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        黃曲霉毒素B1 免疫層析試紙條和ELISA 試劑盒中花生粕樣本適用性優(yōu)化

        2022-08-09 13:35:50張君超田秀梅閔國春
        食品安全導(dǎo)刊 2022年20期
        關(guān)鍵詞:商品化膠體金黃曲霉

        張君超,田秀梅,王 艷,閔國春,靳 曼,陳 年

        (1.北京美正生物科技有限公司,北京 102200;2.湖北省孝感市公共檢驗(yàn)檢測中心,湖北孝感 432000;3.三峽公共檢驗(yàn)檢測中心,湖北宜昌 443000;4.遼寧省糧食檢驗(yàn)檢測中心,遼寧沈陽 110032)

        中國是花生種植大國,花生年產(chǎn)量從2017 年連續(xù)5 年在1 700 萬t 以上,是全球花生主要產(chǎn)區(qū)。目前國內(nèi)花生仍以榨油和食用為主,花生粕是花生果仁經(jīng)壓榨等方式制油后產(chǎn)生的副產(chǎn)品,由于花生種皮薄、粗纖維含量低,壓榨后的花生粕蛋白質(zhì)含量高且氨基酸種類豐富,可以應(yīng)用在食品、保健品和飼料中[1-2]。但由于花生粕中精氨酸、賴氨酸和蛋氨酸等氨基酸不平衡和大分子蛋白質(zhì)消化利用率低,以及在貯存過程中極易發(fā)生霉變而產(chǎn)生黃曲霉毒素等原因,影響了花生粕蛋白的廣泛、綜合使用[3-4]。隨著花生粕深加工技術(shù)的發(fā)展以及飼用豆粕減量替代行動(dòng)方案的實(shí)施,花生粕近年來在食品和飼料中的應(yīng)用更為廣泛。

        黃曲霉毒素是曲霉屬真菌的次生代謝產(chǎn)物,主要有黃曲霉毒素B1、B2、G1和G24 種,其中AFB1的毒性和致癌性最強(qiáng),嚴(yán)重影響食品和飼料的質(zhì)量安全[5-6]。目前花生粕中黃曲霉毒素B1的檢測方法有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜法、薄層色譜法、電化學(xué)法、酶聯(lián)免疫吸附法、時(shí)間分辨熒光免疫層析法、膠體金快速定量法和膠體金定性法等多種方法[7-8]。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜、高效液相色譜等儀器檢測方法的準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好、靈敏度高,已作為法檢方法使用,但儀器設(shè)備相對昂貴、對檢測人員的要求高,不適合在食品加工企業(yè)、飼料加工企業(yè)以及花生粕原料貿(mào)易中廣泛應(yīng)用。而基于免疫學(xué)的快速檢測方法因其快速、簡便、成本低的特點(diǎn),適用于基層用戶現(xiàn)場大批量快速檢測,在基層中應(yīng)用較為廣泛[9-10]。因此,花生粕中黃曲霉毒素B1含量的快速、準(zhǔn)確測定對于食品及飼料質(zhì)量安全控制意義重大。

        為在基層檢測中更加準(zhǔn)確地檢出花生粕中黃曲霉毒素B1,給予生產(chǎn)及貿(mào)易企業(yè)有效的參考,本實(shí)驗(yàn)在原有商業(yè)化快速檢測產(chǎn)品的基礎(chǔ)上,通過對比不同提取溶劑對花生粕中黃曲霉毒素B1快速檢測結(jié)果的影響,選取了最優(yōu)的提取溶劑用于酶聯(lián)免疫吸附法、熒光/膠體金免疫層析快速定量法等快速檢測方法。本實(shí)驗(yàn)增加了黃曲霉毒素B1的快速檢測商品化產(chǎn)品中花生粕樣本的適用性。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        花生粕樣品:來源于油脂生產(chǎn)企業(yè)、花生粕貿(mào)易企業(yè)和飼料加工企業(yè)。

        1.2 主要試劑與儀器

        乙腈、甲醇均為色譜純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);黃曲霉毒素B1ELISA 檢測試劑盒、黃曲霉毒素B1熒光快速定量檢測試紙條和黃曲霉毒素B1膠體金快速定量檢測試紙條(北京華安麥科生物技術(shù)有限公司)。

        天平(PL602E,梅特勒-托利多);多管渦旋儀(HMG-WX,北京美正生物科技有限公司);離心機(jī)(TG16-W,湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司);酶標(biāo)分析儀(HF4500,北京華安麥科生物技術(shù)有限公司);熒光定量快速檢測及監(jiān)測分析系統(tǒng)(HYG001,北京華安麥科生物技術(shù)有限公司)和膠體金定量快速檢測及監(jiān)測分析系統(tǒng)(HMG001,北京華安麥科生物技術(shù)有限公司)。

        1.3 實(shí)驗(yàn)方法

        1.3.1 花生粕中黃曲霉毒素B1檢測方法

        ①酶聯(lián)免疫法。除提取溶劑外,前處理方法和檢測方法參照黃曲霉毒素B1ELISA 檢測試劑盒(北京華安麥科生物技術(shù)有限公司)產(chǎn)品說明書。②熒光/膠體金免疫層析快速定量法。除提取溶劑外,前處理方法和檢測方法參照黃曲霉毒素B1膠體金/熒光快速定量檢測試紙條(北京華安麥科生物技術(shù)有限公司)產(chǎn)品說明書。

        1.3.2 酶聯(lián)免疫法中不同提取溶劑對花生粕中黃曲霉毒素B1檢測結(jié)果的影響

        根據(jù)黃曲霉毒素B1自身理化性質(zhì)、現(xiàn)行的檢測方法常用到的提取溶劑以及商品化快速檢測產(chǎn)品的有機(jī)溶劑耐受性,選取60%甲醇-水、30%乙腈-水和80%乙腈-水3 種溶劑提取,經(jīng)《飼料中黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2 毒素的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》(NY/T 2071—2011)定值的花生粕樣本,使用黃曲霉毒素B1ELISA 檢測試劑盒檢測,對比不同提取溶劑對檢測結(jié)果的影響。

        1.3.3 熒光/膠體金快速定量免疫層析法中不同提取溶劑對花生粕中黃曲霉毒素B1檢測結(jié)果的影響

        根據(jù)黃曲霉毒素自身理化性質(zhì)、現(xiàn)行的檢測方法常用到的提取溶劑以及商品化快速檢測產(chǎn)品的有機(jī)溶劑耐受性,選取50%乙醇-水、30%乙腈-水和80%乙腈-水3 種溶劑提取,經(jīng)《飼料中黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2 毒素的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》(NY/T 2071—2011)定值的花生粕樣本,使用黃曲霉毒素B1熒光/膠體金快速定量檢測試紙條檢測,對比不同提取溶劑對檢測結(jié)果的影響。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 酶聯(lián)免疫法中不同提取溶劑對花生粕中黃曲霉毒素B1 檢測結(jié)果的影響

        花生粕經(jīng)60%甲醇-水、30%乙腈-水和80%乙腈-水不同提取溶劑提取后使用商品化黃曲霉毒素B1ELISA 檢測試劑盒檢測結(jié)果如表1 所示。結(jié)果顯示,與定值結(jié)果相比,用60%甲醇-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果偏低,回收率在68.1%~78.5%;而用80%乙腈-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果偏高,回收率在120.7%~203.0%;用30%乙腈-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果的回收率在95.1%~109.0%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同提取溶劑的提取效率有所差異,對于所使用的商品化ELISA 檢測試劑盒來講,其更適合使用30%乙腈-水溶劑提取花生粕中黃曲霉毒素B1。

        表1 酶聯(lián)免疫法檢測花生粕中黃曲霉毒素B1

        2.2 熒光定量免疫層析法中不同提取溶劑對花生粕中黃曲霉毒素B1 檢測結(jié)果的影響

        花生粕經(jīng)50%乙醇-水、30%乙腈-水、80%乙腈-水不同提取溶劑提取后,使用商品化黃曲霉毒素B1熒光快速定量檢測試紙條檢測結(jié)果如表2 所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與定值結(jié)果相比,用50%乙醇-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果偏低,回收率在46.8%~73.7%;用80%乙腈-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果也偏低,回收率在59.0%~73.1%;而用30%乙腈-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果回收率在88.5%~99.9%。結(jié)果表明不同提取溶劑的提取效率有所差異,對于所使用的商品化熒光快速定量檢測試紙條來講,其更適合使用30%乙腈-水溶劑提取花生粕中黃曲霉毒素B1。

        表2 熒光定量免疫層析法檢測花生粕中黃曲霉毒素B1

        2.3 膠體金定量免疫層析法中不同提取溶劑對花生粕中黃曲霉毒素B1 檢測結(jié)果的影響

        花 生 粕 經(jīng)50% 乙 醇- 水、30% 乙 腈- 水、80%乙腈-水不同提取溶劑提取后,使用商品化黃曲霉毒素B1膠體金快速定量檢測試紙條檢測結(jié)果如表3 所示。結(jié)果顯示,與定值結(jié)果相比,用50%乙醇-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果偏低,回收率在56.2%~66.9%;用80%乙腈-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果也偏低,回收在67.2%~84.9%;而用30%乙腈-水溶劑提取的樣品檢測結(jié)果的回收在84.5%~103.3%。結(jié)果表明不同提取溶劑的提取效率有所差異,對于所使用的商品化膠體金快速定量檢測試紙條來講,其更適合使用30%乙腈-水溶液提取花生粕中黃曲霉毒素B1。

        表3 膠體金定量免疫層析法檢測花生粕中黃曲霉毒素B1

        3 結(jié)論

        本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,商品化黃曲霉毒素B1快速檢測花生粕的結(jié)果因提取溶劑的不同,回收率不同,現(xiàn)有商品化快速檢測產(chǎn)品中提取溶劑不適用花生粕的檢測。經(jīng)對比,30%乙腈-水提取溶劑均適用于商品化黃曲霉毒素B1ELISA 檢測檢測試劑盒、黃曲霉毒素B1熒光快速定量檢測試紙條和黃曲霉毒素B1膠體金快速定量檢測試紙條。食品加工企業(yè)、飼料加工企業(yè)以及花生粕原料貿(mào)易可使用此方法對花生粕中黃曲霉毒素B1進(jìn)行快速檢測。

        本實(shí)驗(yàn)是基于現(xiàn)有商品化快速檢測產(chǎn)品進(jìn)行開展,并未對市面上所有商品快速檢測產(chǎn)品進(jìn)行研究,此提取溶劑不一定適用于其他商品化快速檢測產(chǎn)品。不同提取溶劑的選擇對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和高效液相色譜法等儀器檢測方法是否也有同樣的影響還需進(jìn)一步探討及研究。

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