化立凡，劉兆陽，李天平，劉鳳軍*

（1.河南科技大學動物科技學院，河南 洛陽 471000；2.洛陽王城動物園，河南 洛陽 471000）

圈養(yǎng)野生動物的健康問題日益凸顯，有袋目動物的健康問題困擾著全世界范圍內(nèi)的動物園[1]。赤頸袋鼠（rednecked wallaby）屬哺乳綱有袋目，在世界各地的動物園中普遍展出，是澳大利亞的特有物種[2]，恒齒公式為I 3/1、C 0/0、P 2/2和M 4/4[3-4]。巨足動物進行性牙周病（macropod progressive periodontal disease，MPPD）又稱“粗頜病”，具有發(fā)病率、病死率、復發(fā)率高的特點，一直是全球圈養(yǎng)巨足動物飼養(yǎng)的難題。MPPD侵害口腔牙齒健康的同時，還會引起腸梗阻、腸套疊、腸破裂和腹膜炎等多種并發(fā)癥[5-7]。MPPD在巨足動物中的危害非常嚴重，各種類的袋鼠均受此疾病危害[8-10]。在世界范圍內(nèi)，MPPD感染細菌種類繁多，且多數(shù)細菌對常見抗生素已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性[11-17]。因此，致病菌的分離、培養(yǎng)、鑒定和耐藥性試驗以及了解、掌握致病菌對機體產(chǎn)生的病理變化至關重要。

普通變形桿菌屬于革蘭氏陰性桿菌，在普通營養(yǎng)瓊脂平板上形成同心圓樣、厚薄交替的波紋狀菌苔，具有“遷徙生長”的現(xiàn)象[18-20]。目前尚無普通變形桿菌致赤頸袋鼠進行性牙周病的報道。本研究對象為洛陽王城動物園飼養(yǎng)6只患MPPD的赤頸袋鼠。自2019年3月起，洛陽王城動物園的飼養(yǎng)員發(fā)現(xiàn)一只赤頸袋鼠出現(xiàn)目光呆滯、嚴重消瘦，食欲廢絕、嚴重流涎等，見圖1。使用頭孢曲松鈉進行治療，但于3 d后死亡。兩年時間內(nèi)，共有8只赤頸袋鼠陸續(xù)發(fā)生牙周病，總發(fā)病率為80%；其中兩只患病袋鼠使用傳統(tǒng)治療方法，即常規(guī)皮下注射廣譜抗生素治療，全部死亡，治愈率為0。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

診斷所需材料包括：無菌手套、無菌注射器、止血鉗、牙挺、止血棉、紗布、無菌生理鹽水；E7239X數(shù)字化X光機（佳能）、喉鏡（江蘇維樂醫(yī)療器械科技有限公司）。

藥敏試驗所需材料包括：無菌注射器、無菌采樣管、革蘭氏染色劑；光學顯微鏡（上海徠卡儀器有限公司）；全自動微生物鑒定及藥敏檢測分析儀、鑒定用生化試劑和藥敏試劑（西門子MicroScan WalkAway96 Plus）；血平板培養(yǎng)基、血培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、無菌鹽水。

1.2 診斷方法

通過觸診、視診以及影像學技術，分析來自洛陽王城動物園6只患有MPPD疾病的赤頸袋鼠診斷疾病發(fā)展程度，根據(jù)牙齒、軟組織受累程度判定，將該疾病分為輕癥和重癥。輕癥為小面積的潰瘍、組織壞死，輕度組織機化和包囊形成，3顆以下牙齒壞死、脫落以及良好的預后效果；重癥為大范圍的潰瘍、組織壞死，大面積、多部位的組織機化和包囊形成，3顆及以上的牙齒壞死、脫落以及較差的預后甚至死亡。

1.3 治療方法

治療方案分為4種方式，分別為：手術清創(chuàng)治療、局部性治療、藥物注射全身性治療以及飼料調(diào)整。

手術清創(chuàng)治療包括對壞死軟組織及異物清除，壞死牙齒拔除等操作。局部治療包括使用甲硝唑氯化鈉注射液（吉林省廣春藥業(yè)有限公司）或5%過氧化氫溶液（南昌白云藥業(yè)有限公司）對口腔內(nèi)壞死部位進行清洗，使用復方氯己定地塞米松膜（西安康華藥業(yè)有限公司）貼于口腔潰瘍處，每次2~4片。

藥物注射全身治療包括在袋鼠后肢皮下注射硫酸慶大霉素注射液（0.4萬單位/kg，上海全宇生物科技動物藥業(yè)有限公司）以及美洛昔康注射液（0.2 mg/kg，齊魯動物保健品有限公司），通過袋鼠尾靜脈輸入葡萄糖、氯化鈉注射液（5%葡萄糖以及0.9%氯化鈉，上海百特醫(yī)療用品有限公司）以及復方氯化鈉溶液（0.03%KCl、0.033%CaCl2、0.85%NaCl，吉林省廣春藥業(yè)有限公司）。

根據(jù)診斷結(jié)果，所有袋鼠進行一次手術清創(chuàng)治療，若干次局部性治療和藥物注射全身性治療。自袋鼠恢復食欲開始，對其飼料進行調(diào)整。原飼料中干枯、堅硬的飼草，易粘牙的窩頭以及糖分過高的水果等停止飼喂，改為新鮮購買的芹菜、茼蒿、生菜、莜麥菜、蘿卜、雞蛋以及苜蓿草。

1.4 死亡赤頸袋鼠剖檢

剖檢前，對死亡赤頸袋鼠進行稱重，觀察其外觀有無異常，被毛光澤、潔凈程度，天然孔道有無分泌物。剖檢時，從腹腔正中線沿大體長軸依次切開皮膚、腹壁、腹膜，依次取出腹腔臟器觀察、剖檢；再沿胸骨剖開胸腔，觀察心臟和肺臟；最后對面部進行剖檢。

1.5 細菌分離、培養(yǎng)、鑒定、藥敏試驗

細菌培養(yǎng)按照操作規(guī)范，采集發(fā)病袋鼠的口腔分泌物，在無菌環(huán)境下，采用滅菌接種環(huán)蘸取采集到的唾液樣本，接種于血平板培養(yǎng)基（添加10%脫纖維牛血），在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。24 h后觀察細菌生長情況，染色，使用油鏡放大1 000倍進行觀察，再使用全自動微生物鑒定/藥敏檢測分析儀進行鑒定和藥敏試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 6只患牙周病赤頸袋鼠的診斷結(jié)果（見圖2）

經(jīng)過診斷，該群6只患牙周病的赤頸袋鼠中，4只袋鼠為輕癥，表現(xiàn)為包括牙齦紅腫（4/4）、牙齦潰爛（4/4）、上臼齒壞死脫落（1/4）、下臼齒壞死脫落（4/4）、上門齒壞死脫落（2/4）、下門齒壞死脫落（1/4）、下頜骨骨髓炎導致骨質(zhì)增生（1/4）、下頜組織機化、鈣化、包囊形成（1/4）以及輕度的下唇組織分離。

由圖2（a）可知，箭頭所指右側(cè)下臼齒齒齦潰瘍部位，有大范圍的潰爛和出血，可見前臼齒的牙菌斑；由圖2（b）可知，箭頭所指下門齒齒齦潰瘍部位，牙周軟組織已壞死、腐爛，散發(fā)出惡臭氣味；由圖2（d）可知，拔除的壞死牙齒，包括3顆臼齒和1顆前臼齒；由圖2（e）可知，箭頭所指下頜部機化的包囊，質(zhì)地堅硬，無滲出；由圖2（f）可知，箭頭所指通過DR拍攝的下頜包囊。

另外兩只袋鼠為重癥，重癥袋鼠的3顆以上的前臼齒和臼齒發(fā)生壞死。其中一只重癥袋鼠為白化赤頸袋鼠，表現(xiàn)為下頜瘺道、嚴重的組織及下臼齒鈣化，見圖2（g）、圖2（h）；且因該側(cè)上臼齒長期嚴重異常磨損，導致上臼齒變得鋒利，見圖2（i）。

另一只重癥袋鼠為原色赤頸袋鼠，表現(xiàn)為上頜組織機化、鈣化、包囊形成，嚴重的眼瞼組織機化、包囊形成，嚴重的下唇組織壞死、潰瘍、脫離，無法復原，見圖2（j）、圖2（k）；患病袋鼠的下門齒長期暴露于空氣中，并伴有嚴重的下頜組織機化、包囊形成，且已有蠅蛆在壞死部位生出，見圖2（l）。

圖2 6只患牙周病赤頸袋鼠的檢查結(jié)果Fig.2 Examination result of six red-necked wallabieswith MPPD

2.2 6只患牙周病赤頸袋鼠的治療結(jié)果

通過治療，4只輕癥赤頸袋鼠和一只重癥白化赤頸袋鼠痊愈，而另一只重癥原色赤頸袋鼠治療無效死亡，治愈率為83.3%，經(jīng)治療后恢復采食的赤頸袋鼠見圖3。

圖3 經(jīng)治療后恢復采食的赤頸袋鼠Fig.3 Red-necked wallabiesrecovered after treatment

輕癥的赤頸袋鼠中，一只輕癥袋鼠經(jīng)過1次手術清創(chuàng)治療、1次局部性治療和3次藥物注射全身性治療；第3 d逐漸恢復食欲、飲欲，口腔內(nèi)異味消散；第7 d恢復正常采食，流涎停止。另3只輕癥袋鼠經(jīng)過一次手術清創(chuàng)治療、5次局部性治療以及7次藥物注射全身性治療，口腔內(nèi)壞死組織徹底清除，壞死牙齒拔除；第5 d逐漸恢復食、飲欲，但僅能取食纖細、柔軟的食物，口腔內(nèi)無再生壞死組織，異味消散，流涎停止，第10 d恢復正常采食，下頜瘺道恢復。

重癥白化赤頸袋鼠經(jīng)過1次手術清創(chuàng)治療、10次局部性治療以及10次藥物注射全身性治療，口腔內(nèi)嚴重鈣化組織清除，壞死牙齒拔除，對牙齦進行縫合；第5 d恢復食欲、飲欲，但僅能夠取食纖細、柔軟的食物；第10 d恢復正常采食，但由于長期鈣化結(jié)節(jié)，上臼齒異常磨損，較難恢復。

上述5只袋鼠雖經(jīng)治療后痊愈，但由于壞死、脫落牙齒均為恒齒，故無法再生修復。

2.3 死亡袋鼠解剖結(jié)果（見圖4）

死亡的重癥赤頸袋鼠生前表現(xiàn)無異常，采食、飲水、排便、排尿均正常，被毛光澤、干凈，下頜部和右側(cè)下眼瞼腫脹。死亡當日傍晚，突發(fā)呼吸急促，隨后倒地、抽搐、死亡，體重9.2 kg。對死亡赤頸袋鼠尸體解剖，解剖結(jié)果見圖4。

由圖4（a）~圖4（c）可知，該死亡赤頸袋鼠尸僵正常，血凝不良，血液呈黑色，體脂率較低；胃腸道內(nèi)有飼料，胃壁和腸管無出血，但胃壁和腸管變薄，內(nèi)有脹氣；由圖4（d）~圖4（e）可知，死亡袋鼠肝臟表面有出血點，且呈嚴重瘀血，肝臟切面內(nèi)流出的黑色瘀血；由圖4（f）~圖4（h）可知，肺臟質(zhì)地松軟、無彈性，有干酪樣組織結(jié)節(jié)和出血斑，腎臟有嚴重瘀血，心包膜內(nèi)有嚴重積液，為無色澄清液體；由圖4（i）可知，死亡袋鼠口腔內(nèi)潰瘍已痊愈，下頜部和下眼瞼有機化的結(jié)締組織形成的包囊，且已連通，與口腔形成瘺道。

2.4 細菌分離、培養(yǎng)及藥敏試驗結(jié)果（見圖5、表1）

由圖5（a）可知，在血瓊脂平板培養(yǎng)基上可觀察到單個、扁平、圓形、濕潤、中等大小的灰白色菌落。菌落邊緣整齊，有明顯的遷徙生長現(xiàn)象，無溶血環(huán)，無特殊氣味。

由圖5（b）可知，該細菌呈球形和桿狀，兩端鈍圓，散在排列。根據(jù)全自動微生物鑒定及藥敏檢測分析儀分析鑒定，該種細菌為普通變形桿菌（Proteusvulgaris）。

圖5 從患病袋鼠口腔分離到的細菌菌落形態(tài)及顯微鏡下形態(tài)Fig.5 Colonial morphology and microscopic morphology of bacteriaisolated from diseased wallabies'mouths

根據(jù)全自動微生物鑒定及藥敏檢測分析儀分析鑒定，其藥敏試驗結(jié)果見表1。

由表1可知，從患病袋鼠口腔分離到的普通變形桿菌對3種抗生素敏感，分別為慶大霉素、亞胺培南、美羅培南；對3種抗生素中介，分別為替卡西林、頭孢哌酮、美滿菌素；該菌株對其余14種抗生素耐藥，分別為：氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢吡肟、左氧氟沙星、哌拉西林、氯霉素、頭孢唑林、阿米卡星、頭孢西丁、頭孢呋辛、復方新諾明以及頭孢他啶。

表1 普通變形桿菌對20種抗生素的敏感性Tab.1 Sensitivity of Proteusvulgaris to 20 antibiotics

3 討論

對患有MPPD的赤頸袋鼠進行外科手術治療非常有必要。在以往的治療中，頜骨塊狀病變的治療僅限于反復切開、沖洗、引流和使用廣譜抗生素，以期最終組織肉芽化和傷口閉合[21]。然而，隨著時間的推移，上述方法并不可靠，未取出的壞死牙齒仍然會長期刺激牙床，導致MPPD極易復發(fā)，重復的簡單治療無法徹底解決問題。有效的治療可以大大降低MPPD復發(fā)的概率。通過化學保定，可以將袋鼠的口腔打開更大，獸醫(yī)可以更加清楚地看到患病部位。要做到徹底、全面地檢查口腔，去除包囊結(jié)節(jié)，將壞死的組織、牙齒和刺入軟組織內(nèi)的異物徹底清理干凈，才能夠使愈合更加迅速，預后更好。

有效地使用抗生素可大大提高治愈率，但使用了不適合的抗生素不僅會延誤病程，導致疾病惡化，還會增加機體代謝壓力。更換抗生素時，還要考慮藥物之間互相作用的效果。因此，細菌培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗可以盡早、有效地幫助控制感染。在疾病早期，可采用局部抗菌和全身抗菌相結(jié)合的方法，盡早控制感染。在本治療過程中針對性地使用了硫酸慶大霉素注射液，獲得了很好的治療效果，并且未發(fā)現(xiàn)嚴重的毒副作用。此外，局部使用抗菌藥物也是一個有效的方法[22]。局部應用緩釋氯己定在臨床實踐中已被證明治療效果較好，且具有許多優(yōu)點[23]，能夠有效地降低牙齒疾病發(fā)生概率。本治療過程中，在口腔內(nèi)部使用了甲硝唑氯化鈉進行大量沖洗，不僅可以沖洗掉壞死的組織，還可以殺滅口腔內(nèi)厭氧的病原微生物；之后再使用復方氯己定地塞米松膜能夠減輕牙周炎引起的疼痛，并且起到抗菌消炎的作用。

疼痛管理對降低應激十分重要。野生動物對疼痛的耐受性比較強，有時部分牙齒出現(xiàn)問題，臨床上不會表現(xiàn)出很明顯的癥狀[5]。在治療過程中，盡可能地降低動物承受的疼痛能夠有效減少不良刺激對其機體的有害應激。美洛昔康屬于非甾體類解熱鎮(zhèn)痛藥，可以選擇性抑制環(huán)氧化物酶COX-2，減輕軟組織炎性反應產(chǎn)生的疼痛、腫脹[24-25]。本治療過程中，6只赤頸袋鼠均使用了美洛昔康注射液（1 mg/kg），有效地減輕了袋鼠的不安、恐懼和狂躁程度，并且有效地緩解口腔疼痛，盡早地恢復動物采食，大大縮短了治療時長。

本治療過程中飼料方案的調(diào)整對赤頸袋鼠牙周病的治療效果非常顯著。過于干枯、堅硬的飼草會長期對口腔黏膜和牙齦造成損傷，有時飼草會穿破牙齦，留置于口腔內(nèi)，造成感染。自2020年起，王城動物園對該群赤頸袋鼠的飼料方案進行了調(diào)整，停止飼喂過于干枯、堅硬的飼草、雜糧窩頭、顆粒飼料、香蕉和蘋果等飼料，更換為苜蓿草、桑葉、榆葉、芹菜、茼蒿等新鮮的青綠飼料。結(jié)果表明，自飼料調(diào)整之后未出現(xiàn)袋鼠發(fā)病，發(fā)病率降低為0。有研究表明，不干凈的飲水、不均衡的飲食以及含有低粗、高糖飼料的軟食物和粗飼料顆粒會導致牙齦的傷害，是導致赤頸袋鼠進行性牙周病的重要原因[26]。

變形桿菌廣泛存在于含有機物質(zhì)的污水、土壤、糞便以及爬行動物、哺乳動物、鳥類等的腸道中，是一種人畜共患的條件致病菌[9]，血清型多達上百種，生存能力強，對動物的危害很大。國內(nèi)外已有研究表明，變形桿菌能夠感染多種動物，引起食物中毒、尿路感染和傷口感染而導致敗血癥[27]。本研究發(fā)現(xiàn)，普通變形桿菌導致赤頸袋鼠牙周病的同時，還會引起袋鼠敗血癥而死亡，其癥狀和剖檢病理變化與牛、豬、鵝、梅花鹿相似，包括精神萎靡不振、食欲減退、行動遲緩、腸黏膜脫落、血液凝固不良、肺臟充血、瘀血和結(jié)節(jié)以及心包膜有淡黃色積液等。但赤頸袋鼠受到普通變形桿菌侵害時，并不會像其他動物一樣表現(xiàn)出腹瀉、全身肌肉痙攣，口、鼻流出大量液體，胸腔積液或在短時間內(nèi)發(fā)生迅速死亡等情況，可能與該普通變形桿菌的毒力存在一定關聯(lián)。

4 結(jié)論

通過手術清創(chuàng)治療、局部性治療、藥物注射全身性治療以及飼料調(diào)整的方式可以有效地降低赤頸袋鼠牙周病的發(fā)病率、病死率和復發(fā)率。王城動物園6只患MPPD赤頸袋鼠的病原微生物為普通變形桿菌，該菌對慶大霉素、亞胺培南和美羅培南敏感。