變[6]。(2)肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)為肝臟質(zhì)地比較堅(jiān)韌或堅(jiān)硬，邊緣不規(guī)則，表面有結(jié)節(jié)感。CT影象學(xué)檢查表現(xiàn)為肝裂增寬，肝左右葉比例失調(diào)，生化學(xué)檢查一般伴有低蛋白血癥、血氨的升高、凝血功能的異常[7]。(3)肝癌的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)為肝臟占位病灶或手術(shù)切除的組織標(biāo)本，經(jīng)過(guò)病理組織學(xué)和活細(xì)胞學(xué)檢查，診斷為肝癌[8]。

1.3 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法 (1)比較四組受試者的Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12表達(dá)水平。Treg細(xì)胞：四組受試者通過(guò)超高靈敏度多色流式細(xì)胞儀(型號(hào)：Amnis Cell Stream，廠家：Luminex Corporation)從外周血中檢測(cè)Treg含量。血清IL-10、IL-12：四組受試者在入院后抽取肘間靜脈血10 mL，靜置20 min后，按3 000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心20 min，提取血清液冷凍待檢提取待檢血清5 mL，采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清IL-10、IL-12水平，所使用的試劑盒由廣州瑞博奧生物科技有限公司提供。(2)比較四組受試者的肝功能指標(biāo)水平。提取血清液冷凍待檢提取待檢血清5 mL，通過(guò)采用全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)：TBA-FX8，廠家：安圖生物科技有限公司)對(duì)ALT、總膽紅素(TBIL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)進(jìn)行檢測(cè)。(3)分析Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12水平與ALT、TBIL、AST水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，采用Pearson相關(guān)分析法分析相關(guān)性。均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組受試者的Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12表達(dá)水平比較 對(duì)照組、慢性乙肝組、肝硬化組和肝癌組患者的Treg細(xì)胞、血清IL-10、IL-12水平均逐漸升高，其中肝癌組患者的Treg細(xì)胞含量、血清IL-10、IL-12水平均明顯高于肝硬化組、慢性乙肝組和對(duì)照組，肝硬化組患者的Treg細(xì)胞、血清IL-10、IL-12水平均明顯高于慢性乙肝組、對(duì)照組，慢性乙肝組患者的Treg細(xì)胞、血清IL-10、IL-12水平均明顯高于對(duì)照組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 四組受試者的Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12表達(dá)水平比較(x-±s)

2.2 四組受試者的肝功能指標(biāo)水平比較 對(duì)照組、慢性乙肝組、肝硬化組和肝癌組患者的血清ALT、TBIL、AST水平均逐漸升高，其中肝癌組患者的血清ALT、TBIL、AST水平均明顯高于肝硬化組、慢性乙肝組和對(duì)照組，肝硬化組患者的血清ALT、TBIL、AST水平均明顯高于慢性乙肝組、對(duì)照組，慢性乙肝組患者的血清ALT、TBIL、AST水平均明顯高于對(duì)照組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 四組受試者的肝功能指標(biāo)水平比較(±s)

表3 四組受試者的肝功能指標(biāo)水平比較(±s)

注：與對(duì)照組比較，a P＜0.05；與慢性乙肝組比較，b P＜0.05；與肝硬化組比較，c P＜0.05。

組別對(duì)照組慢性乙肝組肝硬化組肝癌組F值P值例數(shù)60 65 60 55 ALT(U/L)28.18±6.15 100.26±18.75 a 115.20±20.38ab 140.12±27.04 abc 360.122 0.001 TBIL(μmol/L)15.02±4.27 39.98±6.53 a 50.04±8.61 ab 66.57±10.80 abc 440.102 0.001 AST(U/L)30.32±5.04 75.50±10.62 a 97.22±19.48 ab 130.09±30.26 abc 296.969 0.001

2.3 Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12水平與ALT、TBIL、AST水平的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12水平與ALT、TBIL、AST水平均呈正相關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表4。

表4 Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12水平與ALT、TBIL、AST水平的相關(guān)性

3 討論

肝硬化由慢性乙型病毒性肝炎發(fā)展而來(lái)，乙型肝炎病毒(HBV)感染肝細(xì)胞后，由于體內(nèi)免疫細(xì)胞的攻擊，引起肝細(xì)胞炎癥壞死，導(dǎo)致肝臟逐漸變硬、變形，從而發(fā)展為肝硬化[9]。由于體內(nèi)存在乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)，新生的肝細(xì)胞不斷被炎癥反應(yīng)破壞，肝硬化的病情還在進(jìn)展[9]。若不及時(shí)治療，肝部組織的炎癥破壞繼續(xù)發(fā)展，肝纖維化程度會(huì)繼續(xù)加重，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，纖維組織增生，肝臟細(xì)胞假小葉形成，而假小葉的形成容易導(dǎo)致肝硬化，反復(fù)的肝硬化最后導(dǎo)致肝癌的形成，嚴(yán)重?fù)p害患者的肝功能[10]。

Treg細(xì)胞是一種人體自身存在的免疫細(xì)胞，維持人體正常的免疫功能，與各種細(xì)胞因子進(jìn)行結(jié)合促進(jìn)免疫反應(yīng)，對(duì)各種自身性的免疫系統(tǒng)疾病有很大影響，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病、肺癌、胰腺癌等疾病中患者的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)值偏高，會(huì)導(dǎo)致抵抗外界細(xì)菌的能力降低，引發(fā)免疫細(xì)胞對(duì)自身細(xì)胞產(chǎn)生免疫反應(yīng)[11]。IL-10由效應(yīng)T淋巴細(xì)胞和Treg細(xì)胞產(chǎn)生，能夠抑制巨噬細(xì)胞的特異性免疫功能，加強(qiáng)免疫誘導(dǎo)，抑制巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子，減少黏附分子的表達(dá)。當(dāng)IL-10表達(dá)過(guò)多時(shí)會(huì)抑制機(jī)體的免疫作用，誘發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、子宮內(nèi)膜癌、淋巴瘤，從而導(dǎo)致腫瘤的生長(zhǎng)[12]。IL-12是一種被廣泛研究的促炎細(xì)胞因子，它通過(guò)激活NK細(xì)胞和T細(xì)胞，在先天免疫和適應(yīng)性免疫之間建立聯(lián)系，從而有效促進(jìn)抗腫瘤免疫反應(yīng)。外源性IL-12對(duì)腫瘤的影響目前已在小鼠、人體中展開(kāi)研究[13]。本研究結(jié)果顯示，慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者的Treg細(xì)胞、血清IL-10、IL-12水平均逐漸升高。通過(guò)分析是由于Treg細(xì)胞的免疫抑制作用，既能防御人體發(fā)生自身免疫性疾病，又能促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，間接加快了腫瘤細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)能力，對(duì)炎性細(xì)胞的抑制減弱，加劇炎性細(xì)胞合成、分泌、釋放IL-12，與夏天等[14]研究中癌組織或癌細(xì)胞均可產(chǎn)生IL-10的報(bào)道一致。此外慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者的肝功能指標(biāo)ALT、TBIL、AST水平均逐漸升高，通過(guò)分析是由于HBV復(fù)制與增殖活躍，造成肝細(xì)胞大量壞死，導(dǎo)致肝臟炎癥加劇，形成肝纖維化，肝臟組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生惡性的病變，故導(dǎo)致肝功能減退，血清ALT、TBIL、AST水平升高[15]。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12水平與ALT、TBIL、AST水平均呈正相關(guān)。通過(guò)分析是由于Treg細(xì)胞能分泌IL-10，IL-12也能誘導(dǎo)IL-10的生成，三者水平的升高會(huì)加重肝臟的炎癥程度以及肝細(xì)胞的受損程度，引發(fā)肝細(xì)胞壞死。ALT、AST主要分布在肝細(xì)胞內(nèi)，肝細(xì)胞壞死會(huì)直接導(dǎo)致ALT、AST升高，與此同時(shí)肝細(xì)胞損傷會(huì)造成膽紅素代謝過(guò)程中斷，膽汁就無(wú)法正常排泄，導(dǎo)致排入血液中增多，從而導(dǎo)致TBIL水平升高。本研究的不足之處在于未分析免疫功能和凝血功能指標(biāo)的變化，因此有待后續(xù)深入研究。

綜上所述，慢性乙肝、肝硬化及肝癌患者Treg細(xì)胞、IL-10、IL-12表達(dá)水平的升高與肝功能障礙密切相關(guān)，對(duì)其檢測(cè)有助于對(duì)病情的評(píng)估和后期治療提供數(shù)據(jù)參考。