郭 潔 方 玲

結(jié)腸直腸癌(CRC)是由遺傳和環(huán)境因素相互作用引起的非常異質(zhì)的疾病[1]。 每年約有1235108人被診斷為CRC，每年約有609051人死于CRC[2-5]。研究表明，大腸息肉可能會(huì)發(fā)展成惡性腫瘤，因此，對(duì)其診斷和治療成為預(yù)防結(jié)直腸癌的關(guān)鍵之一[6]。早期選擇性切除結(jié)直腸息肉是預(yù)防結(jié)直腸癌的關(guān)鍵。已有研究表明，CEA,IL-2,MMP-2以及MMP-9水平在腫瘤Ⅰ、Ⅱ期患者與Ⅲ、Ⅳ期患者之間有顯著相關(guān)性[7]。鑒于此，本文旨在探討息肉切除術(shù)治療早期結(jié)直腸癌對(duì)患者血清中CEA,IL-2,MMP-2以及MMP-9水平的影響，期望為臨床上結(jié)直腸息肉切除后患者的生化狀態(tài)提供參考，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2021年5月本院收治的104例結(jié)直腸癌患者為研究對(duì)象，其中，男性61例，女性43例；年齡24～73歲。根據(jù)形態(tài)學(xué)分類方法[8]，其中有蒂隆起型病變49例，無蒂隆起型病變22例，亞蒂隆起型病變33例。

1.2 治療方法

采取冷圈套息肉切除術(shù)。冷圈套息肉切除術(shù)是一種易于應(yīng)用的技術(shù)，已成為小型息肉的常用技術(shù)[9]。將圈套鞘推進(jìn)，打開圈套并圍繞息肉。 然后圈套慢慢地逐漸閉合，捕獲息肉周圍1～2 mm的正常組織，直至完全閉合并且息肉被切斷。

1.3 樣本采集

采集104例早期結(jié)直腸癌患者息肉切除手術(shù)前后肘前靜脈血5 ml。采用紅細(xì)胞溶解法分離有核細(xì)胞。采用TRIZOL法抽取總RNA。利用核酸蛋白檢測(cè)儀測(cè)定樣品的OD230、OD260和OD280，OD260與OD280的比值在1.7至2.0之間，用1%的瓊脂糖膠進(jìn)行電泳檢測(cè)提取的RNA質(zhì)量，5S、18S和28S的條帶清晰可見。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 血清標(biāo)志物的mRNA水平 用Taka逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號(hào)：RR037A)將提取的總RNA中的mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。用南京諾唯贊RT-qPCR試劑盒(貨號(hào)：Q711)，在ABI的qPCR儀(型號(hào)：7500)進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)。使用PRIMER 5.0設(shè)計(jì)qPCR引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列如表1。

表1 目的基因和內(nèi)參基因引物

1.4.2 血清標(biāo)志物的蛋白水平 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，使用江萊ELISA試劑盒(貨號(hào)：JL29650,JL13635,JL19231,JL10977)檢測(cè)息肉切除術(shù)前后CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9的蛋白水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 息肉切除術(shù)治療前后血清腫瘤標(biāo)志物CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9的mRNA水平的比較

經(jīng)過冷圈套息肉切除術(shù)治療后，在mRNA水平上，患者血清中腫瘤標(biāo)志物CEA、MMP-2和MMP-9的水平明顯下降，且治療前后差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中CEA具有顯著差異(P<0.05)，MMP-2和MMP-9具有極顯著差異(P<0.01)。而IL-2在治療后在mRNA水平上有略微的上升，但差異不明顯，見圖1。

注：*P<0.05，**P<0.01，NS：無明顯差異。

2.2 息肉切除術(shù)治療前后血清腫瘤標(biāo)志物CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9的蛋白水平的比較

經(jīng)過冷圈套息肉切除術(shù)治療后，在蛋白表達(dá)水平上，患者血清中腫瘤標(biāo)志物CEA，MMP-2和MMP-9的水平明顯下降，且治療前后差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而IL-2的蛋白水平治療前后差異不明顯，見表2。

表2 治療前后血清中CEA IL-2、MMP-2和MMP-9蛋白水平比較

3 討論

結(jié)腸直腸癌是全球診斷的第三大常見癌癥。雖然流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示世界各地的結(jié)直腸癌發(fā)病率顯著變化，但總體發(fā)病率呈緩慢但穩(wěn)定下降趨勢(shì)，主要集中在發(fā)達(dá)國家[10]。但是，我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率均高于世界平均水平[11]。因此，早診早治水平的提高至關(guān)重要，其中，內(nèi)鏡息肉切除術(shù)是治療早期結(jié)直腸癌的重要手段之一。

癌胚抗原(CEA)是結(jié)直腸癌患者中最常用的腫瘤標(biāo)志物[12]，屬于免疫球蛋白超家族分子的高分子量糖蛋白，起著促進(jìn)人類結(jié)腸直腸癌細(xì)胞聚集的細(xì)胞間粘附分子的作用[13]。大腸癌患者的CEA增加約60%至85%[14]。

T細(xì)胞在免疫應(yīng)答過程中產(chǎn)生的IL-2是一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子。IL-2誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，促進(jìn)B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生和增殖，并且是活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡所必需的。此外，IL-2增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞活性并促進(jìn)干擾素分泌[15]。因此，IL-2在免疫細(xì)胞和免疫應(yīng)答的增殖中起著核心作用。另外，IL-2水平反映了細(xì)胞免疫活性。當(dāng)細(xì)胞免疫功能受到抑制時(shí)，IL-2水平明顯下降[16]。

迄今為止，已經(jīng)描述了20多種MMPs[17]。明膠酶MMP-2和MMP-9對(duì)癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移有著潛在貢獻(xiàn)[18]。已經(jīng)報(bào)道了許多類型的人類癌癥和細(xì)胞培養(yǎng)以及癌癥動(dòng)物模型中MMP-2和MMP-9表達(dá)水平的顯著增加，從而為明膠酶水平與癌癥侵入或轉(zhuǎn)移之間的強(qiáng)關(guān)聯(lián)提供了證據(jù)[19]。

本研究中，息肉切除術(shù)治療早期結(jié)直腸癌后，與治療前相比，CEA、MMP-2和MMP-9的mRNA水平明顯下降，IL-2的mRNA水平略微上升；CEA、MMP-2和MMP-9的蛋白水平明顯下降，IL-2的蛋白水平略有上升，2組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9的mRNA水平與其蛋白質(zhì)水平高度相似，說明CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9蛋白在結(jié)直腸癌中的調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平上的，而不是經(jīng)由蛋白質(zhì)翻譯后修飾或者降解的途徑。

綜上所述，息肉切除術(shù)治療早期結(jié)直腸癌后，患者血清中的CEA、MMP-2以及MMP-9在mRNA水平和蛋白水平上均有明顯下降，IL-2在mRNA水平和蛋白水平上略有上升。