王小彤，胡靜，任慧，崔小敏，曲彤，李寧，吳靳榮*，陳志永*（.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，上海 003；.陜西省中醫(yī)藥研究院，西安 70003）

旋花科飛蛾藤屬植物在全世界有約20 余種，主要分布于亞洲熱帶及亞熱帶，非洲及鄰近島嶼、大洋洲、美洲也存在少量分布。我國(guó)飛蛾藤屬植物資源豐富，有14 種，8 個(gè)變種，主產(chǎn)云南，部分種分布于長(zhǎng)江以南各省，1 種延伸至陜西、甘肅[1]。飛蛾藤屬植物有廣泛的藥用記載，如大果飛蛾藤P.sinensis已成為商品丁公藤藥材的主流替代品種[2]；美飛蛾藤P.spectabilis在廣西民間以全草入藥，用于治療子宮脫垂[3]；小萼飛蛾藤P.mairei據(jù)《中華本草》記載，以根入藥，有鎮(zhèn)咳平喘的功效[4]。然而，我國(guó)法定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系至今尚未收載任何飛蛾藤屬植物。

飛蛾藤（Porana racemosaRoxb．）據(jù)《全國(guó)中草藥匯編》記載，以全草入藥，具發(fā)表、消食積之功效，主治傷風(fēng)感冒、食積不消[5]；在湖南民間，俗稱黃烏龍，用于治療風(fēng)濕病[6]?，F(xiàn)代研究表明，飛蛾藤還具有抗風(fēng)濕、抗炎、抑制前列腺素和白三烯生物合成等作用，可治療風(fēng)濕病及神經(jīng)疼痛[7]。目前有關(guān)飛蛾藤化學(xué)成分的研究較少，雖有少數(shù)研究表明飛蛾藤中含有機(jī)酸類、香豆素類、黃酮類、甾醇類等化合物[7]，卻缺乏系統(tǒng)性研究。本試驗(yàn)采用超高效液相色譜-四極桿-靜電場(chǎng)軌道離子阱聯(lián)用質(zhì)譜（UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS）技術(shù)，對(duì)飛蛾藤全草中化學(xué)成分進(jìn)行全面、快速的定性分析，以期為飛蛾藤的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。

1 材料

UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS 型高分辨質(zhì)譜儀，UltiMate 3000 型超高效液相色譜系統(tǒng)（ThermoFisher Scientific 公司），BT25S 型0.01 mg 電子分析天平及BS210S 型0.1 mg 電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]，KQ-100 型超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。飛蛾藤藥材分別于2020年7月采集于云南文山，2020年9月采集于云南昆明，2020年10月采集于湖北恩施，干燥后保存待用，藥材經(jīng)陜西省中醫(yī)藥研究院陳志永副研究員鑒定為飛蛾藤，樣品保存于陜西省中醫(yī)藥研究院中藥所中藥化學(xué)室。東莨菪苷（批號(hào)：16040805）、東莨菪內(nèi)酯（批號(hào)：161208）、綠原酸（批號(hào)：1701904）、新綠原酸（批號(hào)：17062003）、異綠原酸A（批號(hào)：19061201）、異綠原酸B（批號(hào)：17121201）、異綠原酸C（批號(hào)：18070401）、傘形花內(nèi)酯（批號(hào)：18010202）和咖啡酸（批號(hào)：17122804）（對(duì)照品，上海圻明生物科技有限公司，純度≥98%），水為屈臣氏蒸餾水，甲醇、甲酸為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 樣品溶液的制備

飛蛾藤藥材干燥后打粉，過40 目篩，精密稱取樣品粉末0.5 g，置100 mL 具塞錐形瓶中。精密加80%甲醇50 mL，稱重后常溫下超聲提取30 min（頻率40 kHz，功率100 W），靜置冷卻至室溫，用80%甲醇補(bǔ)足質(zhì)量損失，搖勻，過濾，取續(xù)濾液5 mL 轉(zhuǎn)移至10 mL 量瓶中，加入80%甲醇定容至刻度，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜過濾，即得。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、咖啡酸、綠原酸、新綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 對(duì)照品適量，置10 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容，制備單一對(duì)照品儲(chǔ)備液，各單一對(duì)照品儲(chǔ)備液混合并稀釋得混合對(duì)照品溶液，均置于冰箱中4℃保存。

2.3 色譜條件

Thermo Accucore aQ C18色譜柱（2.1 mm×150 mm，2.6 μm），流動(dòng)相甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脫（0 ～12 min，5%～25%A；12 ～20 min，25% ～30%A；20 ～28 min，30% ～38%A；28 ～40 min，38% ～50%A；40～55 min，50%～60%A），流速0.3 mL·min－1，柱溫30℃，進(jìn)樣量3 μL。

2.4 質(zhì)譜條件

高性能加熱電噴霧離子源（HESI），正、負(fù)離子檢測(cè)模式，噴霧電壓3.5 kV，毛細(xì)管溫度350℃，霧化室溫度320℃，鞘氣流速45 arb，輔助氣流速15 arb，掃描模式為Full MS/dd-MS，F(xiàn)ull MS 分辨率70 000，dd-MS 分辨率17 500，掃描范圍為m/z80 ～1200。MS/MS 模式時(shí)所用碰撞能量為30 eV。

2.5 數(shù)據(jù)處理

取飛蛾藤樣品溶液及對(duì)照品溶液適量，進(jìn)樣分析，根據(jù)Xcalibur 2.0 軟件計(jì)算出高分辨精確質(zhì)量數(shù)，與自建飛蛾藤化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行匹配，按照實(shí)際測(cè)得的相對(duì)分子質(zhì)量與理論相對(duì)分子質(zhì)量?jī)烧咂睿?×10－6的原則對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行初步快速鑒定，推測(cè)色譜峰相對(duì)應(yīng)的化合物分子式，再通過二級(jí)碎片的信息、相關(guān)文獻(xiàn)及與對(duì)照品比較，確認(rèn)并推導(dǎo)出化合物的結(jié)構(gòu)及裂解規(guī)律。

3 結(jié)果與分析

飛蛾藤在正離子模式和負(fù)離子模式下的總離子流圖見圖1。通過對(duì)飛蛾藤化合物一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜裂解規(guī)律的分析，最終共鑒定出30 個(gè)化合物，包括有機(jī)酸類13 個(gè)、香豆素類5 個(gè)、酰胺類4 個(gè)、黃酮類3 個(gè)及其他類5 個(gè)，其中9 個(gè)成分通過與對(duì)照品比對(duì)后確認(rèn)?；衔锉Ａ魰r(shí)間、分子式、分子質(zhì)量、一級(jí)質(zhì)譜及二級(jí)質(zhì)譜碎片離子具體見表1。

表1 飛蛾藤中化學(xué)成分的UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS 鑒定Tab 1 Identification of chemical constituents in Porana racemosa by UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS

圖1 飛蛾藤在正離子（A）和負(fù)離子（B）模式下的總離子流及部分化合物的提取離子流圖Fig 1 Total ion chromatograms of Porana racemosa in both positive（A）and negative（B）ion modes and extracted ion chromatograms of some compounds

3.1 有機(jī)酸類

從飛蛾藤中共鑒定出13 種有機(jī)酸類的化合物，包括苯丙素類4 個(gè)，分別為化合物2、7、9、17；綠原酸類衍生物共8 個(gè)，分別為化合物3、8、11、13、15、21、22、30，以及有機(jī)酸類的衍生物化合物18。

簡(jiǎn)單苯丙素類化合物中多含羥基、糖基，且較多化合物為中藥中的有效成分。負(fù)離子模式下化合物2 分子離子峰為153.0195 [M-H]－，二級(jí)碎片推測(cè)其裂解途徑為母離子丟掉1 個(gè)羧基，得到碎片離子109.0295 [M-H-COO]－，根據(jù)文獻(xiàn)[8]報(bào)道飛蛾藤近似種屬植物中含有龍膽酸，并結(jié)合質(zhì)譜相關(guān)文獻(xiàn)[9]，推測(cè)化合物2 為龍膽酸?；衔? 的準(zhǔn)分子離子峰為179.0350 [M-H]－，化學(xué)結(jié)構(gòu)為C9H8O4，二級(jí)質(zhì)譜中失去1 個(gè)羧基得到咖啡酸的特征碎片離子135.0453 [M-H-COO]－，參考相關(guān)文獻(xiàn)[10]及對(duì)照品質(zhì)譜行為，鑒定化合物9 為咖啡酸?；衔? 和咖啡酸為一對(duì)同分異構(gòu)體，由于咖啡酸中苯環(huán)上存在鄰位酚羥基，易形成氫鍵，極性相較于化合物7 偏小，保留時(shí)間靠后，且其二級(jí)質(zhì)譜中存在碎片離子71.0138 [M-HC6H4O2]－，59.0138 [M-H-C6H4O2-C]－，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[11]，推測(cè)化合物7 為3，5-二羥基肉桂酸。正離子模式下，化合物17 的準(zhǔn)分子離子峰為179.0706 [M ＋H]＋，高能撞擊后產(chǎn)生的二級(jí)碎片離子，得到碎片離子161.0596，參考文獻(xiàn)[12]后推測(cè)此成分為4-甲氧基肉桂酸。

綠原酸類衍生物具有明顯的抗氧化及抗炎作用[13]，飛蛾藤提取物中共鑒定出8 種此類型化合物，且多為同分異構(gòu)體。新綠原酸和綠原酸在負(fù)離子模式下分子離子峰分別為353.0879 [MH]－，353.0881 [M-H]－，由于兩者均由咖啡酸和奎寧酸酯化形成，僅連接位置存在差異，因此裂解方式相似。以新綠原酸為例，二級(jí)質(zhì)譜中母離子分別失去咖啡酸部分和奎寧酸部分得到特征碎片179.0349 [M-H-C7H10O5]－及191.0562 [M-HC9H6O3]－，進(jìn)一步失去1 個(gè)H2O 得到特征碎片161.0240 [M-H-C7H10O5-H2O]－，173.0454 [M-HC9H6O3-H2O]－；或在179 碎片離子上繼續(xù)失去1 個(gè)CO2得到特征碎片135.0452 [M-H-C7H10O5-CO2]－。結(jié)合新綠原酸、綠原酸對(duì)照品的質(zhì)譜行為、成分性質(zhì)及相關(guān)文獻(xiàn)，鑒定出化合物3、8 分別為新綠原酸和綠原酸。具體推測(cè)的化合物裂解方式見圖2。化合物11 的準(zhǔn)分子離子峰及碎片離子峰與綠原酸基本吻合，推測(cè)化合物11 為綠原酸的同分異構(gòu)體。此外，還通過對(duì)照品比較鑒定出化合物21、22、30 這3 個(gè)同分異構(gòu)體，分別為異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C。以異綠原酸A的質(zhì)譜為例，一級(jí)質(zhì)譜中分子離子峰為515.1198[M-H]－，在高能碰撞下其酯鍵斷裂，失去1 個(gè)肉桂酸酯，得到碎片離子353.0878 [M-H-C9H6O3]－，接著與單咖啡?？崴岬牧呀馔緩较嗨?，開環(huán)后得到碎片離子179.0349 [M-H-C9H6O3-C7H10O5]－，并繼續(xù)丟失1 個(gè)CO2，得到碎片離子135.0452[M-H-C9H6O3-C7H10O5-CO2]－； 或353.0878 碎片離子的酯鍵斷裂，得到碎片離子191.0562 [M-HC9H6O3-C9H6O3]－。

圖2 新綠原酸負(fù)離子模式下的二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解途徑Fig 2 MS2 spectrum and fragmentation pathways of 5-O-caffeoylquinic acid at negative ion mode

化合物13 在負(fù)離子模式下，分子離子峰為367.1021 [M-H]－，二級(jí)質(zhì)譜中，存在191.0562，173.0454，134.0373 等碎片離子，化合物15 與化合物13 的一級(jí)與二級(jí)質(zhì)譜行為均高度相似，且兩者都與綠原酸的裂解途徑基本相似，參考質(zhì)譜裂解文獻(xiàn)[14]，推測(cè)這兩個(gè)化合物為綠原酸甲酯或4-O-綠原酸甲酯?；衔?8 在負(fù)離子模式下一級(jí)質(zhì)譜中分子離子峰為193.0506 [M-H]－，二級(jí)質(zhì)譜中，能量撞擊后丟掉1 個(gè)甲酯，得到134.0372[M-H-COOCH3]－碎片離子，接著失去CH4O2得到苯環(huán)碎片離子74.0247 [M-H-COOCH3-C2H4O2]－，結(jié)合文獻(xiàn)[15]，推測(cè)化合物18 為咖啡酸甲酯。

3.2 香豆素類

從飛蛾藤中共鑒定出5 種香豆素類化合物，分別為化合物5、6、12、14、23，其中化合物5、12、14 經(jīng)與對(duì)照品比較后鑒定為東莨菪苷、傘形花內(nèi)酯、東莨菪內(nèi)酯。香豆素類化合物具有相同母核，母離子裂解過程中，主要丟失CO、CH3等基團(tuán)，例如化合物5 在正離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為355.1024 [M ＋H]＋，其對(duì)應(yīng)分子式為C16H18O9，二級(jí)質(zhì)譜中失去1 分子葡萄糖殘基，產(chǎn)生碎片離子193.0496 [M ＋H-C6H10O6]＋，再失去1 個(gè)CO3，得到碎片離子133.0282 [M ＋H-C6H10O6-CO3]＋；或失去1 個(gè)甲基，得到碎片離子178.0258 [M ＋H-C6H10O6-CH3]＋；或直接失去1 個(gè)中性碎片CO，獲得碎片離子165.0547 [M ＋H-C6H10O6-CO]＋，結(jié)合文獻(xiàn)[16]參考，并與對(duì)照品的保留時(shí)間及質(zhì)譜碎片相比較，鑒定該化合物為東莨菪苷。同樣在正離子模式下，化合物6 與化合物14 為一對(duì)同分異構(gòu)體，兩者主要區(qū)別在羥基及甲氧基于C-6，C-7 的位置異構(gòu)。兩個(gè)化合物準(zhǔn)分子離子峰均為193.0496 [M ＋H]＋，推測(cè)化學(xué)式為C10H8O4，裂解方式基本一致，二級(jí)質(zhì)譜中碎片離子均存在178.0258 [M ＋H-CH3]＋，133.0284 [M ＋H-CO3]＋，結(jié)合文獻(xiàn)參考[16]，推測(cè)化合物6 為異東莨菪內(nèi)酯，同時(shí)與對(duì)照品的保留時(shí)間及碎片離子相比較，鑒定化合物14 為東莨菪內(nèi)酯，推測(cè)此化合物可能的裂解途徑見圖3。化合物23 一級(jí)質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰為517.1345 [M ＋H]＋，推測(cè)對(duì)應(yīng)分子式為C25H24O12，根據(jù)其二級(jí)質(zhì)譜中香豆素的特征碎片163.0389 [M ＋H-CH2O-C15H16O8]＋，結(jié)合此成分的相關(guān)研究[17-18]，推測(cè)此化合物為7-O-[4'-O-（3''，4''-dihydroxycinnamyl）-β-D-glucopyranosyl]-6-methoxycoumarin。負(fù)離子模式下，化合物12準(zhǔn)分子離子峰為161.0244 [M-H]－，對(duì)應(yīng)分子式C9H6O3，二級(jí)質(zhì)譜中丟失1 個(gè)羰基或1 個(gè)羧基，分別得到碎片離子133.0294 [M-H-CO]－，117.0344 [M-H-COO]－。相同質(zhì)譜條件下，此化合物與具有傘型花內(nèi)酯母核的化合物5、6、14二級(jí)碎片裂解方式存在吻合，結(jié)合對(duì)照品及相關(guān)文獻(xiàn)[19]，鑒定此化合物為傘形花內(nèi)酯。

圖3 東莨菪內(nèi)酯正離子模式下的二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解途徑Fig 3 MS2 spectrum and fragmentation pathways of scopoline at positive ion mode

3.3 酰胺類

從飛蛾藤中鑒定出酰胺類化合物4 個(gè)，分別為化合物19、20、27、28，其中化合物19 與27、20 與28 分別為同分異構(gòu)體。負(fù)離子模式下，化合物19 分子離子峰為282.1136 [M-H]－，化合物27 分子離子峰為282.1135 [M-H]－，對(duì)應(yīng)化合物分子式為C17H17O3N，化合物19 的極性相較于化合物27 更大，初步推測(cè)化合物19 為N-反式-對(duì)香豆酰酪胺，化合物27 為（E）-N-2-（2，3-二羥基苯基）乙基肉桂酰胺?；衔?9 的二級(jí)質(zhì)譜中，282.1136 [M-H]－失去C8H8O，得到香豆酰胺部分的碎片離子162.0562 [M-H-C8H8O]－，162碎片離子繼續(xù)失去1 個(gè)酰胺基團(tuán)得到特征碎片離子119.0502 [M-H-C8H8O-CONH]－?；衔?7 的二級(jí)質(zhì)譜中282.1135 [M-H]－直接丟失C8H9O2，得到肉桂酰胺部分碎片離子145.0296 [M-HC8H9O2]－，或在162 碎片基礎(chǔ)上繼續(xù)丟失1 個(gè)酰胺基團(tuán)得到特征碎片離子119.0501 [M-H-C8H9O2-CONH]－。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[20-22]，推測(cè)化合物19 為N-反式-對(duì)香豆?；野罚衔?7 為（E）-N-2-（2，3-二羥基苯基）乙基肉桂酰胺?；衔?9可能裂解途徑見圖4。

圖4 N-反式-對(duì)香豆?；野坟?fù)離子模式下的二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解途徑Fig 4 MS2 spectrum and fragmentation pathways of N-transcoumaroyltyramine at negative ion mode

正離子模式下，化合物20 與28 分別推測(cè)為N-順式-對(duì)羥基苯乙基阿魏酰酪胺、N-反式-對(duì)羥基苯乙基阿魏酰酪胺。其中以N-順式-對(duì)羥基苯乙基阿魏酰酪胺為例，其準(zhǔn)分子離子峰為314.1384 [M ＋H]＋，碎片離子峰存在母離子直接丟失基團(tuán)得到的177.0546 [M ＋H-C8H9O2]＋或121.0648 [M ＋H-C10H11O3N]＋，參考本團(tuán)隊(duì)此前對(duì)光葉丁公藤的研究[14]，結(jié)合質(zhì)譜行為及保留時(shí)間，推斷化合物20為N-順式-對(duì)羥基苯乙基阿魏酰酪胺，化合物28為N-反式-對(duì)羥基苯乙基阿魏酰酪胺。

3.4 黃酮類

黃酮類化合物結(jié)構(gòu)特征明顯，質(zhì)譜特征較強(qiáng)，易產(chǎn)生甲基、羧基、糖苷等碎片離子峰。本研究共從飛蛾藤提取物中鑒定出3 個(gè)黃酮類成分，其中化合物24 在負(fù)離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為463.0083 [M-H]－，推測(cè)化合物分子式為C21H20O12，二級(jí)質(zhì)譜中此化合物連續(xù)失去1 個(gè)吡喃葡萄糖，1 個(gè)氫離子，1 個(gè)醛基，1 個(gè)氧離子，分別得到特征離子301.0342 [M-H-C6H10O5]－，300.0276 [M-H-C6H10O5-H]－，271.0248 [M-HC6H10O5-H-COH]－，255.0298 [M-H-C6H10O5-HCOH-O]－；或2-苯基色原酮部分發(fā)生Retro Diels-Alder 反應(yīng)，C 環(huán)裂解得到特征離子151.0037[M-H-C6H10O5-C8H6O3]－，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[23-24]，推測(cè)化合物24 為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，相關(guān)裂解途徑見圖5。此外，化合物25 與化合物24 母核相同，在負(fù)離子模式下二級(jí)質(zhì)譜中先失去1 分子蕓香糖，得到碎片離子301.0341 [M-Hrutulosyl]－，其后續(xù)裂解途徑與化合物24 相似，根據(jù)文獻(xiàn)參考[25]后，推測(cè)化合物25 為蘆丁?；衔?6 與化合物24 及25 的裂解方式相似，根據(jù)其分子離子峰303.0499 [M ＋H]＋，碎片離子峰285.0387 [M ＋H-H2O]＋，153.0184 [M ＋H-C8H6O3]＋，同時(shí)參考色譜行為及相關(guān)文獻(xiàn)[26]，推測(cè)其為槲皮素。

圖5 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷負(fù)離子模式下的二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解途徑Fig 5 MS2 spectrum and fragmentation pathways of quercetin-3-O-β-Dglucopyranoside at negative ion mode

3.5 其他類

化合物1 為生物堿類，因此采用響應(yīng)較好的正離子模式，其準(zhǔn)分子離子峰為144.1019 [M ＋H]＋，推測(cè)其分子式為C7H13NO2，通過高能碰撞后得到二級(jí)質(zhì)譜中各碎片離子，包括丟失1 個(gè)H2O 的碎片離子126.0914 [M ＋H-H2O]＋；或直接丟失C2H6O 得到的碎片離子98.0600 [M ＋H-C2H6O]＋，繼續(xù)失去1 個(gè)甲基得到的碎片離子84.0808 [M ＋H-C2H6O-CH2]＋，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道推測(cè)其為包公藤丙素或凹脈丁公藤堿[27]，但兩者為同分異構(gòu)體，色譜柱保留時(shí)間，裂解方式相似，無法完全根據(jù)現(xiàn)有信息區(qū)分，因此推測(cè)化合物1 為包公藤丙素或凹脈丁公藤堿?；衔? 為糖苷類化合物，在負(fù)離子模式下，一級(jí)質(zhì)譜出現(xiàn)分子離子峰359.0992 [M-H]－，推測(cè)對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)式為C15H20O10，二級(jí)質(zhì)譜中失去1 個(gè)葡萄糖殘基得到碎片離子197.0456 [M-H-C6H10O5]－后，苷元部分與丁香酸的裂解途徑相似，分別連續(xù)失去甲基、COH、甲基，產(chǎn)生碎片離子182.0219 [M-HC6H10O5-CH3]－，153.0556 [M-H-C6H10O5-CH3-COH]－，138.0323 [M-H-C6H10O5-CH3-COH-CH3]－，結(jié)合文獻(xiàn)[28-29]，推測(cè)其為丁香酸葡萄糖苷?；衔?0 為醇類化合物，在正離子模式下，其一級(jí)質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為165.0759 [M ＋H]＋，推測(cè)其對(duì)應(yīng)化合物分子式C6H12O5，二級(jí)質(zhì)譜碎片存在環(huán)烷烴的特征碎片簇峰165.0759 [M ＋H]＋，164.0284 [M ＋H-H]＋，120.0197 [M ＋H-C2H5O]＋，119.0189 [M ＋H-H-C2H5O]＋， 或105.9347 [M ＋H-C2H4O2]＋，104.9634 [M ＋H-HC2H4O2]＋，化合物16與化合物10質(zhì)譜行為基本相同，結(jié)合飛蛾藤屬有關(guān)報(bào)道[11]，推測(cè)化合物10或16 為1β，2β，3α，4β，5α-cyclohexanepentol或其同分異構(gòu)體?；衔?9 為木脂素類化合物，根據(jù)其負(fù)離子模式下的質(zhì)譜行為可知，其一級(jí)質(zhì)譜中分子離子峰為745.2682 [M-H]－，二級(jí)質(zhì)譜中連續(xù)丟失C7H7O2、C3H5O2、glucopyranosyl 得到碎片峰387.1433 [M-H-C7H7O2-glucopyranosyl-C3H5O2]－，繼續(xù)丟失1個(gè)H2O 得到369.1343 [M-HC7H7O2-glucopyranosyl-C3H5O2-H2O]－， 結(jié)合文獻(xiàn)[30]推測(cè)此化合物為4-{erythro-2-[3-（4-hydroxyl-3-methoxyphenyl）-3-O-β-D-glucopyranosyl-propan-1-ol}-O-medioresinol。

4 討論

本研究中目標(biāo)化合物存在較多的同分異構(gòu)體，如有機(jī)酸中的綠原酸及新綠原酸，香豆素中的東莨菪苷及異東莨菪苷，生物堿中的包公藤丙素或凹脈丁公藤堿。由于高分辨質(zhì)譜技術(shù)在一些同分異構(gòu)體構(gòu)型指認(rèn)上的局限性，通常需結(jié)合其他信息進(jìn)行區(qū)分。大多根據(jù)不同類型化合物的裂解方式進(jìn)行初步區(qū)分，但飛蛾藤中的同分異構(gòu)體多為同類型或相同母核，裂解方式相似，因此需結(jié)合色譜行為、參考文獻(xiàn)區(qū)分出峰順序，或根據(jù)相關(guān)報(bào)道的保留時(shí)間進(jìn)行推測(cè)鑒定，部分同分異構(gòu)體核對(duì)對(duì)照品進(jìn)一步確認(rèn)。這些同分異構(gòu)體化合物的發(fā)現(xiàn)，在豐富飛蛾藤成分的同時(shí)也給各成分的定性增加了難度。

本研究從飛蛾藤中共鑒定出30 個(gè)化合物，包含有機(jī)酸類、香豆素類、酰胺類、黃酮類和其他類，其中7 個(gè)化合物為飛蛾藤屬中首次報(bào)道。新報(bào)道的化合物中，咖啡酸、綠原酸甲酯及咖啡酸甲酯均為有機(jī)酸類的衍生物，具備良好的生物活性，其中咖啡酸可通過降低促炎因子的活性起到抗炎作用，其有機(jī)酯衍生物也具有潛在藥理活性[31-32]；甲酯化綠原酸衍生物能夠抑制巨噬細(xì)胞RAW 264.7 中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的分泌，抗炎活性強(qiáng)于綠原酸[33]；N-順式-對(duì)羥基苯乙基阿魏酰酪胺及N-反式-對(duì)羥基苯乙基阿魏酰酪胺此類酰胺類生物堿對(duì)NO 的釋放均有不同程度的抑制作用[34]。這些活性成分的發(fā)現(xiàn)可為飛蛾藤藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制的研究提供參考。

本研究利用UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS技術(shù)具有高靈敏度、高質(zhì)量精度、高分辨率等特點(diǎn)，結(jié)合現(xiàn)有關(guān)于飛蛾藤中已報(bào)道的成分，建立了一種快速分析鑒定飛蛾藤中化學(xué)成分的方法。結(jié)果表明有機(jī)酸類、香豆素類、黃酮類、酰胺類成分在飛蛾藤中含量豐富，且因各類型成分性質(zhì)、結(jié)構(gòu)差異，呈現(xiàn)出多數(shù)成分在負(fù)離子模式現(xiàn)響應(yīng)更好的現(xiàn)象。除此以外，正離子模式下存在1 個(gè)，負(fù)離子模式下存在2 個(gè)響應(yīng)度較高的化合物未推測(cè)鑒定出，表明飛蛾藤中尚有大量未知成分需要進(jìn)行系統(tǒng)地植物化學(xué)分離、鑒定。