禹小波 郭文廠 唐慶芝 李 盼 裴 穎 周佩佩 陳大朋 孔貞貞

1.山東省濟寧市中醫(yī)院藥劑科，山東濟寧 272000；2.大連醫(yī)科大學實驗動物中心，遼寧大連 116044；3.泰山護理職業(yè)學院藥學檢驗系，山東泰安 271000

高脂血癥是由于脂肪代謝或運轉異常，使血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglycerides，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterin，LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）過高或過低而引發(fā)冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ê喎Q冠心?。?、高血壓等心腦血管疾病[1]。臨床研究證明載脂蛋白A1（apolipoprotein A1，ApoA1）及載脂蛋白B （apolipoprotein B，ApoB）也是預測動脈粥樣硬化性心血管疾病比較有價值的指標[2]。其中ApoB是構成LDL的重要成分，而ApoA1則是構成HDL的主要成分[3-4]。

他汀類藥物在降血脂方面具有顯著療效，但同時可能出現橫紋肌溶解、肝腎功能損傷等嚴重不良反應[5-6]。山楂、何首烏、白術、梔子、郁金等單味中藥[7]或大柴胡湯[8]、澤瀉湯[9]、葛根芩連湯[10]等中藥復方均具有顯著的降血脂效果。濟寧市中醫(yī)院（本院）將茵陳、郁金、何首烏、山楂等七味中藥經過配制成的院內制劑茵黃丸具有清熱利濕、疏肝健胃、活血化瘀的作用，但其具體作用機制研究較少。本研究旨在探討不同劑量的茵黃丸對高脂血癥模型大鼠的降脂作用及機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 2～3周齡Wistar大鼠48 只，體重180～220 g，購于大連醫(yī)科大學實驗動物中心。并于大連醫(yī)科大學實驗動物中心SPF級動物房飼養(yǎng)[SYXK（遼）2018-0007]。飼養(yǎng)溫度為20℃～24℃，飼養(yǎng)濕度為50%～60%，12 h光照/黑暗周期。所有動物試驗操作均符合大連醫(yī)科大學動物科學實驗倫理學的要求。

1.1.2 主要試劑與藥物 TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1及ApoB檢測試劑盒均購自江蘇科特生物科技有限公司。阿托伐他汀鈣片（齊魯制藥有限公司，批號：1A0784DL3）。茵黃丸（批號：20200712），由茵陳、郁金、何首烏、山楂等七味中藥配制而成。普通飼料購自大連醫(yī)科大學動物科學院實驗動物中心。高脂飼料配方為豬油20 g、膽固醇10 g、蔗糖10 g、丙硫氧嘧啶1 g、吐溫-801 ml、丙二醇2 ml及10%膽鹽20 ml，加蒸餾水至100 ml，制備好之后存儲于4℃冰箱備用。

1.2 方法

1.2.1 動物造模 空白對照組8只大鼠給予基礎普通飼料喂養(yǎng)，剩余40只大鼠為造模組，飼喂高脂飼料建立高脂血癥大鼠模型。大鼠喂養(yǎng)2周后，禁食不禁水12 h。眼眶靜脈叢采血，測定TG、TC、LDL-C等血脂指標，檢測模型制造是否成功。

1.2.2 動物分組 挑選造模組大鼠隨機分為5組：茵黃丸低劑量組、茵黃丸中劑量組、茵黃丸高劑量組、阿托伐他汀鈣組及高脂血癥模型組，每組各8只。

1.2.3 給藥方法及血樣采集 根據人與實驗動物用藥劑量的換算方法，計算公式：B（dose）=W×A（dose），其中W為折算系數，成人與大鼠之間的折算系數為6.25。茵黃丸低劑量組按每天0.375 g/kg劑量給藥，茵黃丸中劑量組按0.75 g/kg劑量給藥，茵黃丸高劑量組按1.5 g/kg劑量給藥（分別相當于人用劑量的3、6、12倍）。空白對照組及高脂血癥模型組每天給予等體積生理鹽水。阿托伐他汀鈣組每天給予0.06 g/kg劑量的阿托伐他汀鈣片。持續(xù)給藥2周。末次給藥后禁食12 h，腹腔注射10%水合氯醛后大鼠心臟動脈取血，分離血清進行相關生化指標測定。

1.3 相關指標的測定

1.3.1 血清生化指標測定 取制備的血液按照試劑盒方法測定TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1及ApoB含量。

1.3.2 肝臟組織切片 采用蘇木精-伊紅（hematoxylin eosin，HE）染色方法[11]，觀察大鼠肝臟病理學形態(tài)變化。采血結束后所有大鼠均采用頸椎脫臼法處死。解剖收集肝臟組織，用生理鹽水清洗后立即置于4%多聚甲醛中固定24 h，制備常規(guī)石蠟包埋組織切片。對組織切片進行HE染色并觀察肝臟組織形態(tài)學變化。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析，計量資料采用均數±標準差（）表示，各給藥組數據與同期對照組數據分別進行顯著性檢驗，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組樣本間的比較檢驗正態(tài)性和方差齊性符合后，采用單因素方差分析和Post Hoc LSD進行組間統(tǒng)計分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 動物模型成功性考察

造模組血清TC、TG、LDL-C含量較空白對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。表明高脂血癥大鼠模型建造成功。見表1。

表1 連續(xù)喂養(yǎng)2周高脂飼料對大鼠血脂水平的影響（mmol/L，±s）

表1 連續(xù)喂養(yǎng)2周高脂飼料對大鼠血脂水平的影響（mmol/L，±s）

注 TG：三酰甘油；TC：總膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇

組別 n TG TC LDL-C空白對照組 8 0.51±0.03 1.82±0.11 0.53±0.09造模組 40 1.01±0.03 3.26±0.21 2.18±0.26 t值 37.720 17.108 17.097 P值 0.000 0.000 0.000

2.2 茵黃丸對大鼠體重的影響

實驗持續(xù)4周后，與高血脂癥模型組比較，茵黃丸低劑量組、茵黃丸中劑量組、茵黃丸高劑量組均能顯著降低高脂血癥大鼠體重，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。并且茵黃丸劑量越大，降體重作用越顯著。見表2。

表2 茵黃丸對高脂血癥模型大鼠體重增值的影響（g，±s）

表2 茵黃丸對高脂血癥模型大鼠體重增值的影響（g，±s）

注 與高脂血癥模型組比較，aP ＜ 0.05。體重增值為大鼠喂養(yǎng)4周后質量的增加值

組別 n 體重質量增值空白對照組 8 187.57±11.40高脂血癥模型組 8 273.23±7.85茵黃丸低劑量組 8 217.53±10.79a茵黃丸中劑量組 8 215.40±14.96a茵黃丸高劑量組 8 182.50±5.55a阿托伐他汀鈣組 8 177.07±17.81a F值 39.164 P值 0.000

2.3 茵黃丸對高脂血癥模型大鼠肝臟病理學變化的影響

HE 染色顯示，空白對照組肝組織結構正常，肝細胞無脂肪變性。模型組大鼠肝細胞呈現不同程度脂肪變性，肝臟組織內可見大小不一的脂滴。與高脂血癥模型組比較，茵黃丸低劑量組、茵黃丸中劑量組、茵黃丸高劑量組肝臟組織脂滴數量降低顯著。見圖1。

圖1 茵黃丸對高脂血癥大鼠肝臟的影響（HE染色，100×）

2.4 茵黃丸對高脂血癥大鼠血清血脂水平影響

茵黃丸低劑量組、茵黃丸中劑量組、茵黃丸高劑量組對高脂血癥大鼠血清TC、TG均有降低作用，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。見表3。

表3 茵黃丸對高脂血癥大鼠血清TC、TG的影響（mmol/L，±s）

表3 茵黃丸對高脂血癥大鼠血清TC、TG的影響（mmol/L，±s）

注 與高脂血癥模型組比較，aP＜0.05；TC：總膽固醇；TG：三酰甘油

組別 n TC TG高脂血癥模型組 8 4.24±0.27 1.25±0.09 茵黃丸低劑量組 8 3.67±0.22a 0.95±0.08a茵黃丸中劑量組 8 3.29±0.57a 0.85±0.08a茵黃丸高劑量組 8 3.11±0.69a 0.58±0.04a阿托伐他汀鈣組 8 2.77±0.56a 0.57±0.02a F值 6.323 82.727 P值 0.002 0.000

2.5 茵黃丸對高脂血癥大鼠血清ApoA1、HDL-C、ApoB、LDL-C水平影響

與高脂血癥模型組比較，茵黃丸低劑量組高脂血癥大鼠血清ApoA1、HDL-C差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05），而茵黃丸中劑量、茵黃丸高劑量組對于高脂血癥大鼠血清ApoA1，HDL-C均具有顯著升高作用，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。茵黃丸低劑量組、茵黃丸中劑量組及茵黃丸高劑量組對高脂血癥大鼠血清ApoB，LDL-C均具有顯著降低作用，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。見表4。

表4 茵黃丸對高脂血癥大鼠血清ApoA1、HDL-C、ApoB、LDL-C的影響（±s）

表4 茵黃丸對高脂血癥大鼠血清ApoA1、HDL-C、ApoB、LDL-C的影響（±s）

注 與高脂血癥模型組比較，aP ＜ 0.05。ApoA1：載脂蛋白A1；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；ApoB：載脂蛋白B；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇

組別 n ApoA1（g/L） HDL-C（mmol/L） ApoB（g/L） LDL-C（mmol/L）高脂血癥模型組 8 0.09±0.02 0.66±0.10 0.23±0.02 4.18±0.51茵黃丸低劑量組 8 0.12±0.02 0.69±0.02 0.14±0.02a 3.47±0.36a茵黃丸中劑量組 8 0.13±0.01a 0.90±0.06a 0.13±0.04a 2.54±0.38a茵黃丸高劑量組 8 0.14±0.02a 0.98±0.07a 0.12±0.03a 1.51±0.10a阿托伐他汀鈣組 8 0.17±0.02a 1.050±0.14a 0.11±0.03a 1.01±0.25a F值 13.169 20.906 15.664 71.027 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

高脂血癥可顯著增加動脈粥樣硬化、冠心病等心腦血管疾病的發(fā)病率，危害人類健康[12]。有效控制血脂異常，對防治動脈硬化性心血管疾病等具有重要意義。血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C等含量在一定程度上反映機體脂肪代謝情況，是監(jiān)測血脂變化的重要指標[13]。本研究發(fā)現，茵黃丸可通過降低TC、TG、LDL-C、ApoB濃度，升高HDL-C、ApoA1濃度，進而改善高脂血癥大鼠脂代謝異常。同時脂代謝異?？赡軙е轮居绕涫荰G在內臟器官或者皮下組織沉積，導致體重增加。茵黃丸可通過促進大鼠TG代謝，減少脂肪在機體的沉積，進而降低大鼠體重和肝臟脂滴數量，保護肝臟細胞。而茵黃丸的主要成分茵陳、郁金、何首烏及山楂共同發(fā)揮調節(jié)血脂作用。

茵陳的主要成分為對羥基苯乙酮，具有調血脂、促進膽汁和膽汁酸分泌、降低膽固醇分泌的功效[14]。文獻報道，茵陳提取物可有效降低小鼠血清及組織TC、TG含量，且具有抗脂質過氧化和抗肝細胞壞死的作用[15-16]。何首烏的主要成分為二苯乙烯苷及蒽醌類，可顯著降低高脂血癥模型小鼠血清TC、TG含量，下調主動脈斑塊NF-κB蛋白表達，降低動脈粥樣硬化指數等[17]。山楂中的山楂黃酮及山楂籽油均具有調血脂作用。山楂黃酮可顯著降低大鼠血清TC、TG、LDL濃度；山楂籽油可通過抑制肝脂酶、脂蛋白脂酶及卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶的活性，從而降低TC、TG含量，促進HDL合成[18]。郁金提取物能顯著降低高膽固醇模型兔血清脂質過氧化物酶，提高α-生育酚和輔酶Q水平而發(fā)揮調血脂作用[19]。

茵陳、何首烏、山楂及郁金等在臨床常用于降血脂。本研究初步探討配伍中成藥茵黃丸降血脂作用機制。后期將繼續(xù)深入研究茵黃丸是否通過抗脂質過氧化[20]、調節(jié)炎癥因子和炎癥相關細胞來抑制炎癥反應及毒性作用等方面發(fā)揮降血脂作用，為茵黃丸的臨床應用提供更全面的科學依據。