蔡云梅， 李榮梅， 何思宇， 張榮平， 于浩飛， 張?zhí)m春，

1.昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，云南 昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；3.云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明 650500；4.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500

結(jié)直腸癌屬于最常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及病死率均較高，且呈上升趨勢(shì)[1-3]。外邪侵襲及正氣內(nèi)虛與結(jié)直腸癌密切相關(guān)，主癥為腰酸膝軟、耳鳴、夜尿多或畏寒肢冷或五心煩熱、乏力、大便不暢，舌淡紅、苔黃膩，脈滑細(xì)或濡細(xì)等[4-5]。結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制分為氣血瘀滯、濕熱毒蘊(yùn)、氣血虛衰、脾腎陽虛[6]。結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其細(xì)胞轉(zhuǎn)移快、治愈難度高，需多方法多途徑進(jìn)行干預(yù)治療。中藥具有成分靶點(diǎn)多、毒副作用較小、安全、有效等優(yōu)點(diǎn)，在抗結(jié)直腸癌治療中占有重要地位[7]。

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院腫瘤科根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)以“從腎論治”為治療原則，以補(bǔ)腎填精、解毒散結(jié)為治法，總結(jié)出具有補(bǔ)腎填精、清熱解毒、散結(jié)消腫的作用的“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”?！把a(bǔ)腎解毒散結(jié)方顆?！奔袋S慈顆粒[7]“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”由生地黃15 g，女貞子15 g，肉蓯蓉12 g，蛇莓15 g，山慈菇15 g，八月札9 g 組成?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》有云：干地黃主折跌絕筋，傷中，逐血痹，填骨髓，長(zhǎng)肌肉；女貞子主補(bǔ)中，安五臟，養(yǎng)精神，除百疾；肉蓯蓉主治五勞七傷，補(bǔ)中，除莖中寒熱痛，養(yǎng)五臟，強(qiáng)陰，益精氣；配伍蛇莓、山慈菇、八月札等清熱解毒之品[8]。實(shí)驗(yàn)研究表明[9-10]，“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”可抑制人結(jié)直腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲轉(zhuǎn)移。多個(gè)臨床研究發(fā)現(xiàn)“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”可有效改善晚期結(jié)直腸癌患者的癌因性疲乏程度、體力狀況、臨床癥狀及生活質(zhì)量，并能有效延長(zhǎng)無進(jìn)展生存期，且安全性良好[11-12]。但“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”成分復(fù)雜，靶點(diǎn)多，治療結(jié)直腸癌的機(jī)制尚不明確。本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法和分子對(duì)接技術(shù)探討“補(bǔ)腎解毒結(jié)散方”治療結(jié)直腸癌潛在分子機(jī)制，為治療結(jié)直腸癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 活性化合物的篩選

基于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)技術(shù)平臺(tái)(TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）和TCMID(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php），以口服生物利用度(bioavailability，OB）＞30%和類藥性(drug-likeness，DL）≥0.18 為篩選條件，分別篩選出生地黃、女貞子、肉蓯蓉、蛇莓、山慈菇和八月札的活性化合物。

1.2 成分靶蛋白的篩選及“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

通過TCMSP 和PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)獲取活性化合物的作用靶點(diǎn)，用Swiss Target Prediction(http://www.swiss target prediction.ch/）(species 為Homo sapiens）進(jìn)行預(yù)測(cè)補(bǔ)充。Uniport(https://www.uniprot.org）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶點(diǎn)蛋白和基因信息的校正，得到“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”主要成分的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，將篩選出的化學(xué)成分和靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 軟件(http:// www.cytoscape.org/）中，構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。

1.3 結(jié)直腸癌疾病靶點(diǎn)的篩選

以“Colorectal cancer”為關(guān)鍵詞，在OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)(https://omim.org/）和Genecard 數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/）檢索與結(jié)直腸癌相關(guān)的基因，選取Score 值大于中位數(shù)的靶點(diǎn)作為結(jié)直腸癌的疾病靶點(diǎn)并去重，使用Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)將基因名稱轉(zhuǎn)化為基因symbol。利用Venny2.1.0 軟件篩選出結(jié)直腸癌和藥物的共同作用靶點(diǎn)作為“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”抗結(jié)直腸癌的潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.4 構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用(protein- protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)

將藥物與疾病交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)中，設(shè)置高置信度(score＞0.7）并隱藏游離節(jié)點(diǎn)獲取蛋白互做信息，得到蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)。運(yùn)用R 軟件統(tǒng)計(jì)每個(gè)蛋白連接的節(jié)點(diǎn)數(shù)，并繪制柱狀圖。

1.5 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”重要成分與“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)的可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過Venn 2.1.0 在線分析工具獲得“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”和結(jié)直腸癌的交集靶點(diǎn)，將共同靶點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的活性成分導(dǎo)入Cytoscape 軟件中進(jìn)行節(jié)點(diǎn)大小和顏色的調(diào)整，構(gòu)建有效成分和共同作用靶點(diǎn)可視化網(wǎng)絡(luò)。

1.6 核心靶點(diǎn)的GO功能富集與KEGG富集分析

基于Bioconductor數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.bioconductor.org/）中的安裝包通過R軟件(R 4.0.2）對(duì)藥物與疾病交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能富集分析和KEGG 通路富集分析，分別繪制GO的氣泡圖和KEGG的柱狀圖。

1.7 核心活性化合物與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接分析

選取“補(bǔ)腎解毒結(jié)散解方重要成分-共同靶點(diǎn)”的相互作用網(wǎng)絡(luò)中Degree 值由高到低排序前6 的活性化合物和前6 的核心靶點(diǎn)。通過PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.rcsb.org/）篩選與相應(yīng)靶點(diǎn)合適的配體并下載其3D 結(jié)構(gòu)的PDB 格式文件。在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.gov/）中獲取核心活性化合物的2D 結(jié)構(gòu)，并借助ChemDraw 軟件繪其化學(xué)結(jié)構(gòu)式。使用Pymol 軟件對(duì)原配體的PDB文件進(jìn)行除水并單獨(dú)保存配體和蛋白，AutoDockTools 軟件將pdb 格式轉(zhuǎn)化為pdbqt 并尋找活性口袋，通過AutoDockVina 和Python 腳本獲得分子對(duì)接能，其結(jié)合能越低代表受體與配體的親和力越好，本研究選取結(jié)合能≤-7.0 kJ/mol 的作為化合物與靶點(diǎn)有效結(jié)合的篩選依據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 活性化合物的篩選結(jié)果

通過TCMSP 和TCMID 數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索，以O(shè)B≥30%和DL≥0.18 為篩選指標(biāo)，去重后共得到20 種活性成分，其中，生地黃2 種、女貞子13 種、肉蓯蓉6 種、蛇莓1 種、山慈菇3 種、八月札2 種，見表1。其中重復(fù)成分是槲皮素(quercetin）、β-豆甾醇(Stigmasterol）、谷固醇(beta-sitosterol）。

表1 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”有效化學(xué)成分基本信息Table 1 Basic information of effective chemical composition of“Bushen Jiedu Sanjie Recipe”

2.2 靶點(diǎn)的收集和“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用TCMSP、PubChem數(shù)據(jù)SwissTargetPrediction分析得到103個(gè)靶點(diǎn)，將11個(gè)有效成分和103個(gè)基因靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 軟件中，構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖(圖1），共有123 個(gè)節(jié)點(diǎn)，103 條邊，其中11 個(gè)紫色節(jié)點(diǎn)代表了“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”的主要化學(xué)成分，綠色節(jié)點(diǎn)為化合物對(duì)應(yīng)的基因靶點(diǎn)，103 條邊代表了化學(xué)成分與基因靶點(diǎn)的所屬關(guān)系。Degree 值前6 的活性成分中，女貞子4 種，山慈菇3種，其余成分各1種。

圖1 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方成分—靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)Figure 1 “Bushen Jiedu Sanjie Recipe-targets”network

2.3 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”與結(jié)直腸癌的交集靶點(diǎn)獲取結(jié)果

通過OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)和Genecard數(shù)據(jù)庫(kù)共篩選得到773個(gè)結(jié)直腸癌疾病基因，利用Venny 2.1.0映射篩選得到“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”103個(gè)靶點(diǎn)與結(jié)直腸癌基因相同的共有靶點(diǎn)37個(gè)(圖2）。

圖2 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”與結(jié)直腸癌靶點(diǎn)Venn分析圖Figure 2 Analysis Venn diagram of “Bushen Jiedu Sanjie Recipe” targets and colorectal cancer tragets

2.4 蛋白質(zhì)相互作用(PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

通過STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)獲得蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)(圖3），得到37 個(gè)節(jié)點(diǎn)，118 條邊。其中節(jié)點(diǎn)代表交集蛋白，邊則表示蛋白間的關(guān)聯(lián)作用，線條的粗細(xì)表示關(guān)聯(lián)度的大小，圖中節(jié)點(diǎn)的平均度值為6.38。利用R 軟件計(jì)算每個(gè)蛋白連接的節(jié)點(diǎn)數(shù)并繪制柱狀圖(圖4）。該網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)度數(shù)超過平均值的有13 個(gè)靶點(diǎn)，分別是EGFR、MYC、CCND1、CASP3、 VEGFA、 IL6、 AR、 ESR1、 MDM2、RELA、ERBB2、PPARG、RB1，認(rèn)為這13 個(gè)靶蛋白是“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”干預(yù)結(jié)直腸癌的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。

圖3 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”與結(jié)直腸癌交集靶點(diǎn)的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖Figure 3 The protein interaction network diagram of the intersection targets of “Bushen Jiedu Sanjie Recipe”and colorectal cancer

圖4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)中蛋白連接節(jié)點(diǎn)數(shù)Figure 4 The number of protein connection nodes in the protein interaction network

2.5 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”有效成分與“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”化合物和“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”與結(jié)直腸癌交集靶點(diǎn)通過Cytoscape 軟件構(gòu)建“活性成分-交集靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)可視化圖(圖5）。圖中內(nèi)圈淺藍(lán)色節(jié)點(diǎn)為活性成分，外圈藍(lán)紫色節(jié)點(diǎn)為交集靶點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)圖中活性成分(圖6）和潛在靶點(diǎn)蛋白(圖7）節(jié)點(diǎn)度值(degree）。主要的活性成分有槲皮素(quercetin，degree=68），木犀草素(luteolin， degree=17）， 山 奈 酚(kaempferol，degree=13），β-谷 甾 醇(beta-sitosterol，degree=12），豆甾醇(Stigmasterol，degree=4），2-methoxy-9，10-dihydrophenanthrene-4，5-diol(degree=4）等。結(jié)果顯示“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”可能通過胱天蛋白酶3(CASP3）調(diào)節(jié)免疫活性，過氧化酶增生激活受體(PPARG）、雄激素受體(AR）調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，B淋巴細(xì)胞瘤2 基因(BCL2）、胱天蛋白酶9(CASP9）調(diào)控細(xì)胞凋亡，絲氨酸蛋白酶(PRSS1）調(diào)節(jié)腫瘤信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和活性等來治療結(jié)直腸癌。

圖5 “補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”有效成分—交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Figure 5 Network diagram of active ingredients of“Bushen Jiedu Sanjie Recipe”-intersection targets

圖6 有效成分—交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖中活性化合物的Degree 值Figure 6 Active component-Degree value of active compound in intersection target network diagram

圖7 有效成分—交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖中靶點(diǎn)的Degree 值（前12）Figure 7 Active component-Degree value of the target in the intersection target network graph（top 12）

2.6 GO 功能富集注釋分析和KEGG 通路富集分析結(jié)果

借助DAVID 6.8 數(shù)據(jù)庫(kù)的GO 富集分析功能，得 到957 個(gè) 生 物 學(xué) 過 程(biological process，BP）(P＜0.01），包括類固醇激素反應(yīng)、抗生素反應(yīng)、對(duì)外來生物刺激的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)脅迫的反應(yīng)、凋亡信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控、 生殖系統(tǒng)發(fā)育、氧化應(yīng)激反應(yīng)、對(duì)金屬離子的反應(yīng)、對(duì)缺氧的反應(yīng)、雌二醇反應(yīng)等方面(圖8）。20 個(gè)細(xì)胞組分(cellular component，CC）(P＜0.05），包括核染色質(zhì)囊腔、轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合體、膜筏、微膜區(qū)分泌顆粒管腔、胞質(zhì)囊腔、細(xì)胞基質(zhì)連接、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合體、線粒體外膜、細(xì)胞器外膜、周期蛋白依賴性激酶全酶復(fù)合物T、髓鞘、軸突細(xì)胞質(zhì)等(圖9）。76 個(gè)分子功能(mo-lecular function，MF）(P＜0.01），包括泛素蛋白連接酶結(jié)合、DNA-轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、RNA 聚合酶Ⅱ-DNA 轉(zhuǎn)錄因子特異性結(jié)合、DNA轉(zhuǎn)錄激活因子-RNA 聚合酶Ⅱ特異性結(jié)合、類固醇激素受體活性、轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)DNA 結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活性等方面(圖10）。

圖8 GO功能富集分析氣泡圖-生物過程Figure 8 GO functional enrichment analysis bubble diagram-BP

圖9 GO功能富集分析氣泡圖-細(xì)胞組成Figure 9 GO functional enrichment analysis bubble diagram-cc

圖10 GO功能富集分析氣泡圖-分子功能Figure 10 GO functional enrichment analysis bubble diagram-MF

102 條KEGG 通路富集分析功能，主要涉及HIF-1、PI3K-Akt、病毒感染、p53、細(xì)胞凋亡等信號(hào)通路，將KEGG 通路富集分析的前20 條通路導(dǎo)入R 軟件繪制氣泡圖(圖11）。結(jié)果表明“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”可能通過細(xì)胞凋亡、增殖、代謝等發(fā)揮治療作用。

圖11 KEGG通路富集分析柱狀圖Figure 11 KEGG pathway enrichment analysis column diagram

2.7 分子對(duì)接結(jié)果

選取“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方有效成分-交集靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖”中節(jié)點(diǎn)度值(degree）前6 的活性成分和潛在靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行分子對(duì)接，將得到的對(duì)節(jié)能繪制熱圖進(jìn)行分析(圖12）。結(jié)果顯示除個(gè)別化合物與靶點(diǎn)結(jié)合指數(shù)偏高，其余活性成分和靶點(diǎn)蛋白的結(jié)合能均小于-5 KJ/mol，說明這些化合物與靶點(diǎn)蛋白具有較好的結(jié)合活性。選取結(jié)合能力較強(qiáng)的化合物與靶點(diǎn)蛋白利用PyMOL 軟件繪制其分子對(duì)接模擬圖(圖13）。

圖12 分子對(duì)接結(jié)合能的熱圖分析Figure 12 Heat map analysis of molecular docking binding energies

圖13 核心化合物與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接可視化圖Figure 13 Core compounds and core targets molecular docking visualization

3 討論

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從整體上挖掘藥物與疾病的相關(guān)性，探討其潛在聯(lián)系，注重藥物與靶點(diǎn)的相互作用，有效彌補(bǔ)傳統(tǒng)藥物研究中靶點(diǎn)單一、選擇少的缺陷[15]。分子對(duì)接通過虛擬篩選技術(shù)尋找藥物靶點(diǎn)，高效、直觀地展示藥物與靶點(diǎn)間的作用機(jī)制[16]。結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤，目前的治療手段主要是手術(shù)和放化療，但復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率、病死率仍較高?！毒霸廊珪吩杏涊d道：“凡脾腎不足，及虛弱失調(diào)之人，多有積聚之病”。脾虛濕熱為結(jié)直腸癌的致病關(guān)鍵，腎虛或潛在腎虛是多數(shù)患者腫瘤轉(zhuǎn)移的特征。補(bǔ)腎解毒中藥能有效抑制術(shù)后化療的不良反應(yīng)和術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)?！把a(bǔ)腎解毒散結(jié)方”是上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院腫瘤科的經(jīng)驗(yàn)方，具有補(bǔ)腎填精、解毒消腫散結(jié)的作用。馮媛媛等做的動(dòng)物與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究中顯示，“補(bǔ)腎解毒結(jié)散方”具有抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用[9]。

通過構(gòu)建“藥物-化合物-靶點(diǎn)” 網(wǎng)絡(luò)和PPI網(wǎng)絡(luò)，篩選得到6 種核心成分2-methoxy-9，10-dihydrophenanthrene-4，5-diol、kaempferol(山 奈酚）、luteolin(木犀草素）、quercetin(槲皮素）、Stigmasterol(豆甾醇）、beta-sitosterol(β-谷甾醇）與6個(gè)核心靶點(diǎn)AR、BCL2、CASP3、CASP9、PPARG和PRSS1。GO富集分析結(jié)果表明，“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”活性成分的作用靶點(diǎn)主要富集在類固醇激素反應(yīng)、抗生素反應(yīng)、對(duì)外來生物刺激的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)脅迫的反應(yīng)、凋亡信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控、氧化應(yīng)激反應(yīng)等生物學(xué)過程，涉及轉(zhuǎn)錄因子、RNA 聚合酶、核染色質(zhì)囊腔、膜筏、微膜區(qū)分泌顆粒管腔、胞質(zhì)囊腔、細(xì)胞基質(zhì)連接、線粒體外膜、細(xì)胞器外膜、等多種物質(zhì)的參與，是一種復(fù)雜的生物學(xué)過程。通路富集分析顯示HIF-1、PI3K-Akt、病毒感染、p53、細(xì)胞凋亡等信號(hào)通路是“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”作用的主要途徑。

山奈酚是一種黃酮類化合物，具有防癌、抗癌、抗菌、抗病毒、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。山奈酚可與ATP 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合RSK2 與MSK1 來抑制PSK2的活性，PSK2可調(diào)控細(xì)胞的增殖、周期、轉(zhuǎn)換等。山奈酚可通過抑制PSK2 的活性來防治結(jié)直腸癌[19]。山奈酚通過調(diào)節(jié)PI3K-Akt 信號(hào)通路抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖[20]。木犀草素是一種天然黃酮類化合物，廣泛存在多種藥用植物和果蔬中，具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)等多種效果。木犀草素能抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，并起到化學(xué)預(yù)防的作用，可促進(jìn)HCT116 細(xì)胞RECK表達(dá)并下調(diào)胞內(nèi)DNMT1和Sp1的活性，抑制結(jié)直腸癌LoVo 細(xì)胞來源的直結(jié)腸癌干細(xì)胞樣細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力，可激活Nrf2/ARE 信號(hào)通路來調(diào)控相關(guān)Ⅰ相代謝酶的表達(dá)，可能亦通過PI3K-Akt-NF-κB 信號(hào)通路影響癌細(xì)胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移。黃酮化合物槲皮素可抑制腫瘤細(xì)胞的分裂增殖、遷移及侵襲，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，降低耐藥性，可通過抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、SW480、結(jié)腸腺癌細(xì)胞Caco-2 等增殖，來誘導(dǎo)其凋亡，槲皮素在體外可明顯抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。山奈酚、槲皮素還通過HIF-1信號(hào)通路抑制炎性因子的表達(dá)，發(fā)揮抗炎作用[29]。 HIF-1α 可能通過抑制miRNA-200b 的表達(dá)從而參與結(jié)直腸癌上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程[30]。豆甾醇是植物甾醇的一種，具有植物甾醇的性質(zhì)和用途，豆甾醇具有較明顯的抗炎和消炎作用而直接用作為抗炎藥物，還可通過誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體功能障礙引起癌細(xì)胞凋亡。豆甾醇通過調(diào)控PI3K-Akt 信號(hào)通路和MAPK/ERK 信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡并抑制腸癌細(xì)胞增殖[33]。豆甾醇和谷甾醇都屬于植物甾醇，植物甾醇可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、提高機(jī)體免疫力和抗癌能力，還可能通過鞘磷脂循環(huán)途徑的激活啟動(dòng)細(xì)胞凋亡過程[34]。通過分子對(duì)接得知這些活性成分和核心靶點(diǎn)蛋白之間具有較好結(jié)合活性。

綜上所述，通過以“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”的活性成分為研究對(duì)象，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接的方法，構(gòu)建“藥物成分-共同靶點(diǎn)”的中藥復(fù)方網(wǎng)絡(luò)，分析其治療結(jié)直腸癌可能的核心成分與靶標(biāo)，結(jié)合GO 與KEGG 富集分析得到“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”中的活性成分山奈酚、木犀草素、槲皮素與AR、BCL2、CASP3、CASP9、PPARG、PRSS1等靶蛋白結(jié)合發(fā)揮治療作用。本研究闡明了“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”治療和預(yù)防結(jié)直腸癌的主要活性成分和潛在的作用靶點(diǎn)、調(diào)控機(jī)制，為“補(bǔ)腎解毒散結(jié)方”防治結(jié)直腸癌的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。