于亞莉，蒲奕靈，高綠莎，孫冰玉，仲大業(yè)，高 峰*

（1 吉林大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 長(zhǎng)春 130062 2 吉林省四平市糧食物資管理中心 吉林四平 136000 3 吉林大學(xué)體育學(xué)院 長(zhǎng)春 130062）

疲勞（Fatigue）是一種普遍的醫(yī)學(xué)和神經(jīng)學(xué)上的癥狀[1]，指軀體在生理活動(dòng)過(guò)程中不能開(kāi)始或持續(xù)某一特定強(qiáng)度的活動(dòng)狀態(tài)[2]，包括神經(jīng)性疲勞、運(yùn)動(dòng)性疲勞及心理性疲勞。其中，運(yùn)動(dòng)性疲勞又稱(chēng)體力疲勞，多指人在進(jìn)行重體力勞動(dòng)、大運(yùn)動(dòng)量鍛煉時(shí)，由于時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，肌肉過(guò)度緊張，生物能源消耗過(guò)多，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生疲勞感，表現(xiàn)為全身或局部酸、軟、痛，疲乏無(wú)力和“力不從心”。長(zhǎng)期的體力疲勞會(huì)危害人體正常生理機(jī)能，導(dǎo)致內(nèi)分泌紊亂，免疫力下降，繼而出現(xiàn)器質(zhì)性疾病，影響健康[3]。近些年，國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究表明，肽、多糖、氨基酸、維生素、多酚類(lèi)物質(zhì)、生物堿等天然活性物質(zhì)具有緩解體力疲勞的功效。

大豆是中國(guó)重要糧食作物之一，其中含有30%～60%的蛋白質(zhì)[4]。大豆蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶作用即可獲得大豆蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物——大豆多肽。大豆多肽的必需氨基酸含量豐富且平衡，具有易被人體消化吸收的優(yōu)點(diǎn)[5]。研究表明，大豆多肽具有抗氧化、降血糖、調(diào)節(jié)血脂等多種生物活性[6-7]，然而，對(duì)于緩解小鼠體力疲勞方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文以大豆多肽為研究對(duì)象，構(gòu)建急性疲勞與D-半乳糖亞急性衰老2 種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｔ?種模型下，開(kāi)展大豆肽對(duì)小鼠負(fù)重游泳（WLS）時(shí)間、小鼠血清或肝臟中血清尿素氮 （Serum urea nitrogen，BUN）、血乳酸（Blood lactic acid，LD）、糖原、糖原合成酶（Glycogen synthetase，GS）、總過(guò)氧化物酶（Total peroxidase，T-SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、磷酸肌酸激酶（Creatine phosphate kinase，CPK）生化指標(biāo)的影響研究，以期為大豆多肽在功能食品中的應(yīng)用及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

1.1.1 試劑 大豆肽（相對(duì)分子質(zhì)量為875）由吉林大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與功能食品實(shí)驗(yàn)室制備，ICR 小鼠（雄性）由長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。谷胱甘肽（GSH）溶液，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司；人參肽（西洋參蛋白口服液），廣東長(zhǎng)興生物科技有限公司。尿素氮（BUN）測(cè)試盒、乳酸（LD）測(cè)試盒、糖原測(cè)試盒、總過(guò)氧化物歧化酶（TSOD）測(cè)試盒、丙二醛（MDA）測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所；糖原合成酶（GS）測(cè)試盒，上海江萊生物科技有限公司；磷酸肌酸激酶（CPK）測(cè)試盒，上海邦奕生物科技有限公司。以上測(cè)試盒均于4 ℃保存。冰醋酸、濃硫酸，天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠，以上試劑均為分析純級(jí)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件 健康SPF 級(jí)ICR雄性小鼠，體重（18±2）g，長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)SCXK 2014-0007；實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度20～25 ℃，濕度40%～50%，人工照明12 h/d，通風(fēng)良好，小鼠自由攝食與飲水，每隔2 d對(duì)鼠籠墊料進(jìn)行徹底更換，保持環(huán)境干燥、清潔。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料 “益生”牌小鼠生長(zhǎng)繁殖用配合顆粒飼料，成分分析見(jiàn)表1；飲水為煮沸冷卻后蒸餾水。

表1 小鼠飼料成分分析（%）Table 1 Ingredients analysis of mice feed（%）

1.1.4 儀器與設(shè)備 AG204 電子天平，瑞士METTLER TOLEDO；CR20B2 超速冷凍離心機(jī)，日本日立公司；FD-1 型真空冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康技術(shù)公司；CS501 超級(jí)恒溫水浴鍋，上海錦屏儀器有限公司；Synergy HT 多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)伯騰儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與喂養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)前，小鼠在動(dòng)物房進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)3～4 d。

急性疲勞小鼠模型的建立：實(shí)驗(yàn)選取66 只ICR 雄性小鼠，共設(shè)6 組，每組小鼠11 只，將自適應(yīng)喂養(yǎng)后的小鼠進(jìn)行力竭式游泳訓(xùn)練，于小鼠尾部負(fù)體重6%的鉛皮，每天游2 h，如發(fā)現(xiàn)力竭表現(xiàn)（小鼠從入水至頭部沒(méi)入水中7 s 不能上?。瑩瞥鏊嫘菹? min 后繼續(xù)訓(xùn)練至滿(mǎn)2 h，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行5周，注射和灌胃在每天上午8 點(diǎn)鐘準(zhǔn)時(shí)開(kāi)始，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后按動(dòng)物試驗(yàn)3R 原則以小鼠人道關(guān)懷。詳細(xì)情況見(jiàn)表2。

表2 急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組Table 2 Experimental animal grouping of acute fatigue model

D-半乳糖亞急性衰老小鼠模型的建立：實(shí)驗(yàn)選取77 只ICR 雄性小鼠，共設(shè)7 組，每組小鼠11只，將自適應(yīng)性喂養(yǎng)后的小鼠除陰性對(duì)照組外均采用腹腔注射滅菌D-半乳糖，以構(gòu)建衰老模型小鼠，陰性對(duì)照組注射等體積的蒸餾水，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行5周，注射和灌胃在每天上午8 點(diǎn)鐘準(zhǔn)時(shí)開(kāi)始，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后按動(dòng)物試驗(yàn)3R 原則以小鼠人道關(guān)懷。詳細(xì)情況見(jiàn)表3。

表3 D-半乳糖亞急性衰老模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組Table 3 Experimental animal grouping of D-galactose subacute aging model

兩模型中的GSH 組和人參肽組均為陽(yáng)性對(duì)照組。GSH 作為一種良好的抗氧化劑，可以幫助機(jī)體清除自由基和過(guò)氧化物，從而達(dá)到維持生物體的相對(duì)穩(wěn)定。人參肽屬于生物活性肽（BAP）的一種，對(duì)生物機(jī)體的生命活動(dòng)或具有生理作用[8]。經(jīng)研究證實(shí)，人參肽具有耐缺氧作用，并且能在一定程度上延緩實(shí)驗(yàn)小鼠疲勞的產(chǎn)生和加速疲勞的消除[9-11]。

1.2.2 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)5 周后，于末次處理30 min 后，在6 組小鼠尾部分別綁上體重6%的鉛皮，進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)。泳池規(guī)格為50 cm×50 cm×40 cm，水深30 cm，水溫25 ℃，記錄小鼠從入水至頭部沒(méi)入水中7 s 內(nèi)不再浮出水面的時(shí)間，為力竭游泳時(shí)間。

1.2.3 小鼠血液生化指標(biāo)測(cè)定 小鼠游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即對(duì)其進(jìn)行眼球靜脈叢取血，血樣在室溫下靜置2 h 后離心（4 000 r/min，10 min）仔細(xì)收集上層血清，凍存用于血清生化指標(biāo)檢測(cè)或立即進(jìn)行血清生化指標(biāo)檢測(cè)；取出肝臟在冰水浴中用生理鹽水將浮血洗去后凍存?zhèn)溆谩Ｓ迷噭┖袦y(cè)定血清中BUN、LD、MDA 含量以及T-SOD、GS 和CPK活力，并取小鼠肝臟測(cè)定其肝糖原含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05 為顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 大豆肽對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

力竭游泳時(shí)間是抗疲勞實(shí)驗(yàn)中常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)。力竭游泳時(shí)間越長(zhǎng)，疲勞產(chǎn)生越慢，抗疲勞效果越強(qiáng)。由表4可知，急性疲勞模型中，與陰性對(duì)照組比較，劑量組（SP-L、SP-M、SP-H）小鼠力竭游泳時(shí)間均顯著延長(zhǎng)（P<0.05），分別增長(zhǎng)了31.7%，42.7%，128.2%；與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)顯著差異（P>0.05）；3 組劑量組間也無(wú)顯著性差異，說(shuō)明不同大豆肽劑量對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間影響不大。如表5可知，D-半乳糖亞急性衰老模型中，3 組劑量組間無(wú)顯著差異，與陽(yáng)性對(duì)照組GSH 差異顯著，表明此模型下大豆肽依然可以提高機(jī)體的運(yùn)動(dòng)耐力，使疲勞產(chǎn)生減緩。模型組與陰性對(duì)照組沒(méi)有明顯差異，表明在此模型下，小鼠運(yùn)動(dòng)耐力不受影響。

表4 急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)中大豆肽對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響Table 4 Effect of soybean peptide on swimming time in mice in acute fatigue model experiment

表5 D-半乳糖亞急性衰老模型實(shí)驗(yàn)中大豆肽對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響Table 5 Effect of soybean peptide on swimming time of mice in D-galactose subacute aging model experiment

2.2 大豆肽對(duì)小鼠血清尿素氮（BUN）含量的影響

在劇烈運(yùn)動(dòng)后，機(jī)體中蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生的含氮物質(zhì)在肝臟中合成尿素，小鼠BUN 含量升高[12]。兩模型實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果如圖1、圖2所示，與陰性對(duì)照組相比，GSH、人參肽、SP-L、SP-M、SP-H 組小鼠血清BUN 含量均有所減少，這說(shuō)明，谷胱甘肽、人參蛋白肽、大豆肽都能減少疲勞產(chǎn)物血清尿素氮的產(chǎn)生。急性疲勞模型中，SP-H 組BUN 含量與陰性對(duì)照組相比降低了61.7%（P<0.05），其它組間均無(wú)顯著性差異。D-半乳糖亞急性衰老模型中，SP-M、SP-H 組的BUN 含量顯著低于陰性對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組，其它組與陰性對(duì)照組無(wú)顯著性差異。這說(shuō)明大豆肽在高劑量時(shí)，能有效抑制蛋白質(zhì)作為供能物質(zhì)進(jìn)行分解，從而減緩疲勞的產(chǎn)生，其中D-半乳糖亞急性衰老模型中模型組BUN 含量與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異，說(shuō)明D-半乳糖對(duì)運(yùn)動(dòng)過(guò)程中尿素氮的產(chǎn)生沒(méi)有影響。

圖1 大豆肽對(duì)急性疲勞模型下小鼠血清尿素氮（BUN）的影響Fig.1 Effects of soybean peptide on bloodurea nitrogen （BUN） in mice with acute fatigue model

圖2 大豆肽對(duì)D-半乳糖亞急性衰老模型下小鼠血清尿素氮（BUN）的影響Fig.2 The effect of soybean peptide on blood urea nitrogen of mice in D-galactose subacute aging model

2.3 大豆肽對(duì)小鼠血乳酸（LD）含量影響

機(jī)體內(nèi)糖原（葡萄糖）在有氧條件下充分氧化分解產(chǎn)生二氧化碳和水，而在缺氧條件下氧化分解產(chǎn)生乳酸[13]。實(shí)驗(yàn)中，小鼠隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加，糖原進(jìn)行無(wú)氧分解，產(chǎn)生大量的乳酸。乳酸在肌肉內(nèi)堆積，供能反應(yīng)變緩，肌肉能量供應(yīng)不足，產(chǎn)生疲勞[14-16]。因此可以通過(guò)檢測(cè)運(yùn)動(dòng)后血乳酸水平，判斷運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度或肌肉耐受力及疲勞程度。

急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。小鼠力竭游泳后，其中陽(yáng)性對(duì)照GSH 組、SP-H 組小鼠LD 含量顯著低于陰性對(duì)照組，分別降低了44.6%和55.1%。其它組間沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）。這說(shuō)明大豆肽在低劑量時(shí)，對(duì)抑制乳酸生成沒(méi)有顯著作用，高劑量時(shí)可以明顯抑制乳酸的生成或加速乳酸的分解，從而起到增強(qiáng)肌肉耐受力，緩解體力疲勞的作用。

圖3 大豆肽對(duì)急性疲勞模型下小鼠血乳酸（LD）的影響Fig.3 Effects of soy peptide on blood lactic acid in mice with acute fatigue model

D-半乳糖亞急性衰老模型小鼠力竭游泳后，各組小鼠LD 含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4。模型組血乳酸含量最高，這可能是由于D-半乳糖在體內(nèi)的大量堆積，導(dǎo)致機(jī)體自由基系統(tǒng)失衡，多余的自由基攻擊細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂，功能受限，運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體更快地從有氧運(yùn)動(dòng)轉(zhuǎn)為無(wú)氧運(yùn)動(dòng)，從而堆積大量的乳酸。SP-M、SP-H 組小鼠血乳酸含量顯著低于陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，而SP-L 組與兩類(lèi)對(duì)照組基本沒(méi)有差異，這可能是因?yàn)镈-半乳糖亞急性衰老模型小鼠機(jī)體本身就存在大量多余的自由基，機(jī)體更容易產(chǎn)生乳酸堆積，所以小劑量的大豆肽在這樣的體系中就體現(xiàn)不出價(jià)值，只有當(dāng)劑量增大到足夠程度時(shí)，才能起到明顯的延緩疲勞產(chǎn)生，緩解體力疲勞的作用。

圖4 大豆肽對(duì)D-半乳糖亞急性衰老模型下小鼠血乳酸（LD）的影響Fig.4 The effect of soybean peptide on blood urea lactic of mice in D-galactose subacute aging model

2.4 大豆肽對(duì)小鼠肝糖原含量的影響

糖類(lèi)物質(zhì)是機(jī)體重要的能源物質(zhì)，是機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)的首要供能物質(zhì)。肝糖原作為一種能量貯存物質(zhì)，能夠維持血糖的穩(wěn)定。一般來(lái)說(shuō)，肝糖原含量的高、低受運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的影響，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度越大，機(jī)體消耗的肝糖原越多，肝臟組織中糖原含量越低，疲勞程度越高[17-19]。兩模型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同組小鼠游泳運(yùn)動(dòng)后肝糖原的含量，得到結(jié)果如圖5、圖6所示。在急性疲勞模型中，與陰性、陽(yáng)性對(duì)照組相比，SP-L、SP-M、SP-H 組小鼠肝糖原含量均顯著提升（P<0.05）。這說(shuō)明大豆肽可以在一定程度上增加肝糖原的貯存，在高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)，能夠釋放足夠的能量，增強(qiáng)機(jī)體耐受強(qiáng)度，從而延緩疲勞的產(chǎn)生，起到緩解體力疲勞的作用。D-半乳糖亞急性模型與急性疲勞模型下，各組小鼠肝糖原含量不同，各組D-半乳糖模型小鼠力竭游泳后，肝糖原含量基本無(wú)差異，這說(shuō)明可能受D-半乳糖影響，GSH、人參蛋白肽及大豆肽對(duì)小鼠肝糖原的貯存影響不大。

圖5 大豆肽對(duì)急性疲勞模型下小鼠肝糖原的影響Fig.5 Effects of soybean peptide on liver glycogen in mice with acute fatigue model

圖6 大豆肽對(duì)D-半乳糖亞急性衰老模型下小鼠肝糖原的影響Fig.6 The effect of soybean peptide on liver glycogen of mice in D-galactose subacute aging model

2.5 大豆肽對(duì)小鼠糖原合成酶（GS）含量的影響

研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)過(guò)程中及運(yùn)動(dòng)結(jié)束后，糖原合成酶（GS）的活性與肌糖原的變化呈正相關(guān)[20]。因此，GS 是考察大豆肽影響機(jī)體疲勞的重要指標(biāo)之一。所得結(jié)果如圖7、圖8所示。在急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)中，SP-L、SP-M、SP-H 組中GS 含量升高不顯著，與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P>0.05），陽(yáng)性對(duì)照組GSH 及人參肽組小鼠GS 含量與陰性對(duì)照組結(jié)果也沒(méi)有顯著性差異，這說(shuō)明大豆肽能夠在一定程度上提高機(jī)體GS 的含量。在D-半乳糖亞急性衰老模型實(shí)驗(yàn)中，各組小鼠GS 含量差異甚微，這一結(jié)果與急性疲勞模型下小鼠GS 的檢測(cè)結(jié)果一致，綜合2 次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，GS 受外援源自由基清除劑的影響很小，不會(huì)參與其緩解體力疲勞的過(guò)程，也可能是由于GS 在疲勞產(chǎn)生的過(guò)程中并不發(fā)生明顯改變，因此不適合于直接或間接反映疲勞的程度。

圖7 大豆肽對(duì)急性疲勞模型下小鼠糖原合成酶（GS）含量的影響Fig.7 Effects of soybean peptide on glycogen synthase（GS） content in mice under acute fatigue model

圖8 大豆肽對(duì)D-半乳糖亞急性衰老模型下小鼠糖原合成酶（GS）的影響Fig.8 The effect of soybean peptide on glycogen synthetase of mice in D-galactose subacute aging model

2.6 大豆肽對(duì)小鼠總過(guò)氧化物歧化酶（T-SOD）活性的影響

過(guò)氧化物歧化酶（SOD）是生物體內(nèi)數(shù)千種酶中，底物為氧自由基的唯一的酶，它對(duì)底物氧自由基有絕對(duì)專(zhuān)一性，而且催化效率很高，可以催化·O2-歧化為H2和O2[21]。機(jī)體內(nèi)SOD 活性的大小與機(jī)體的運(yùn)動(dòng)耐受力呈正相關(guān)，SOD 活力越強(qiáng)，機(jī)體運(yùn)動(dòng)耐受力越大，越不容易產(chǎn)生疲勞或越容易消除疲勞[22]。急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖9所示，GSH、人參肽組、SP-L 組小鼠血清中T-SOD 的活力高于陰性對(duì)照組，然而沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）；SP-M、SP-H 組小鼠血清中T-SOD 的活力顯著高于陰性對(duì)照組（P<0.05），SP-M、SP-H 組之間差異不顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大豆肽灌胃劑量分別為0.5 g/（kg·d）和5 g/（kg·d）時(shí)，其輔助消除體內(nèi)自由基的能力高于目前公認(rèn)的消除體內(nèi)自由基效果較好的小分子肽GSH，可以明顯提高T-SOD活力，達(dá)到緩解體力疲勞的作用。

圖9 大豆肽對(duì)急性疲勞模型下小鼠總過(guò)氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影響Fig.9 Effects of soybean peptide on total peroxide dismutase （T-SOD） activity in mice under acute fatigue model

D-半乳糖模型是模擬衰老的一種模型，這種模型下的動(dòng)物體內(nèi)多種具有防御自由基攻擊作用的酶類(lèi)，如過(guò)氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性會(huì)顯著下降，與衰老過(guò)程相似。然而，當(dāng)生物體運(yùn)動(dòng)到一定程度時(shí)，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生大量多余的自由基，引起機(jī)體內(nèi)SOD、GSH-Px活性本能性的提高，以此消除多余的自由基，維持機(jī)體的正常生理狀態(tài)。D-半乳糖亞急性衰老模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖10。模型組T-SOD 活性最低，且顯著低于其它各組，這說(shuō)明此模型下小鼠肝臟TSOD 活性比正常狀態(tài)下低，與正常衰老狀態(tài)下相似，該模型造型成功。SP-L、SP-M、SP-H 組TSOD 的活性依然比陰性對(duì)照組的大，而結(jié)果沒(méi)有急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)中差異明顯。這說(shuō)明在D-半乳糖模型下，大豆肽依然可以提高機(jī)體T-SOD 的活性，而提高程度有所下降。這與這一模型下動(dòng)物機(jī)體的特征有關(guān)。

圖10 大豆肽對(duì)D-半乳糖亞急性衰老模型下小鼠總過(guò)氧化物歧化酶（T-SOD）的影響Fig.10 The effect of soybean peptide on the total superoxide dismutase of mice in D-galactose subacute aging model

2.7 大豆肽對(duì)小鼠丙二醛（MDA）含量的影響

丙二醛（MDA）是機(jī)體內(nèi)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化作用形成的產(chǎn)物之一，會(huì)攻擊細(xì)胞引起細(xì)胞代謝紊亂及功能障礙[23-24]，從而造成肌肉損傷產(chǎn)生疲勞。因此，MDA 含量的高低可以間接反應(yīng)機(jī)體受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，在一定程度上反映出機(jī)體細(xì)胞的疲勞程度。兩模型實(shí)驗(yàn)后小鼠血清中MDA 含量如圖11、圖12所示。在急性疲勞模型中，GSH 組小鼠血清中MDA 含量低于陰性組小鼠，效果較顯著（P<0.05），人參肽組、SP-L、SP-M、SP-H 組小鼠血清中MDA 含量雖然也低于陰性組小鼠，但效果不顯著。這說(shuō)明不同劑量的大豆肽對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物MDA 的含量基本沒(méi)有影響，大豆肽緩解體力疲勞的功效可能不是通過(guò)抑制MDA 的產(chǎn)生來(lái)起作用的。D-半乳糖亞急性衰老模型實(shí)驗(yàn)中，各組小鼠血清中MDA 含量基本持平，這一結(jié)果與急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，而SP-L、SPM、SP-H 組MDA 的含量相比陰性對(duì)照組有一定程度的提高，這說(shuō)明在D-半乳糖亞急性衰老模型下，大豆肽對(duì)其清除作用變?nèi)酢?/p>

圖11 大豆肽對(duì)急性疲勞模型下小鼠丙二醛（MDA）含量的影響Fig.11 Effects of soybean peptide on malondialdehyde（MDA） content in mice under acute fatigue model

圖12 大豆肽對(duì)D-半乳糖亞急性衰老模型下小鼠丙二醛（MDA）的影響Fig.12 The effect of soybean peptide on MDA of mice in D-galactose subacute aging model

2.8 大豆肽對(duì)小鼠血清磷酸肌酸激酶 （CPK）活性的影響

磷酸肌酸激酶又稱(chēng)CPK，主要存在于人體骨骼肌和心肌中，腦組織中也有一定分布。其參與糖酵解的控制、線粒體的呼吸和肌肉的收縮供能，是機(jī)體ATP-CP 供能系統(tǒng)代謝的關(guān)鍵酶，可作為評(píng)定肌肉承受刺激、骨骼肌細(xì)微損傷及適應(yīng)與恢復(fù)的重要敏感指標(biāo)[25]。運(yùn)動(dòng)時(shí)肌肉缺氧，使K+濃度升高，膜通透性加強(qiáng)，導(dǎo)致細(xì)胞膜內(nèi)CPK 向細(xì)胞外釋放，使CPK 的滲透量增加，引起血清CPK 活性升高[26-27]。兩模型實(shí)驗(yàn)所測(cè)得CPK 含量如圖13、圖14所示。在急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)中，各組與陰性對(duì)照組相比，結(jié)果基本沒(méi)有差異。這說(shuō)明大豆肽并不能影響小鼠血清CPK 的活性，也可能是因?yàn)樾∈罅哂斡竞罅⒓刺幩?，影響了CPK 活性的恢復(fù)。在D-半乳糖亞急性衰老模型實(shí)驗(yàn)中，模型組CPK活性與陰性對(duì)照組結(jié)果基本無(wú)差異，而SP-L、SPM、SP-H 組CPK 的活性與陰性對(duì)照組相比結(jié)果偏低，與急性疲勞模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定差異，差異不顯著。這可能是因?yàn)镈-半乳糖的過(guò)量攝入使得機(jī)體細(xì)胞衰老，CPK 活性降低，而大豆肽對(duì)CPK 的活性基本沒(méi)有影響，不能起到彌補(bǔ)作用。

圖13 大豆肽對(duì)急性疲勞模型下小鼠血清磷酸肌酸激酶（CPK）含量的影響Fig.13 Effects of soybean peptides on serum phosphocreatine kinase （CPK） content in mice with acute fatigue model

圖14 大豆肽對(duì)D-半乳糖亞急性衰老模型下小鼠血清磷酸肌酸激酶（CPK）含量的影響Fig.14 The effect of soybean peptide on blood urea CPK of mice in D-galactose subacute aging model

3 結(jié)論

本研究通過(guò)構(gòu)建急性疲勞模型與D-半乳糖亞急性衰老模型，考察了大豆肽在小鼠運(yùn)動(dòng)過(guò)程中對(duì)能源物質(zhì)、產(chǎn)物及相關(guān)酶類(lèi)的影響。結(jié)果表明2 種模型下，大豆肽可以顯著提高小鼠的力竭游泳時(shí)間，其機(jī)制可能體現(xiàn)在大豆肽通過(guò)提高TSOD 活性，減少疲勞產(chǎn)物BUN、LD 的產(chǎn)生，并增加能源物質(zhì)肝糖原的積累，達(dá)到緩解疲勞的目的。此外，本研究還為研發(fā)緩解疲勞的產(chǎn)品提供了一定的理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。