史真真，郭凱銳，汪小芳

（1.眾平檢測(cè)有限公司，河南許昌 461100；2.河南森邦環(huán)境檢測(cè)技術(shù)有限公司，河南許昌 461100）

五氯硝基苯是一種典型的有機(jī)氯類殺菌劑，至今在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中仍起著重要作用。但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以及人們對(duì)五氯硝基苯弊端認(rèn)識(shí)的加深與替代產(chǎn)品的出現(xiàn)，其使用安全性問(wèn)題已經(jīng)在世界各國(guó)引起了廣泛關(guān)注。歐盟和美國(guó)均已出臺(tái)了禁用或限制使用范圍的措施，我國(guó)則主要針對(duì)五氯硝基苯在不同樣品中檢出的分析方法進(jìn)行研究[1]。我國(guó)是蘋(píng)果種植和消費(fèi)大國(guó)，蘋(píng)果產(chǎn)業(yè)是農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)，然而，隨著蘋(píng)果種植面積的增加和種植方式的改變，為應(yīng)對(duì)逐漸加重的病蟲(chóng)害，超劑量施用高毒、高殘留農(nóng)藥屢見(jiàn)報(bào)道，過(guò)度施用農(nóng)藥會(huì)導(dǎo)致藥害的發(fā)生，造成蘋(píng)果葉片、果實(shí)的藥斑病害，嚴(yán)重影響蘋(píng)果品質(zhì)，果皮表面農(nóng)藥殘留過(guò)高，食用后對(duì)人們的健康產(chǎn)生較大的危害[2-4]。因此，為保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，加強(qiáng)對(duì)五氯硝基苯及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)，建立準(zhǔn)確、高效、低成本的檢測(cè)方法十分必要。

常見(jiàn)的五氯硝基苯農(nóng)藥殘留的分析方法有液相色譜（Liquid Chromatograph，LC）[5]、氣相色譜（Gas Chromatography，GC）[6]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）[7-9]、液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用（Liquid Chromatograph-Mass Spectrometer，LC-MS）等[10]，一般情況下，單一色譜類雖然定量準(zhǔn)確，但是易出現(xiàn)假陽(yáng)性，在定性方面難以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確篩查，而儀器聯(lián)用技術(shù)則應(yīng)運(yùn)而生，即將具有高分離性能的色譜技術(shù)和高靈敏度的質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合起來(lái)，建立氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定蘋(píng)果中五氯硝基苯的方法，并進(jìn)行評(píng)定分析，得到了滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

GCMS-QP2020氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津；固相萃取儀、水浴氮吹儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海力辰；渦旋混勻器，其林貝爾；AUW220D 十萬(wàn)分之一電子天平，日本島津；可調(diào)高速勻漿機(jī)，常州國(guó)華；高速冷凍離心機(jī)，上海力申。

乙腈：色譜純；氯化鈉：優(yōu)級(jí)純；無(wú)水硫酸鈉：分析純，用前在650 ℃下灼燒4 h，貯于干燥器中，冷卻后備用；甲苯：優(yōu)級(jí)純；正己烷：色譜純；丙酮：色譜純；ProElut C18SPE 柱（12 mL，2.0 g）、ProElut CARB/NH2雙層柱（6 mL，0.5 g/0.5 g），迪馬科技；100 μg/mL 五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（證書(shū)編號(hào)BW900748-100-A）；100 μg/mL 環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)溶液（證書(shū)編號(hào)BW900786-100-A），壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 氣相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱：SH-Rxi-5Sli MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；色譜柱升溫程序：40 ℃（1 min）→130 ℃（30 ℃/min）→250 ℃（5 ℃/min）→300 ℃（10 ℃/min，保持5 min）；載氣：氦氣，純度≥99.999%；流速：1.00 mL/min；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；電子轟擊源（EI）：70 eV；離子源溫度：230 ℃；GC-MS 接口溫度：230 ℃；柱前壓：49.7 kPa；掃描模式：選擇離子檢測(cè)方式（SIM）；定量方法：峰面積內(nèi)標(biāo)法定量，質(zhì)譜特征離子（m/z）：五氯硝基苯--定量295，定性237、249；環(huán)氧七氯--定量353，定性355、351。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確移取100 μg/mL 環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)溶液0.7 mL，用丙酮定容至2.0 mL，配制成環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液；準(zhǔn)確移取100 μg/mL 的五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，用丙酮定容至5 mL，配制成10 μg/mL 五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用樣品空白基質(zhì)提取液配制成濃度為0.125 μg/mL、0.250 μg/mL、0.500 μg/mL、1.000 μg/mL、2.000 μg/mL 和4.000 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作系列溶液，分別加入40 μL 環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 樣品前處理

取蘋(píng)果全果（去柄）約1 kg，切碎、用勻漿機(jī)勻漿后分成兩份，一份檢測(cè)，另一份留樣備用。稱取20 g 試樣（精確至0.01 g）于80 mL 離心管中，加入40 mL 乙腈，用均質(zhì)器在15 000 r/min 勻漿提取1 min，加入5 g 氯化鈉，再勻漿提取1 min，將離心管放入離心機(jī)，在3 000 r/min 離心5 min，取上清液20 mL，將ProElut C18SPE 小柱放入固定架上，加樣前先用10 mL 乙腈預(yù)洗柱，下接雞心瓶；移入上述20 mL 提取液，并用15 mL 乙腈洗滌柱，將收集的提取液和洗滌液在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1 mL，備用，過(guò)ProElut CARB/NH2雙層柱?；罨杭尤? g 無(wú)水硫酸鈉，用4 mL 乙腈-甲苯溶液（3+1）預(yù)洗小柱。上樣：迅速移入上述濃縮液，用雞心瓶收集；再用6 mL 乙腈-甲苯（3+1）分3 次洗滌樣液瓶，確保上樣完全。洗脫：安裝60 mL 貯液器和適配器，加25 mL 乙腈-甲苯（3+1），收集洗脫液。定容：40 ℃水浴中減壓蒸餾至近干，用正己烷定容至1 mL，加入40 μL 環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)，混勻后待上機(jī)進(jìn)行定性測(cè)定和定量測(cè)定。對(duì)于試劑空白，除不加試樣外，按照上述步驟平行操作。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系

本次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.125 μg/mL、0.250 μg/mL、0.500 μg/mL、1.000 μg/mL、2.000 μg/mL及4.000 μg/mL，以濃度為橫坐標(biāo)，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值（峰面積）的比值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為Y=0.344 488 4X-0.006 877 486，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 9，滿足線性要求，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。

圖1 五氯硝基苯線性曲線圖

2.2 檢出限和定量限

根據(jù)信噪比S/N=3 和S/N=10 確定目標(biāo)物的檢出限和定量限，當(dāng)取樣量為20.0 g 時(shí)，五氯硝基苯的檢出限為0.007 8 mg/kg，定量限為0.025 0 mg/kg。

2.3 回收率與精密度試驗(yàn)

以陰性蘋(píng)果樣品進(jìn)行添加回收和精密度試驗(yàn)，本次添加水平為L(zhǎng)OQ、2LOQ、10LOQ，充分混勻處理后按此方法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)水平測(cè)定10 次，進(jìn)行GC-MS 測(cè)定，測(cè)得五氯硝基苯在添加水平0.025 0 ～0.250 0 mg/kg，其平均回收率在83.5%～94.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.71%～2.34%?；厥章逝c精密度試驗(yàn)具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 蘋(píng)果中五氯硝基苯的回收率與精密度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定蘋(píng)果中五氯硝基苯的檢測(cè)方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，方法的定量限、回收率、精密度符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求，該方法具有準(zhǔn)確、高效、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)勢(shì)，可以滿足蘋(píng)果中五氯硝基苯的分析要求。