邢宏彬 張國(guó)強(qiáng) 楊勇豪

胃癌是由遺傳、飲食習(xí)慣、工作生活環(huán)境等多種因素導(dǎo)致的癌癥，其發(fā)病率每年遞增[1]。據(jù)報(bào)道，我國(guó)每年有70多萬(wàn)人確診為胃癌，其5年復(fù)發(fā)率為30%～40%[2]。胃癌早期無(wú)典型癥狀，被發(fā)現(xiàn)時(shí)已是中晚期，影響預(yù)后。因此，胃癌的早期診斷意義重大[3]。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2(transglutaminase-2，TGM2)是一種與Ca2+結(jié)合后，可以發(fā)生蛋白交聯(lián)變化的多功能蛋白，能通過誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，發(fā)揮細(xì)胞黏附作用。有研究報(bào)道，TGM2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多種癌癥中呈現(xiàn)高表達(dá)[4]。轉(zhuǎn)錄輔阻遏因子2(C-terminal binding protein 2，CtBP2)的主要功能是轉(zhuǎn)錄抑制，可與連接蛋白或DNA轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，召集啟動(dòng)子，從而阻止基因表達(dá)。在肺癌中CtBP2通過靶基因去磷酸化，加快細(xì)胞增殖；在前列腺癌中激活相關(guān)信號(hào)通路，增加細(xì)胞侵襲能力；在乳腺癌中調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，促使細(xì)胞增殖。陸娟等[5]研究發(fā)現(xiàn)，CtBP2與卵巢癌的發(fā)生有關(guān)，在卵巢癌組織中，CtBP2可以沉默卵巢癌癌基因，減少癌細(xì)胞侵襲。但是關(guān)于TGM2和CtBP2與胃癌關(guān)系的報(bào)道較少，因此本研究探討TGM2和CtBP2在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)及意義分析，旨在為胃癌的早期診斷提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采集本院于2018年1月至2018年12月收治的124例胃癌患者的癌組織，另取距癌邊緣5 cm處的癌旁組織為對(duì)照。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查確診為胃癌；②年齡大于18周歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他胃部疾病患者；②合并心肝腎肺功能障礙和其他惡性腫瘤患者；③嗜酒患者；④精神類疾病患者；⑤化療和放療病史患者。其中，男性74例，女性50例；年齡38～79歲，平均(56.32±8.27)歲。

1.2 方法

對(duì)胃癌組織和癌旁組織進(jìn)行免疫組化染色，操作嚴(yán)格按照試劑盒(廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司)說明書進(jìn)行。①采用半定量積分法判定TGM2結(jié)果，TGM2陽(yáng)性為細(xì)胞膜質(zhì)中觀察到棕黃色染色。以染色強(qiáng)度計(jì)分：棕褐色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無(wú)色0分。在光鏡(×200)下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≥76%為4分，51%～75%為3分，26%～50%為2分，10%～25%為1分,<10%為0分。兩項(xiàng)的乘積得分≥6分為陽(yáng)性，反之為陰性[6]。②采用半定量積分法判定CtBP2結(jié)果，CtBP2陽(yáng)性為細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色染色。以染色強(qiáng)度計(jì)分：棕褐色3分，棕黃色2分，淺黃色1分，無(wú)色0分。在光鏡(×200)下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞百分比大于80%為4分，51%～80%為3分，11%～50%為2分，小于10%為1分。兩項(xiàng)的乘積得分大于4分為高表達(dá)，反之低表達(dá)[7]。

1.3 隨訪

對(duì)本研究胃癌患者，于術(shù)后通過電話詢問、門診復(fù)診等方式隨訪，統(tǒng)計(jì)患者的死亡率，以患者死亡為觀察終點(diǎn)，隨訪截止時(shí)間是2020年12月。

1.4 觀察指標(biāo)

癌組織和癌旁組織中TGM2和CtBP2的表達(dá)差異，并比較TGM2和CtBP2表達(dá)水平與臨床病理特征以及患者3年生存率的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組組織中TGM2和CtBP2表達(dá)情況比較(表1)

表1 兩組組織中TGM2和CtBP2表達(dá)情況比較/%

2.2 癌組織中TGM2表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

TGM2在分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的胃癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率高于分化程度高、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的胃癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑的胃癌組織中無(wú)明顯差異(P>0.05)，見表2。

表2 TGM2表達(dá)水平與胃癌臨床病理的關(guān)系(例，%)

2.3 癌組織中CtBP2表達(dá)水平與其臨床病理特征關(guān)系

CtBP2在分化程度低的胃癌組織中，高表達(dá)率高于分化程度高的胃癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度和臨床分期的胃癌組織中無(wú)明顯差異(P>0.05)。見表3。

表3 CtBP2表達(dá)與胃癌臨床病理的關(guān)系(例，%)

2.4 不同TGM2和CtBP2表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系

對(duì)124例胃癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪36個(gè)月，以患者胃癌復(fù)發(fā)死亡為觀察終點(diǎn)，死亡71例，3年總生存率是42.74%(53/124)。TGM2陰、陽(yáng)性患者3年生存率分別是75.61%(31/41)、26.51%(22/83)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.038，P=0.000)，見圖1。CtBP2高、低表達(dá)者3年生存率分別是32.86%(23/70)、55.56%(30/54)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.418，P=0.011)，見圖2。

圖1 不同TGM2表達(dá)胃癌患者生存曲線圖

圖2 不同CtBP2表達(dá)胃癌患者生存曲線圖

3 討論

有報(bào)告統(tǒng)計(jì)，在全球易發(fā)的癌癥當(dāng)中，胃癌可位于第五名，致使癌癥死亡的原因當(dāng)中排名第三[8]。在中國(guó)，胃癌的發(fā)病率躍居第二名，死亡率也有較高水平，排名第三[9]。提高診治效果，延長(zhǎng)患者的生存期，是臨床治療胃癌追求的目標(biāo)。內(nèi)鏡檢查能直接觀察到病灶，再通過染色、放大等操作對(duì)不典型或者疑似病灶進(jìn)行評(píng)估，進(jìn)而幫助胃癌早期診斷，被稱為消化道早癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。日本有研究報(bào)道，內(nèi)鏡檢查因其造成的手術(shù)創(chuàng)傷小，患者痛苦少且術(shù)后恢復(fù)快，所帶來的效益比消化道鋇餐X線更高[10]。但是，內(nèi)鏡檢查需要依靠設(shè)備和醫(yī)師力量，并且由于需要將設(shè)備伸入人體內(nèi)部，有可能導(dǎo)致并發(fā)癥，對(duì)于經(jīng)驗(yàn)不足的醫(yī)師，因操作失誤可能會(huì)釀成嚴(yán)重后果，因此患者的依從性差，而腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)普遍為大眾患者所接受。本研究通過探討TGM2和CtBP2在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)及意義分析，旨在為胃癌的早期診斷提供新思路。

有很多學(xué)者探索胃病的發(fā)病原因，但仍未有明確的結(jié)果[11]。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶家族，在許多研究癌癥的文獻(xiàn)中有過報(bào)道[12]。TGM2與其他轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶成員不同的是，它與Ca2+依賴性交聯(lián)，Ca2+的水平以及TGM2和三磷酸鳥苷結(jié)合的結(jié)果決定了TGM2的功能，即TGM2是加速細(xì)胞凋亡還是保護(hù)細(xì)胞避免凋亡。本研究結(jié)果提示TGM2參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展，可以作為胃癌早期診斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，并能評(píng)估胃癌的進(jìn)展。Torres等[13]通過比較健康受試者以及子宮內(nèi)膜異位癥和子宮內(nèi)膜癌患者中，TGM2在血漿樣本的水平，并采用回歸分析發(fā)現(xiàn)TGM2能成為子宮內(nèi)膜癌診斷的標(biāo)志物。譚智軍等[14]分析TGM2表達(dá)和結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)TGM2表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，從而提示TGM2參與了結(jié)腸癌疾病的發(fā)生和發(fā)展，可以用來評(píng)估病情。本研究結(jié)論與上述研究一致。TGM2在胃癌組織中，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞外信號(hào)的通路，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移，同時(shí)TGM2能促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為侵襲性更強(qiáng)的基質(zhì)細(xì)胞，加速癌細(xì)胞的擴(kuò)散。TGM2陰性患者3年生存率高于陽(yáng)性患者，提示TGM2與胃癌預(yù)后密切相關(guān)，與安健健等[15]研究結(jié)論相符。

CtBP2在腫瘤的基因轉(zhuǎn)錄中表現(xiàn)出不同的性質(zhì)，它可以與腫瘤的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，從而促進(jìn)腫瘤基因表達(dá)；此外，它還能召集相關(guān)蛋白酶阻止DNA轉(zhuǎn)錄。本研究結(jié)果提示CtBP2參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展，可以作為胃癌早期診斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，并能評(píng)估胃癌的進(jìn)展。郭春芳等[16]研究發(fā)現(xiàn)，CtBP2參與了卵巢癌的發(fā)生，并且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分級(jí)、臨床分期有關(guān)，可以作為早癌診斷的標(biāo)志物，本研究結(jié)論與其一致。CtBP2能降低鈣黏蛋白的水平，加快上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，從而提高腫瘤在胃癌組織中的侵襲能力。CtBP2低表達(dá)患者3年生存率高于高表達(dá)患者，提示CtBP2與胃癌預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，TGM2和CtBP2在胃癌組織中表達(dá)水平比癌旁組織中更高；TGM2表達(dá)水平與分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，CtBP2表達(dá)水平與分化程度有關(guān)；且TGM2陰性率和CtBP2低表達(dá)胃癌患者的生存率更高。TGM2和CtBP2可以作為胃癌疾病早期診斷的標(biāo)志物，并能用于病情評(píng)估和預(yù)后判斷。