張玉富，景蕓蕓，鄔迎喜，張?zhí)N澤，陳隆

空軍軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，西安 710038

腦膠質(zhì)瘤屬于神經(jīng)上皮性腫瘤，病死率較高，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原發(fā)腫瘤，源于神經(jīng)外胚層，其特點為呈浸潤性生長或膨脹性生長，與周圍正常腦組織界限不清，手術(shù)難以完全切除，且術(shù)后復(fù)發(fā)率較高。據(jù)統(tǒng)計，腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。Ⅰ～Ⅱ級膠質(zhì)瘤生長緩慢，病程長，但術(shù)后復(fù)發(fā)率高。Ⅲ～Ⅳ級膠質(zhì)瘤生長迅速，病程短，且瘤體占位性效應(yīng)可引起嘔吐、視神經(jīng)萎縮和癲癇等。膠質(zhì)瘤的起病機(jī)制較為復(fù)雜，常與多種因素密切相關(guān)。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床對膠質(zhì)瘤的檢查、診斷更為快捷[2]。第10 號染色體缺失性磷酸酯酶與張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[3]。Ki-67 是一種抗增殖細(xì)胞核蛋白的單克隆抗體，可準(zhǔn)確反映細(xì)胞增殖活性，用于評價腫瘤的生物學(xué)行為[4]。因此，有研究認(rèn)為，PTEN、Ki-67 與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5-6]。因此，本研究探討PTEN、Ki-67 在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015 年10 月至2018 年12 月空軍軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的腦膠質(zhì)瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合腦膠質(zhì)瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)CT、MRI 檢查及術(shù)后病理學(xué)檢查確診；②均為原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤；③未出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液系統(tǒng)疾病；②合并其他惡性腫瘤；③合并臟器功能異常；④合并免疫系統(tǒng)疾病或結(jié)締組織病變。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入152 例腦膠質(zhì)瘤患者，其中男87 例，女65 例；年齡51～80 歲，平均（63.09±6.49）歲；世界衛(wèi)生組織（WHO）腦膠質(zhì)瘤分級：Ⅰ～Ⅱ級（惡性程度較低）90 例，Ⅲ～Ⅳ級（惡性程度較高）62 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測PTEN、Ki-67蛋白的表達(dá)情況

取152 例腦膠質(zhì)瘤患者的腫瘤組織及相應(yīng)的癌旁組織，免疫組化法檢測PTEN、Ki-67 蛋白的表達(dá)情況。組織標(biāo)本切片、脫蠟、水化處理后，浸泡于3%過氧化氫中20 min，封閉其內(nèi)源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復(fù)，溫水清洗后使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）清洗3 次，每次5 min，滴加10%血清以阻斷非特異性結(jié)合，37 ℃孵育10 min。滴加一抗兔抗人Ki-67 多克隆抗體（1∶400）、鼠抗人PTEN 單克隆抗體（1∶400），4 ℃過夜，PBS 再次清洗，滴加生物素標(biāo)記的Ki-67、PTEN 二抗，37 ℃孵育10 min，PBS清洗3 次后，滴加過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min。二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、干燥后中性樹脂封片，用PBS 代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定：選擇5 個不同視野進(jìn)行全面觀察，每個視野中細(xì)胞應(yīng)不少于200 個，計算每個視野中陽性細(xì)胞所占比例。陽性細(xì)胞所占比例﹤5%為陰性，陽性細(xì)胞所占比例5%～50%為弱陽性，陽性細(xì)胞所占比例﹥50%為強(qiáng)陽性，其中弱陽性、強(qiáng)陽性判定為陽性[7]。

1.3 隨訪

采用電話、微信、回院復(fù)查等方式對所有患者進(jìn)行為期1 年的隨訪，記錄并統(tǒng)計患者的預(yù)后情況，以全因性死亡或復(fù)發(fā)再入院為隨訪終點，隨訪截止時間為2019 年12 月，并將全因性死亡或復(fù)發(fā)再入院作為預(yù)后不良的標(biāo)準(zhǔn)，分析腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響因素采用多元Logistic 回歸分析；以P﹤0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67、PTEN 表達(dá)情況的比較

腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，PTEN 的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。Ⅲ～Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ級患者，PTEN 的陽性表達(dá)率明顯低于Ⅰ～Ⅱ級患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。（表1、表2）

表1 腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織和癌旁組織中Ki-67、PTEN表達(dá)情況的比較[n（%）]

表2 不同分級腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中Ki-67、PTEN 表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后影響因素的單因素分析

隨訪1 年，152 例腦膠質(zhì)瘤患者中，預(yù)后不良47例，預(yù)后良好105 例。單因素分析結(jié)果顯示，預(yù)后不良和預(yù)后良好腦膠質(zhì)瘤患者年齡、性別、合并高血壓、合并糖尿病、合并冠心病情況比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；預(yù)后不良和預(yù)后良好腦膠質(zhì)瘤患者WHO分級、Ki-67表達(dá)情況、PTEN表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。（表3）

表3 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后影響因素的單因素分析

2.3 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的WHO分級、Ki-67 表達(dá)情況、PTEN 表達(dá)情況作為自變量，腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后作為因變量納入多元Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示，WHO 分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達(dá)、PTEN 陰性表達(dá)均為腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立危險因素（P﹤0.01）。（表4）

表4 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后影響因素的多元Logistic回歸分析

3 討論

腦膠質(zhì)瘤根據(jù)臨床病理類型可分為星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、混合型少突星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤及室管膜瘤，其中以星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤最為常見[8]。統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，腦膠質(zhì)瘤占原發(fā)性腦腫瘤的40%～50%，多呈浸潤性生長，治療十分困難[9-10]。雖然影像學(xué)檢查技術(shù)的不斷進(jìn)步和顯微神經(jīng)外科技術(shù)的應(yīng)用對神經(jīng)外科的發(fā)展發(fā)揮了明顯的促進(jìn)作用，但對惡性腦腫瘤的治療似乎并沒有突破性進(jìn)展，惡性程度較高的膠質(zhì)瘤患者大多在確診1 年內(nèi)死亡。近年來，分子生物學(xué)認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與基因的異常表達(dá)密切相關(guān)，腫瘤的發(fā)生與原癌基因激活及過表達(dá)、抑癌基因缺失及突變有關(guān)，是細(xì)胞增殖和凋亡失衡等多基因參與、多步驟演變的過程，并認(rèn)為這些基因的變異和失控會導(dǎo)致基因編碼與表型的不恰當(dāng)表達(dá)，以細(xì)胞的生長繁殖不受控制為特征[11-13]。

本研究結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中Ki-67的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，PTEN的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，與既往研究結(jié)果相似[14]。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核內(nèi)蛋白，普遍存在于人類增生細(xì)胞核中，具有半衰期短的特點，與細(xì)胞周期關(guān)系密切，還與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，Ki-67過表達(dá)可反映腫瘤細(xì)胞增殖活性過度[15]。PTEN 屬于抑癌基因，具有磷酸酶活性，通過發(fā)揮磷酸酶活性來減弱磷酸根活性，阻斷細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)化，對腫瘤發(fā)生、發(fā)展起負(fù)調(diào)控作用[16]。有研究認(rèn)為，Ki-67 表達(dá)上調(diào)、PTEN 表達(dá)下調(diào)提示膠質(zhì)瘤病理級別較高[17]。本研究結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達(dá)明顯高于Ⅰ～Ⅱ級患者，PTEN 的陽性表達(dá)率明顯低于Ⅰ～Ⅱ級患者。這可能是因為PTEN屬于抑癌基因，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的正常生長和發(fā)育，通過作用于細(xì)胞周期蛋白來抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程；而Ki-67 是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核內(nèi)蛋白，其過表達(dá)可明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖[18-20]。本研究多元Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，WHO 分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達(dá)、PTEN 陰性表達(dá)均為腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立危險因素（P﹤0.01）。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達(dá)率較高、PTEN 的陽性表達(dá)率較低，WHO分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達(dá)、PTEN 陰性表達(dá)均為腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立危險因素。