俞方毅，寧波，葉勁超，梁一鳴，陳家祥，許智蕾

（廣州市紅十字會醫(yī)院 神經(jīng)外科，廣東 廣州 510220）

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GBM）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的惡性程度高、預(yù)后差的腫瘤，其中位生存期大約只有12個月。目前的治療方法以個體化的綜合治療為主，包括腫瘤切除、輔助放射療法和化學(xué)療法等［1］。迄今為止，通過多種機(jī)制殺傷腫瘤細(xì)胞并且能夠跨越血腦屏障的以蛋白酶體為靶點(diǎn)的藥物可能是一種很有前途的治療靶標(biāo)。癌細(xì)胞比正常細(xì)胞更容易受到蛋白酶體抑制，可以通過抑制蛋白酶體活性來選擇性誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。馬利佐米是一種新型蛋白酶體類藥物，表現(xiàn)出強(qiáng)大的蛋白酶體抑制特性，并且最重要的是，它能透過血腦屏障，使其成為潛在的非常有效的可治療腦腫瘤的新型藥物［2］。與其他治療策略結(jié)合利用蛋白酶體抑制劑的生物學(xué)效應(yīng)可能代表其臨床應(yīng)用的關(guān)鍵一步。為此，本研究利用馬利佐米和替莫唑胺兩種藥物聯(lián)合治療裸鼠，探討是否縮小腫瘤、延長生存時間，為惡性膠質(zhì)瘤的化療方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 顱內(nèi)移植膠質(zhì)瘤模型在32只NU／NU裸鼠顱內(nèi)移植入人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U-251，4天后隨機(jī)分為四組，每組8只。馬利佐米組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈靜注馬利佐米，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為200μg·kg-1·d-1；替莫唑胺組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈給替莫唑胺，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25 mg·kg-1·d-1；聯(lián)合藥物組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈給質(zhì)量分?jǐn)?shù)為200μg·kg-1·d-1馬利佐米及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25 mg·kg-1·d-1替莫唑胺；空白組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈給相同劑量的體積分?jǐn)?shù)為0.9%氯化鈉溶液。

1.2 觀察指標(biāo)使用IVIS影像系統(tǒng)及Living image軟件記錄移植瘤影像并計(jì)算移植后20 d的移植瘤體積，記錄裸鼠的生存期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 25.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用單因素方差分析，組內(nèi)進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Log-rank檢驗(yàn)比較小鼠的生存率。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 裸鼠移植膠質(zhì)瘤體積移植后20 d，馬利佐米和替莫唑胺聯(lián)合藥物組小鼠的移植瘤體積小于對照組、馬利佐米組和替莫唑胺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同治療方案對四組裸鼠移植瘤體積的影響

2.2 生存曲線采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，聯(lián)合藥物組、馬利佐米組、替莫唑胺組和對照組小鼠的中位生存時間分別為66天、32天、33天和23天；Log-rank檢驗(yàn)顯示，聯(lián)合藥物組小鼠的生存率高于馬利佐米組、替莫唑胺組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。見圖1。

圖1 四組顱內(nèi)移植膠質(zhì)瘤模型裸鼠的生存曲線比較

3 討論

目前，盡管包括替莫唑胺在內(nèi)的通過鳥嘌呤O6堿基來誘導(dǎo)DNA損傷和抑制DNA轉(zhuǎn)錄的烷化劑廣泛應(yīng)用于惡性膠質(zhì)瘤的綜合治療中，但膠質(zhì)瘤患者仍然存在非常差的預(yù)后和很短的中位生存期，并且單一藥物的治療活性可能會隨著時間的流逝而降低，因?yàn)槟[瘤細(xì)胞可能會變得耐藥，故需要對合適的替莫唑胺藥物伴侶進(jìn)行進(jìn)一步的探索研究。蛋白酶體是細(xì)胞維持各種功能的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的降解，因此可以防止變性、錯誤折疊以及老化的蛋白質(zhì)積聚導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［3］。蛋白酶體抑制劑通過多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞增殖和促進(jìn)其凋亡，比如抑制蛋白酶會影響細(xì)胞質(zhì)中NF-κB復(fù)合物的穩(wěn)定，然而，許多腫瘤細(xì)胞（例如多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞）需要完整的NF-κB信號傳導(dǎo)來維持增殖和生存能力［4］。另外，蛋白酶體的抑制還可以增加腫瘤抑制蛋白（如p27和p53）的穩(wěn)定性，從而減少腫瘤細(xì)胞的增殖［5］?？傊?，干擾泛素-蛋白酶體途徑活性的藥物通過多種途徑破壞細(xì)胞，并導(dǎo)致增殖停止或誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。

最初的體外研究［6］顯示，暴露于抑制蛋白酶體的藥物會導(dǎo)致廣泛的源自血液學(xué)和實(shí)體瘤的癌細(xì)胞增殖停止并誘導(dǎo)凋亡。馬利佐米是一種不可逆的β-內(nèi)酯類抑制劑，與其他蛋白酶體抑制劑相似，馬利佐米在體外和臨床前腫瘤模型中均顯示出強(qiáng)大的抗癌活性。與其他蛋白酶體抑制劑相反，馬里佐米能透過血腦屏障，從而使其成為中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的一種極具潛能的治療選擇。進(jìn)一步的研究［7］顯示，膠質(zhì)瘤細(xì)胞暴露于馬利佐米會導(dǎo)致含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶依賴性細(xì)胞死亡。為此本研究設(shè)計(jì)了這兩種不同作用機(jī)制的藥物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞顱內(nèi)移植小鼠療效的活體實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，移植后20 d，馬利佐米和替莫唑胺聯(lián)合藥物組小鼠的移植瘤體積小于對照組、馬利佐米組和替莫唑胺組（P＜0.05）；另外，Kaplan-Meier生存曲線提示聯(lián)合藥物組、馬利佐米組、替莫唑胺組和對照組小鼠的中位生存時間分別為66天、32天、33天和23天；Logrank檢驗(yàn)顯示，聯(lián)合藥物組小鼠的生存率高于對照組、馬利佐米組和替莫唑胺組小鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并且較馬利佐米和替莫唑胺單藥治療的生存時間顯著延長。上述結(jié)果表明，馬利佐米聯(lián)合替莫唑胺可能是延長膠質(zhì)瘤患者生存時間的理想化療方案；同時，馬利佐米聯(lián)合替莫唑胺能延長生存時間的原因之一可能是兩藥聯(lián)合協(xié)同縮小膠質(zhì)瘤體積。但小鼠模型不能完全復(fù)制人體對藥物的反應(yīng)，因此，還需進(jìn)一步的臨床前實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證馬利佐米聯(lián)合替莫唑胺對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的療效以及藥物的安全性。