李 碩，俱蓉，楊秀娟，趙林華，仝小林*

紅芪精準(zhǔn)煮散飲片HPLC指紋圖譜建立及3種指標(biāo)成分測定

李 碩1, 2, 3，俱蓉1，楊秀娟1，趙林華4，仝小林4*

1. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000 2. 甘肅省高校中（藏）藥化學(xué)與質(zhì)量研究省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000 3. 甘肅省中藥質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，甘肅 蘭州 730000 4. 中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053

建立紅芪精準(zhǔn)煮散飲片高效液相色譜指紋圖譜和3種指標(biāo)成分的含量測定方法。采用HPLC法測定紅芪飲片與紅芪精準(zhǔn)煮散飲片中芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素的含量，色譜柱為Robusta C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫，檢測波長為254 nm；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；柱溫30 ℃。建立了紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的特征指紋圖譜，并指認(rèn)出了20個(gè)共有峰中的3個(gè)主要峰芒柄花苷（峰11）、毛蕊異黃酮（峰13）和芒柄花素（峰16），3種成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（≥0.999 5），平均加樣回收率98.08%～99.33%，RSD在1.46%～2.37%。通過加權(quán)得分，比較紅芪精準(zhǔn)煮散飲片與傳統(tǒng)飲片中3種成分，得到紅芪精準(zhǔn)煮散飲片1.00 g約相當(dāng)于傳統(tǒng)飲片 1.37 g。建立的指紋圖譜及含量測定方法可為紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

紅芪；精準(zhǔn)煮散飲片；HPLC；指紋圖譜；芒柄花苷；毛蕊異黃酮；芒柄花素；質(zhì)量評(píng)價(jià)

紅芪是豆科巖黃芪屬植物多序巖黃芪Hand. -Mazz.的干燥根[1]，因其根皮為紅棕色而得名，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]。其性微溫、味甘，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽、利水消腫、生津養(yǎng)血等功效，主要成分有黃酮類、皂苷類、生物堿類、氨基酸類、有機(jī)酸類、甾醇、多糖、微量元素等[3-5]，藥理作用有提高免疫能力、強(qiáng)心利尿、抗自由基、抗病毒等[6-7]。

“煮散”一詞最早見于唐代孫思邈的《備急千金要方》。中藥煮散指原藥材或飲片經(jīng)加工粉碎成適當(dāng)?shù)拇诸w粒，用時(shí)用水煮后去渣取汁而得到的液體制劑。煮散既保留了湯方特色，而較之湯劑，在提高藥物有效成分的煎出率、節(jié)省藥材、降低成本等方面具有極大的優(yōu)越性[8-11]。臨床實(shí)踐證實(shí)，中藥煮散的療效確切，且具有用藥量少、所用原料的體積小、便于攜帶及服用等諸多的優(yōu)點(diǎn)，在臨床上具有廣闊的應(yīng)用前景。

精準(zhǔn)煮散飲片，其實(shí)質(zhì)是通過標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化工藝，將中藥飲片的形狀規(guī)格微小化、均勻化處理，使飲片批量規(guī)模穩(wěn)定化、批內(nèi)質(zhì)量均一化，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、高效的自動(dòng)化分裝、調(diào)劑、煎煮流程，提高臨床湯劑用藥的穩(wěn)定有效[10]?；诖?，本課題組圍繞紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的研制及質(zhì)量控制展開系列研究，確定了紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的最佳粒度為0.200～0.400 cm。

中藥指紋圖譜是一種多指標(biāo)的質(zhì)量控制模式，對(duì)紅芪精準(zhǔn)煮散飲片進(jìn)行指紋圖譜研究及指標(biāo)性成分含量測定，能夠更加有效體現(xiàn)飲片的整體品質(zhì)及綜合質(zhì)量[12-17]。本研究采用HPLC法對(duì)10批紅芪精準(zhǔn)煮散飲片進(jìn)行指紋圖譜研究及相似度評(píng)價(jià)，并測定紅芪指標(biāo)成分芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素的含量，得到精準(zhǔn)煮散飲片與傳統(tǒng)飲片“量”的對(duì)應(yīng)關(guān)系，為紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的質(zhì)量控制及開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料、試劑與儀器

1.1 材料

紅芪飲片，批號(hào)200801、200802、200803、200804、200805、200901、200902、200903、200904、200905，均來自甘肅康樂藥業(yè)有限責(zé)任公司，產(chǎn)于甘肅隴南，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)李成義教授鑒定為豆科巖黃芪屬植物多序巖黃芪Hand. -Mazz.的干燥根。

紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的制備：取紅芪飲片制備為0.200～0.400 cm（5～10目）的煮散顆粒，備用。批號(hào)200801、200802、200803、200804、200805、200901、200902、200903、200904、200905的紅芪飲片分別對(duì)應(yīng)精準(zhǔn)煮散飲片S1～S10。

樣品通過四分法選取，保證樣品具有代表性。

1.2 試劑

對(duì)照品芒柄花苷（批號(hào)P03A10F84910）、芒柄花素（批號(hào)H06S9Z69494）、毛蕊異黃酮（批號(hào)Y05J11H115098），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%，上海源葉生物科技有限公司；乙腈、甲醇（色譜純），磷酸（分析純），天津大茂化學(xué)試劑廠；水，飲用純凈水，596 mL，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。

1.3 儀器

LC-20型高效液相色譜儀、DAD檢測器，日本島津公司；BSA224S-CW型電子天平、CPA224D型十萬分之一電子天平，德國賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；KQ500VDE型超聲波清潔器，昆山市超聲儀器有限公司；WF-300 CH-300型粗碎機(jī)，江陰市高宏機(jī)械制造有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Robusta C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～25 min，19%～44%乙腈；25～45 min，44%乙腈；45～45.01 min，44%～19%乙腈；45.01～50 min，19%乙腈；檢測波長為254 nm；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；柱溫30 ℃。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素對(duì)照品適量，加甲醇分別制成質(zhì)量濃度為960.1、145.5、620.5 μg/mL的對(duì)照品溶液。然后再分別吸取1.00 mL定容到100 mL棕色量瓶中制成混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取紅芪精準(zhǔn)煮散飲片1.000 g，精密稱定，置錐形瓶中，加入70%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W、頻率40 kHz）提取40 min，放冷，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液。用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.4 指紋圖譜方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 精密度考察 精密吸取S1樣品的供試品溶液20 μL，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄指紋圖譜。用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件進(jìn)行相似度分析，以芒柄花苷峰為參照，多點(diǎn)校正后全峰匹配，結(jié)果表明，6個(gè)供試品色譜圖與其共有模式的相似度分別為0.993、0.991、0.995、0.991、0.993、0.991，說明該方法精密度較好。

2.4.2 重復(fù)性考察 取同一樣品（S1），照“2.3”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，記錄指紋圖譜。用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件進(jìn)行相似度分析，以芒柄花苷峰為參照，多點(diǎn)校正后全峰匹配，結(jié)果表明，6個(gè)供試品色譜圖與其共有模式的相似度分別為0.997、0.998、0.996、0.997、0.996、0.992，說明本方法重復(fù)性良好。

2.4.3 穩(wěn)定性考察 取同一樣品（S1）溶液，分別在0、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣，按上述色譜條件記錄指紋圖譜。用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件進(jìn)行相似度分析，以芒柄花苷峰為參照，多點(diǎn)校正后全峰匹配，結(jié)果表明，6個(gè)供試品色譜圖與其共有模式的相似度分別為0.993、0.992、0.992、0.996、0.991、0.991，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)

2.5.1 不同批次紅芪精準(zhǔn)煮散飲片指紋圖譜的建立及特征指紋峰的標(biāo)定 按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析來自10個(gè)不同批次的紅芪精準(zhǔn)煮散飲片，所得10批紅芪精準(zhǔn)煮散飲片HPLC指紋圖譜見圖1。將10批紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的HPLC數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件，生成藥材的對(duì)照指紋圖譜及共有模式，確定20個(gè)共有特征峰。通過與對(duì)照品溶液色譜圖對(duì)比，確定其中11號(hào)為芒柄花苷，13號(hào)為毛蕊異黃酮，16號(hào)為芒柄花素，具體見圖2。

2.5.2 不同批次紅芪精準(zhǔn)煮散飲片指紋圖譜相似度評(píng)價(jià) 高效液相指紋圖譜可獲得樣品的整體信息，通過圖譜比較，可反映樣品與樣品之間的親疏程度。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版軟件，對(duì)來自10個(gè)不同批次的紅芪精準(zhǔn)煮散飲片進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)分析。結(jié)果（表1）顯示，相似度均在97%以上，表明不同批次樣品之間具有較高的相似性。

2.6 含量測定

2.6.1 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)混合對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mL，分別用甲醇稀釋至10 mL，得不同質(zhì)量濃度梯度的混合對(duì)照品溶液，各精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（），質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為芒柄花苷＝8 849 769.642 9＋ 53 684.066 7，＝0.999 7，線性范圍48.0～384.0 μg/mL；毛蕊異黃酮＝6 925 924.360 4－ 20 334.783 5，＝0.999 5，線性范圍7.3～58.2 μg/mL；芒柄花素＝7 619 655.299 5＋17 250.133 3，＝0.999 9，線性范圍31.0～248.2 μg/mL；結(jié)果表明，3種成分在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 10批紅芪精準(zhǔn)煮散飲片HPLC指紋圖譜

11-芒柄花苷 13-毛蕊異黃酮 16-芒柄花素

表1 10批紅芪精準(zhǔn)煮散飲片指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)

Table 1 Similarity evaluation of fingerprints of 10 batches of Hedysari Radix precision boiled powder decoction pieces

編號(hào)相似度 S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10對(duì)照 S11.0000.9930.9910.9950.9880.9880.9970.9950.9810.9910.996 S20.9931.0000.9960.9940.9970.9930.9920.9880.9940.9950.998 S30.9910.9961.0000.9980.9950.9980.9930.9850.9940.9970.998 S40.9950.9940.9981.0000.9910.9960.9960.9890.9890.9960.998 S50.9880.9970.9950.9911.0000.9930.9890.9850.9940.990.996 S60.9880.9930.9980.9960.9931.0000.9930.9820.9930.9950.997 S70.9970.9920.9930.9960.9890.9931.0000.9950.9820.9920.997 S80.9950.9880.9850.9890.9850.9820.9951.0000.9720.9820.991 S90.9810.9940.9940.9890.9940.9930.9820.9721.0000.9940.993 S100.9910.9950.9970.9960.9900.9950.9920.9820.9941.0000.997

2.6.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，得到芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素峰面積的RSD分別為0.84%、1.02%、0.59%，表明儀器精密度良好。

2.6.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取S1樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄化素的含量，結(jié)果芒柄花苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為59.40 μg/g，RSD為3.33%；毛蕊異黃酮平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.80 μg/g，RSD為2.90%；芒柄化素平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為213.93 μg/g，RSD為0.48%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品（S1）供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在制備后在0、2、4、10、16、24 h進(jìn)行測定，記錄峰面積，結(jié)果芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素峰面積RSD分別為3.15%、1.89%、1.99%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已測定3個(gè)成分含量的樣品（S1）6份，每份0.50 g，精密稱定，分別加入與樣品中含量相同的芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測，得芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄化素的平均加樣回收率分別為99.33%、98.08%、98.18%，RSD分別為1.46%、2.37%、1.80%。

2.6.6 樣品含量測定 取紅芪飲片和紅芪精準(zhǔn)煮散飲片，按取“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，依照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算紅芪飲片和紅芪精準(zhǔn)煮散飲片中芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素含量，結(jié)果顯示，10批次紅芪精準(zhǔn)煮散飲片中芒柄花苷、毛毛蕊異黃酮和芒柄花素的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為85.18、25.02、290.57 μg/g，較紅芪飲片中3種指標(biāo)成分平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別高出39.78%、42.97%、36.04%，結(jié)果見表2。

表2 紅芪精準(zhǔn)煮散飲片和紅芪飲片中芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素含量

Table 2 Content of ononin, calycosin and formononetin in Hedysari Radix precision boiled powder decoction pieces and Hedysarum polybotrys decoction pieces

紅芪飲片質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(μg?g?1)紅芪精準(zhǔn)煮散飲片質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(μg?g?1) 芒柄花苷毛蕊異黃酮芒柄花素芒柄花苷毛蕊異黃酮芒柄花素 20080160.6618.14212.50S183.6729.03288.75 20080260.7818.23215.00S286.1622.49293.75 20080361.4716.57213.75S384.2425.29290.00 20080461.1616.54213.75S485.6025.42290.83 20080560.3415.98210.90S585.4424.29289.58 20090160.6916.79214.76S685.8725.28285.76 20090260.7118.93213.64S784.3025.09290.40 20090361.3218.74213.79S884.4625.14290.53 20090461.7318.35215.28S986.8323.57292.67 20090560.5416.72212.55S1085.1924.59293.41 平均值60.9417.50213.59平均值85.1825.02290.57

2.7 獨(dú)立性加權(quán)分析

獨(dú)立性權(quán)重法數(shù)據(jù)之間相關(guān)性，使用回歸分析得到復(fù)相關(guān)系數(shù)（），該值越大表明共線性越強(qiáng)，則權(quán)重越低。以芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄化素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行加權(quán)評(píng)分，3種成分的權(quán)重見表3。取10批樣品3種成分的平均值進(jìn)行綜合評(píng)分，見表4。結(jié)果表明紅芪精準(zhǔn)煮散飲片煎出效果優(yōu)于傳統(tǒng)飲片；采用SPSS 25.0分析，紅芪精準(zhǔn)煮散飲片各成分與傳統(tǒng)飲片各對(duì)應(yīng)成分有顯著性差異，紅芪精準(zhǔn)煮散飲片1.00 g約相當(dāng)于傳統(tǒng)飲片1.37 g。

表3 獨(dú)立性權(quán)重法計(jì)算結(jié)果

Table 3 Calculation results of independence weight method

成分R1/R權(quán)重/% 芒柄花苷0.9981.00232.65 毛蕊異黃酮0.9391.06534.71 芒柄花素0.9981.00232.64

表4 紅芪精準(zhǔn)煮散飲片與紅芪飲片綜合得分比較

Table 4 Comparison of comprehensive scores between H. polybotrys precision boiled powder decoction pieces and H. polybotrys decoction pieces

樣品芒柄花苷毛蕊異黃酮芒柄花素綜合得分 紅芪精準(zhǔn)煮散飲片85.1825.02290.57131.34 紅芪飲片60.9417.50213.5995.69

3 討論

歷代典籍對(duì)煮散和散劑的粒度描述有“粗末”“末”“細(xì)末”“如麻豆大”“粗散”等，煮散粉碎粒度對(duì)中藥有效成分的煎出影響較大，而確定傳統(tǒng)方劑中粒度描述與現(xiàn)代粒徑計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)的一一對(duì)應(yīng)關(guān)系則是煮散和散劑“遵古”開發(fā)的關(guān)鍵步驟[18]。本課題組制備紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的關(guān)鍵是確定其最佳粒度。經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，比較不同粒度煮散飲片的煎煮效果及成分溶出度，確定了最佳粒度為0.200～0.400 cm。為了從實(shí)際可行性角度評(píng)估“遵古考證粒度”結(jié)果的可行性，對(duì)紅芪精準(zhǔn)煮散飲片進(jìn)行指紋圖譜研究及指標(biāo)性成分含量測定，可為確定其與傳統(tǒng)飲片臨床用藥量的換算關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)分別考察了不同提取溶劑（水、50%～90%甲醇、50%～90%乙醇）、提取方法（超聲提取、回流提?。⑻崛r(shí)間（20、30、40、50 min）對(duì)紅芪指紋圖譜的影響，結(jié)果顯示，70%甲醇提取時(shí)所得樣品的指紋圖譜出峰多，雜峰干擾較少，分離度好，故選擇70%甲醇作為提取溶劑。不同提取方法、提取時(shí)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用超聲提取與回流提取沒有顯著性差別，因回流提取操作較為復(fù)雜且轉(zhuǎn)移樣品易損失，故采用超聲提?。怀?0 min后色譜峰面積變化不大，說明提取完全，確定提取時(shí)間為40 min。

色譜條件優(yōu)化根據(jù)已有關(guān)于紅芪藥材指紋圖譜及指標(biāo)成分含量測定的文獻(xiàn)報(bào)道，采用乙腈-磷酸水系統(tǒng)作為流動(dòng)相，254 nm為檢測波長?？疾炝?.1%甲酸、0.1%磷酸、0.2%磷酸對(duì)指紋圖譜出峰情況及分離度的影響，結(jié)果顯示，用乙腈-0.2%磷酸緩沖液進(jìn)行梯度洗脫，色譜峰型較為理想。

本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用HPLC建立了紅芪精準(zhǔn)煮散飲片指紋圖譜，對(duì)比紅芪精準(zhǔn)煮散飲片和紅芪飲片3種指標(biāo)成分的含量差異，并以芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄化素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行加權(quán)評(píng)分，得到紅芪精準(zhǔn)煮散飲片約相當(dāng)于1.37 g傳統(tǒng)飲片量的換算關(guān)系。本研究建立的指紋圖譜及含量測定方法可為紅芪精準(zhǔn)煮散飲片的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

煮散既保留了湯方特色，而較之湯劑，在提高藥物指標(biāo)成分的煎出率、節(jié)省藥材、降低成本等方面具有極大的優(yōu)越性，開發(fā)精準(zhǔn)煮散飲片具有批量規(guī)模穩(wěn)定化、批內(nèi)質(zhì)量均一化，可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、高效自動(dòng)化分裝、調(diào)劑、煎煮流程，且用藥量少、便于攜帶及服用等諸多優(yōu)點(diǎn)，在臨床上具有廣闊應(yīng)用前景。但煮散在煎煮過程中易出現(xiàn)糊鍋現(xiàn)象，含揮發(fā)性成分的煮散藥材在貯存過程中也存在成分易損失等問題。因此，對(duì)煮散的制備及其開發(fā)利用還需要進(jìn)一步深入研究，如開展不同藥用部位及含有特殊成分中藥的煮散研究，進(jìn)行針對(duì)煮散粗碎及貯存的專業(yè)儀器開發(fā)，以及煮散規(guī)范化制備及其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究等，為煮散的產(chǎn)業(yè)開發(fā)及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典[S]. 一部. 2020: 159.

[2] 李俊岳, 強(qiáng)正澤, 李成義. 紅芪的本草考證 [J]. 中國藥房, 2015, 26(34): 4860-4862.

[3] 馮慧敏, 李成義, 何軍剛, 等. 紅芪化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物(Q-Marker) 的預(yù)測分析 [J]. 中草藥, 2021, 52(9): 2831-2842.

[4] 張淑娟, 張育貴, 辛二旦, 等. 紅芪研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測分析 [J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2022, 40(1): 70-74.

[5] 許京, 葉迎, 王瑞海, 等. 甘肅紅芪和黃芪血清移行成分對(duì)比研究 [J]. 中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2019, 25(2): 228-232.

[6] 牛江濤, 曹瑞, 司昕蕾, 等. 紅芪與黃芪免疫調(diào)節(jié)和抗氧化作用對(duì)比研究進(jìn)展 [J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2021, 39(4): 21-23.

[7] 張淑娟. 基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物的炙黃芪和炙紅芪質(zhì)量控制研究 [D]. 蘭州: 甘肅中醫(yī)藥大學(xué), 2021.

[8] 孫玉雯, 仝小林, 王菲, 等. 中藥煮散與飲片煎煮效率的對(duì)比研究I. 部分根和根莖類、花類、葉類和全草類藥材 [J]. 中藥材, 2016, 39(3): 598-602.

[9] 俱蓉, 李響, 朱向東, 等. 中藥煮散的歷史沿革、制備工藝及藥效學(xué)研究進(jìn)展 [J]. 中國藥房, 2020, 31(23): 2924-2927.

[10] 陳士林, 黃志海, 丘小惠, 等. 中藥精準(zhǔn)煮散飲片 [J]. 世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2016, 18(9): 1430-1440.

[11] 李碩, 王本歡, 朱向東, 等. 干燥時(shí)間對(duì)9種常用隴藥煮散顆粒粉體學(xué)特性的影響[J]. 中藥材, 2021, 44(5): 1189-1195.

[12] 李越峰, 牛江濤, 曹瑞, 等. 甘肅道地藥材紅芪與炙紅芪指紋圖譜對(duì)比研究 [J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2019, 39(16): 1634-1638.

[13] 楊秀娟, 李碩, 楊志軍, 等. 甘肅不同產(chǎn)地紅芪的HPLC指紋圖譜及化學(xué)模式識(shí)別 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2018, 33(7): 3070-3073.

[14] 葉迎, 王瑞海, 包強(qiáng), 等. 甘肅一、二年生紅芪與黃芪黃酮類成分指紋圖譜分析 [J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2018, 24(3): 83-89.

[15] 柳小亞, 李繼平, 陳心悅, 等. HPLC同時(shí)測定紅芪中8個(gè)活性成分的含量及聚類分析 [J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 51(5): 786-791.

[16] 陸雪琴, 趙亮, 周潔, 等. 多指標(biāo)綜合加權(quán)評(píng)分法優(yōu)選復(fù)方夏枯草洗劑提取工藝研究 [J]. 天津中醫(yī)藥, 2020, 37(12): 1431-1435.

[17] 李俊岳, 強(qiáng)正澤, 羅旭東, 等. 甘肅不同產(chǎn)地、不同月份紅芪中4種異黃酮的含量特征研究 [J]. 中藥材, 2017, 40(3): 562-567.

[18] 焦其樹, 郝麗霞, 吳治麗, 等. 經(jīng)典名方中煮散和散劑粒度探討 [J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2021, 27(1): 1-6.

Establishment of HPLC fingerprint ofprecision boiled powder decoction pieces and determination of three indicative components

LI Shuo1, 2, 3, JU Rong1, YANG Xiu-Juan1, ZHAO Lin-hua4, TONG Xiao-lin4

1. Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China 2. Key Laboratory of Chemistry and Quality for Traditional Chinese Medicines of the College of Gansu Province, Lanzhou 730000, China 3. Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality and Standard, Lanzhou 730000, China 4. Guang’anmen Hospital, China Academy of Chinese Medical Science, Beijing 100053, China

To establish the HPLC fingerprint and the content determination method of the three indicative components of Hongqi () precision boiled powder decoction pieces.HPLC was used to determine the contents of ononin, calycosin and formononetin intraditional decoction pieces andprecision boiled powder decoction pieces. The chromatographic column was Robusta C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm), the mobile phase was acetonitrile-0.2% phosphoric acid solution, and the gradient elution was used. The detection wavelength was 254 nm; The flow rate is 1.0 mL/min; 20 μL of sample injection; Column temperature is 30 ℃.The characteristic fingerprint ofprecision boiled powder decoction pieces was established, and three main peaks of 20 common peaks, namely ononin (peak 11), calycosin (peak 13) and formononetin (peak 16), were identified. The linear relationship between the three components was good within their respective ranges (≥ 0.9995), with the average recovery rate of 98.08%—99.33% and RSD of 1.46%—2.37%. Through the weighted score, comparing these three components in theprecision boiled powder decoction pieces with the traditional decoction pieces, it is found that 1 g ofprecision boiled powder decoction pieces is about 1.37 g of the traditional decoction pieces.The established fingerprint and content determination method can provide the basis for the quality control and evaluation ofprecision boiled powder decoction pieces.

; precision boiled powder decoction pieces; HPLC; fingerprint; ononin; calycosin; formononetin; quality evaluation

R263.02

A

0253 - 2670(2022)16 - 5020 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.16.011

2022-02-16

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81960713）；國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（82160755）；甘肅省高等學(xué)校創(chuàng)新基金項(xiàng)目（2021A-079）；甘肅省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（18JR3RA201）；甘肅省青年科技基金項(xiàng)目（20JR10RA331）；甘肅省中醫(yī)藥科研課題項(xiàng)目（GZKZ-2021-7）；甘肅省高校中（藏）藥化學(xué)與質(zhì)量研究省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（zzy-2018-06）；敦煌醫(yī)學(xué)與轉(zhuǎn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2020 年度開放課題（DHYX20-10）

李 碩（1981—），女，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)及產(chǎn)品開發(fā)研究。Tel: 13919824303 E-mail: 290608323@qq.com

仝小林（1956—），男，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，中國科學(xué)院院士。Tel: 13910662116 E-mail: tongxiaolin@vip.163.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]