郭嘉媛，洪永河，黃健強(qiáng)，吳亦靈，王宗華，陳松彪，陳曉峰

（1.閩江學(xué)院地理與海洋學(xué)院，福建 福州 350108；2.福建農(nóng)林大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，福建 福州 350002）

0 引言

【研究意義】水稻（Oryza sativa）是世界上最重要的糧食作物之一，養(yǎng)育著世界50%以上的人口，更是我國65%以上人口的主食，其產(chǎn)量及生產(chǎn)安全關(guān)乎國計(jì)民生。而由稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）引起的稻瘟病常年危害水稻生產(chǎn)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，平均每年因稻瘟病導(dǎo)致的全球水稻產(chǎn)量損失可達(dá)10%~30%[1?2]?？梢?，稻瘟病是全球范圍內(nèi)糧食生產(chǎn)中的重要限制因子，是全球糧食安全治理的重中之重，系統(tǒng)、深入地解析稻瘟病菌的致病機(jī)理對稻瘟病的綠色防控具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】與其他病原微生物相似，稻瘟病菌在侵染過程中會分泌效應(yīng)因子到宿主細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間隙，通過改變宿主細(xì)胞正常的生命活動，例如免疫反應(yīng)和新陳代謝，來促進(jìn)對宿主的侵染[3?4]。無毒效應(yīng)因子（avirulence effector，AVR effector）是一類特殊的效應(yīng)因子，由無毒基因編碼，它們除了具有調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)等一般效應(yīng)因子的功能，還能直接或間接地被宿主的抗病蛋白（resistance protein）所識別，從而激發(fā)宿主ETI反應(yīng)（effector-triggered immunity）。因此，稻瘟病菌無毒效應(yīng)因子一直都是稻瘟病菌致病機(jī)理研究中的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。迄今為止，稻瘟病菌中被成功克隆的無毒基因僅有12個(gè)[5]，而很長一段時(shí)間內(nèi)關(guān)于無毒基因的研究主要集中在新無毒基因的克隆及已克隆無毒基因的變異機(jī)理上，在其功能機(jī)理方面缺乏系統(tǒng)而深入的研究，目前僅有AvrPiz-t、Avr-Pii與Avr-Pita的水稻靶標(biāo)有研究報(bào)道[6?14]，如表1所示。最近有研究顯示，AvrPiz-t、Avr-Pii、Avr-Pia、PWL2、Avr-Pi9、Avr-PikC和Avr-PikD等都可與水稻去泛素化酶PIC1互作，其中Avr-Pi9可通過降解PICI1來抑制水稻免疫反應(yīng)[15]。總而言之，當(dāng)前有關(guān)稻瘟病菌無毒效應(yīng)因子作用機(jī)理的了解和認(rèn)識仍十分有限，尚不足以支撐我們將已獲得的理論數(shù)據(jù)廣泛地與日新月異的分子育種技術(shù)相結(jié)合以指導(dǎo)水稻抗病育種。AVR-Pik/Pik是稻瘟病菌與水稻互作系統(tǒng)中的一對編碼產(chǎn)物可直接相互作用的無毒基因/抗病基因組合。稻瘟病菌無毒基因AVR-Pik具有多個(gè)等位基因，群體進(jìn)化分析結(jié)果顯示，AVR-PikD是最為常見的，也是進(jìn)化上最原始的[16]。水稻抗病基因Pik同樣也是一個(gè)復(fù)等位基因，每個(gè)等位基因均由兩個(gè)緊密連鎖、走向相反的ORF組成，分別編碼Pik-1與Pik-2，二者功能相對獨(dú)立。無毒效應(yīng)因子Avr-Pik能與Pik-1直接互作，而Pik-2則與ETI反應(yīng)的激活有關(guān)，它能與Pik-1直接互作，使得抗病反應(yīng)信號從Avr-Pik傳遞給了Pik-2，從而激活特異的ETI反應(yīng)[17]。【本研究切入點(diǎn)】目前，對AVR-PikD的研究幾乎都集中在其與Pik的共進(jìn)化關(guān)系方面，而對Avr-PikD作用的宿主靶標(biāo)及其在稻瘟病菌致病過程中的作用機(jī)理方面鮮有研究報(bào)道。有鑒于此，我們前期借助酵母雙雜交技術(shù)、以去除信號肽的Avr-PikD為誘餌篩選了接種稻瘟病菌后的水稻的均一化cDNA文庫，獲得了若干候選互作蛋白?！緮M解決的關(guān)鍵問題】利用酵母雙雜交、pull-down、Co-IP、熒光素酶互補(bǔ)成像試驗(yàn)以及在水稻原生質(zhì)體中的共定位分析等多種方法對其中一個(gè)候選互作蛋白OsDjA9與Avr-PikD的互作關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證，明確水稻蛋白OsDjA9是否為稻瘟病菌無毒效應(yīng)因子Avr-PikD的作用靶標(biāo)，為進(jìn)一步揭示稻瘟病菌無毒效應(yīng)因子 Avr-PikD的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

表1 目前已知的稻瘟病菌無毒效應(yīng)因子的水稻靶標(biāo)Table 1 Currently known rice targets for AVR effectors of M.oryzae

1 材料與方法

1.1 酵母雙雜交試驗(yàn)

以水稻品種日本晴的總cDNA為模板、使用引物Y2H-F/R（表2）擴(kuò)增獲得OsDjA9的全長CDS片段，并亞克隆進(jìn)pGADT7載體獲得重組質(zhì)粒pGADT7-OsDjA9，經(jīng)測序鑒定無誤后，與篩庫用的誘餌質(zhì)粒pGBKT7-AvrPikDNS（無信號肽Avr-PikD）共轉(zhuǎn)化酵母菌株AH109感受態(tài)細(xì)胞（試驗(yàn)組），同時(shí)分別以pGADT7-RecT與pGBKT7-53、pGADT7-RecT與pGBKT7-Lam、pGADT7-OsDjA9與pGBKT7以及pGADT7與pGBKT7-AvrPikDNS等組合進(jìn)行的共轉(zhuǎn)化為對照組。酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化使用 Invitrogen 公司的S.c.EasyCompTMTransformation Kit，具體方法參見試劑盒說明書。將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物均勻涂布于SD/-Leu/-Trp平板篩選共轉(zhuǎn)成功的陽性克隆子，而后隨機(jī)挑選若干陽性克隆子培養(yǎng)并調(diào)整細(xì)胞含量分別達(dá)到 106、104和 103個(gè)·mL?1，分別取 5 μL 不同濃度菌液點(diǎn)滴接種至 SD-Leu/-Trp 和含有 10 mmol·L?13-AT的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平 板上，于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)3~5 d后，觀察菌落生長與顯色情況。若菌落能在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上正常生長且顯藍(lán)色，則表明Avr-PikD能與OsDjA9發(fā)生互作。

表2 本研究所用引物序列Table 2 Sequences of primers used in this study

1.2 Pull-down 試驗(yàn)

使用引物GST-F/R、MBP-F/R分別擴(kuò)增Avr-PikDNS與OsDjA9的CDS片段，并分別亞克隆進(jìn)含有GST標(biāo)簽的載體pGEX-4T-1與含有MBP標(biāo)簽的載體pMAL-c2X，獲得重組融合表達(dá)載體GSTAvrPikDNS與MBP-OsDjA9，經(jīng)測序鑒定無誤后，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌菌株BL21的感受態(tài)細(xì)胞中。獲得相應(yīng)陽性克隆后，通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并純化出GST-AvrPikDNS蛋白、MBP-OsDjA9蛋白以及作為對照的GST蛋白、MBP蛋白后，將結(jié)合有GSTAvrPikDNS蛋白的GST磁珠分別與純化的MBPOsDjA9蛋白（試驗(yàn)組）和MBP蛋白（對照組）混勻，將結(jié)合有GST蛋白的GST磁珠與純化的MBPOsDjA9蛋白混勻（對照組），4 ℃孵育過夜后，通過蛋白免疫印跡試驗(yàn)（western blot），并分別使用GST抗體和MBP抗體檢測各組洗脫液中所含的蛋白。若試驗(yàn)組能同時(shí)檢測到GST-AvrPikDNS與MBP-OsDjA9兩種蛋白，而對照組只能分別檢測到原先磁珠上結(jié)合的誘餌蛋白，則表明Avr-PikD能與OsDjA9在體外發(fā)生互作。

1.3 Co-IP 試驗(yàn)及亞細(xì)胞共定位分析

使用引物GFP-F/R、RFP-F/R分別擴(kuò)增OsDjA9與Avr-PikDNS的CDS片段，并分別亞克隆進(jìn)含有GFP標(biāo)簽的載體pRTVcGFP與含有RFP標(biāo)簽的載體pRTVcRFP，獲得重組融合表達(dá)載體OsDjA9-GFP與AvrPikDNS-RFP，經(jīng)測序鑒定無誤后，參照水稻原生質(zhì)體遺傳轉(zhuǎn)化的方法[18]，分別將OsDjA9-GFP與AvrPikDNS-RFP（試驗(yàn)組）以及OsDjA9-GFP與空載體pRTVcRFP（對照組）共轉(zhuǎn)進(jìn)水稻原生質(zhì)體中。室溫孵育18~24 h后收集原生質(zhì)體，一方面，借助激光共聚焦顯微鏡觀察OsDjA9與Avr-PikDNS的定位情況；另一方面，提取水稻原生質(zhì)體總蛋白，向其中加入適量GFP磁珠，4 ℃孵育過夜后，通過western blot，并分別使用GFP抗體和RFP抗體檢測試驗(yàn)組和對照組洗脫液中所含的蛋白。若激光共聚焦顯微鏡能觀察到OsDjA9與Avr-PikDNS存在共定位情況，且western blot在試驗(yàn)組能同時(shí)檢測到OsDjA9-GFP與AvrPikDNS-RFP兩種蛋白，而在對照組只能檢測到OsDjA9-GFP蛋白，則表明Avr-PikD能與OsDjA9在水稻細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行互作。

1.4 熒光素酶互補(bǔ)成像試驗(yàn)

使用引物NLuc-F/R、CLuc-F/R分別擴(kuò)增Avr-PikDNS與OsDjA9的CDS片段，并分別亞克隆進(jìn)pCAMBIA1300-NLuc與pCAMBIA1300-CLuc載 體，獲得重組融合表達(dá)載體NLuc-AvrPikDNS與CLuc-OsDjA9，經(jīng)測序鑒定無誤后，將二者及兩個(gè)空載分別導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌菌株GV3101。獲得相應(yīng)陽性克隆后，參照農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時(shí)表達(dá)方法[6]，將NLuc-AvrPikDNS與CLuc-OsDjA9（ 試 驗(yàn) 組）、pCAMBIA1300-NLuc與pCAMBIA1300-CLuc（陰性對照組）、NLuc-AvrPikDNS與pCAMBIA1300-CLuc（陰性對照組）、pCAMBIA1300-NLuc與CLuc-OsDjA9（陰性對照組）以及NLuc-AvrPiz-t與CLuc-APIP5（陽性對照組）兩兩混勻后共注射至生產(chǎn)旺盛期的本氏煙葉背面，22 ℃黑暗培養(yǎng)48 h后，在葉片上均勻涂布熒光素酶底物D-熒光素，置于植物活體成像儀觀察熒光。若只有試驗(yàn)組和陽性對照組可觀察到熒光，則表明Avr-PikD能與OsDjA9在煙草細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行互作。

1.5 互作相關(guān)結(jié)構(gòu)域鑒定試驗(yàn)

借助Prosite數(shù)據(jù)庫中的在線蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域預(yù)測工具（https://prosite.expasy.org/）對OsDjA9蛋白所含保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測分析，而后使用結(jié)構(gòu)域特異引物擴(kuò)增相應(yīng)CDS片段，并分別亞克隆進(jìn)pGADT7載體，再通過酵母雙雜交試驗(yàn)鑒定出OsDjA9蛋白中參與互作的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。酵母雙雜交試驗(yàn)具體方法參見1.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 酵母雙雜交試驗(yàn)驗(yàn)證 Avr-PikD 與 OsDjA9 的互作

為了明確無毒效應(yīng)因子Avr-PikD與水稻蛋白OsDjA9之間的互作關(guān)系，我們首先通過酵母雙雜交試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果如圖1所示，所有對照組及試驗(yàn)組的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物均能在SD/-Leu/-Trp平板上正常生長，表明所有組合質(zhì)粒均成功導(dǎo)入酵母細(xì)胞；陰性對照組（pGADT7-RecT+pGBKT7-Lam）及自激活驗(yàn)證對照組（pGADT7-OsDjA9+pGBKT7、pGADT7+pGBKT7-AvrPikDNS）的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在含有 10 mmol·L?13-AT的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上沒有生長跡象，只有陽性對照組（pGADT7-RecT+pGBKT7-53）及試驗(yàn)組（pGADT7-OsDjA9+pGBKT7-AvrPikDNS）的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上能夠生長正常且菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，表明在酵母雙雜交系統(tǒng)中Avr-PikD能與OsDjA9發(fā)生相互作用。

圖1 酵母雙雜交驗(yàn)證Avr-PikD與OsDjA9的互作關(guān)系Fig.1 Interaction between Avr-PikD and OsDjA9 verified by yeast two-hybrid assay

2.2 Pull-down 試驗(yàn)驗(yàn)證 Avr-PikD 與 OsDjA9 的互作

由于酵母雙雜交系統(tǒng)較易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，因此，我們接著通過pull-down試驗(yàn)對Avr-PikD與OsDjA9之間的互作關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果如圖2所示，當(dāng)分別用GST與MBP抗體進(jìn)行檢測時(shí)，Input中對照組與試驗(yàn)組所檢測出的蛋白組分均與試驗(yàn)設(shè)置相符，表明相關(guān)試驗(yàn)操作過程無誤；pull-down中兩個(gè)對照組均未檢測到待測融合蛋白，表明單一的MBP標(biāo)簽或GST標(biāo)簽均無法與待測融合蛋白互作，而只有試驗(yàn)組能同時(shí)檢測到兩個(gè)待測融合蛋白組分，表明Avr-PikD能與OsDjA9在體外條件下發(fā)生相互作用。

圖2 Pull-down驗(yàn)證Avr-PikD與OsDjA9的互作關(guān)系Fig.2 Interaction between Avr-PikD and OsDjA9 verified by pull-down assay

2.3 Co-IP 及亞細(xì)胞共定位分析驗(yàn)證 Avr-PikD 與OsDjA9的互作

為了明確Avr-PikD與OsDjA9在植物細(xì)胞內(nèi)是否會發(fā)生相互作用，我們通過水稻原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)分別進(jìn)行Co-IP驗(yàn)證及亞細(xì)胞共定位分析。如圖3所示，當(dāng)OsDjA9與無信號肽Avr-PikD在水稻原生質(zhì)體中共表達(dá)時(shí)，二者在水稻細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)點(diǎn)狀的共定位模式。隨后，提取了水稻原生質(zhì)體總蛋白，并分別用GFP與RFP抗體進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖4所示，Input中對照組與試驗(yàn)組所檢測出的蛋白組分均與試驗(yàn)設(shè)置相符，表明共轉(zhuǎn)化水稻原生質(zhì)體后相關(guān)蛋白表達(dá)正常；IP中當(dāng)OsDjA9-GFP與RFP共表達(dá)時(shí)，無法檢測到RFP條帶，表明單一的RFP蛋白不會與OsDjA9-GFP發(fā)生相互作用；只有當(dāng)OsDjA9-GFP與AvrPikDNS-RFP共表達(dá)時(shí)，才能同時(shí)檢測到兩個(gè)待測融合蛋白的條帶。以上結(jié)果表明，Avr-PikD與OsDjA9能在水稻細(xì)胞內(nèi)發(fā)生相互作用。

圖3 Avr-PikD與OsDjA9在水稻原生質(zhì)體中的共定位分析Fig.3 Co-localization analysis between Avr-PikD and OsDjA9 in rice protoplasts

圖4 Co-IP驗(yàn)證Avr-PikD與OsDjA9的互作關(guān)系Fig.4 Interaction between Avr-PikD and OsDjA9 verified by Co-IP assay

2.4 熒光素酶互補(bǔ)成像試驗(yàn)驗(yàn)證 Avr-PikD 與 OsDjA9的互作

熒光素酶互補(bǔ)成像（Luciferase complementation imaging，LCI）試驗(yàn)近年來在蛋白互作研究中被廣泛使用，具有高靈敏度、可量化等特點(diǎn)，因此，我們也通過LCI試驗(yàn)對Avr-PikD與OsDjA9的互作進(jìn)行了鑒定。結(jié)果如圖5所示，所有與含空載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子共注射的陰性對照組均未檢測到熒光信號，只有共表達(dá)NLuc-AvrPikDNS與CLuc-OsDjA9的試驗(yàn)組能檢測到明顯的熒光信號，且熒光強(qiáng)度與共表達(dá)NLuc-AvrPiz-t與CLuc-APIP5的陽性對照組相當(dāng)，表明Avr-PikD與OsDjA9也能在煙草細(xì)胞內(nèi)發(fā)生相互作用。

圖5 熒光素酶互補(bǔ)成像試驗(yàn)驗(yàn)證Avr-PikD與OsDjA9的互作關(guān)系Fig.5 Interaction between Avr-PikD and OsDjA9 verified by LCI assay

2.5 OsDjA9 所 含 結(jié) 構(gòu) 域 與 Avr-PikD 的 互 作驗(yàn)證

為了明確OsDjA9中參與Avr-PikD互作的結(jié)構(gòu)域，首先通過Prosite數(shù)據(jù)庫對OsDjA9所含結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了預(yù)測分析，結(jié)果如圖6-A所示，OsDjA9主要包含DnaJ結(jié)構(gòu)域與CR型鋅指結(jié)構(gòu)域（ZF_CR）。根據(jù)結(jié)構(gòu)域預(yù)測分析結(jié)果，分段進(jìn)行酵母雙雜交檢測，結(jié)果如圖6-B所示，只有DnaJ結(jié)構(gòu)域所在試驗(yàn)組能在含有 10 mmol·L?13-AT 的 SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上形成藍(lán)色菌落，表明OsDjA9所含有的DnaJ結(jié)構(gòu)域，即氨基酸第75-140位的部分，是其與Avr-PikD互作所必需的。

圖6 酵母雙雜交驗(yàn)證Avr-PikD與OsDjA9不同結(jié)構(gòu)域之間的互作關(guān)系Fig.6 Interactions between AvrPikD and different domains of OsDjA9 identified by yeast two-hybrid assay

3 討論與結(jié)論

稻瘟病菌無毒效應(yīng)因子與稻瘟病菌致病性、水稻抗瘟持久性密切相關(guān)，是揭示稻瘟病菌致病機(jī)理及其與水稻互作機(jī)理的關(guān)鍵所在。本研究從篩選水稻cDNA文庫獲得的稻瘟病菌無毒效應(yīng)因子Avr-PikD候選互作蛋白中挑選OsDjA9蛋白，通過酵母雙雜交、pull-down、Co-IP、LCI等一系列試驗(yàn)分析，證實(shí)了OsDjA9在體外、體內(nèi)條件下均能與Avr-PikD發(fā)生相互作用，是Avr-PikD的一個(gè)作用靶標(biāo)。后續(xù)通過對OsDjA9的生物學(xué)功能及其與Avr-PikD的互作機(jī)理進(jìn)行系統(tǒng)研究，有望揭示Avr-PikD在稻瘟病菌致病過程中的作用機(jī)理。

OsDjA9是水稻DnaJ熱激蛋白家族中的一員，DnaJ家族蛋白廣泛存在于各類植物中，在植物響應(yīng)生物及非生物脅迫過程中發(fā)揮著重要作用。例如，在煙草中過量表達(dá)番茄的DnaJ蛋白LeXDJ2不僅能夠增強(qiáng)煙草對干旱脅迫的抗性，同時(shí)轉(zhuǎn)基因煙草對青枯假單胞菌（Pseudomonas solanacearum）的抗性也顯著增強(qiáng)[19]。在水稻中，DnaJ蛋白OsDjA6在水稻與稻瘟病菌親和互作過程中被誘導(dǎo)表達(dá)，是水稻PTI反應(yīng)的負(fù)調(diào)控元件，其可能通過E3泛素連接酶OsZFP1來調(diào)節(jié)SA信號途徑介導(dǎo)的免疫反應(yīng)[20]。而在棉花中，WAK樣激酶GhWAKL可通過與DnaJ蛋白GhDNAJ1互作調(diào)控棉花對大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）的抗性，GhDNAJ1基因沉默突變體對大麗輪枝菌的感病性顯著增強(qiáng)[21]。研究發(fā)現(xiàn)，稻瘟病菌一個(gè)能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的效應(yīng)因子MoCDIP4可通過靶向OsDjA9蛋白來調(diào)控水稻線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)及免疫反應(yīng)[22?23]。在正常生理?xiàng)l件下，OsDjA9可與線粒體動力蛋白相關(guān)蛋白OsDRP1E互作，并通過自噬降解途徑來精細(xì)調(diào)控OsDRP1E的蛋白水平，進(jìn)而維持線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)；而在稻瘟病菌侵染水稻的過程中，稻瘟病菌分泌的效應(yīng)因子MoCDIP4能通過與OsDRP1E競爭結(jié)合OsDjA9，阻礙OsDjA9對OsDRP1E的降解，致使OsDRP1E在線粒體中異常積累、線粒體過度分裂，最終引起水稻嚴(yán)重的免疫缺陷[23]。

在本研究中，水稻原生質(zhì)體共定位分析顯示Avr-PikD與OsDjA9在細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)點(diǎn)狀的共定位模式，但具體所在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚無法確定，而依據(jù)OsDjA9與MoCDIP4在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中互作、與OsDRP1E在線粒體中共同調(diào)控線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)[23]，后續(xù)可分別借助水稻內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體的定位Marker進(jìn)行精細(xì)定位來判定Avr-PikD與OsDjA9互作所發(fā)生的具體亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。本研究的酵母雙雜交分段測試結(jié)果顯示，DnaJ結(jié)構(gòu)域是OsDjA9與Avr-PikD互作所必需的，而該結(jié)構(gòu)域也在OsDjA9促進(jìn)OsDRP1E降解的過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[23]，預(yù)示著Avr-PikD也很可能通過抑制OsDjA9對OsDRP1E的降解來干擾水稻的免疫反應(yīng)，后續(xù)可在構(gòu)建AVR-PikD轉(zhuǎn)基因水稻的基礎(chǔ)上通過檢測轉(zhuǎn)基因水稻中OsDRP1E的降解情況及線粒體的形態(tài)觀察等加以驗(yàn)證。此外，作為水稻抗瘟性的正向調(diào)控元件，OsDjA9已被證實(shí)是稻瘟病菌兩個(gè)效應(yīng)因子的作用靶標(biāo)，后續(xù)在水稻抗稻瘟病的分子育種中可能需要引起重視。